עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81573992). אנו מודים אמילי ק לו ו Kathleen DiNapoli לעזרה בעריכת השפה שלהם.

הפרוטוקול עוקב אחר הנחיות טיפול בבעלי חיים של אוניברסיטת שנחאי של הרפואה הסינית המסורתית והוא אושר על ידי הניסוי בבעלי חיים שנחאי ועדת האתיקה של בעלי חיים. 1. פרוטוקול I: הכנת EXD <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תַחשִׁיב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניהול EXD לקבוצת טיפול של 10 בן שישה חודשים נקבה טביעת נקבה אזור בקרת (ICR) עכברים (0.02 ק&quot;ג / עכבר), 5 ימים בשבוע במשך 12 שבועות. הערה: סך של 1.702 EXDs נדרשים. בגלל EXDs נמדדים במרווחים נפרדים, בפועל בפועל, לנהל 2 EXDs. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חישוב עוצמת הקול של EXD להחיל לכל העכבר ( כלומר V = (0.1418 EXD / kg • יום) * (0.02 ק&quot;ג / עכבר) * 50 מ&quot;ל / EXD = 0.14 מ&quot;ל / עכבר ביום). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שְׁרִיָה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשים את כל חומרי הגלם של שני EXDs ( כלומר, Curculigo Orchioides גארטן (18 גרם), Herbaa Epimedii (18 גרם), Radix Morindae Officinalis (18 גרם), RAdix Angelicae Sinensis (18 גרם), קורטקס Phellodendri (12 גרם), ו Rhizoma Anemarrhenae (12 גרם), 96 גרם בסך הכל) לתוך מיכל עם מכסה. הערה: מומלץ להשתמש במכל קרמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מסיר את עשבי תיבול גלם עם 500 מ&quot;ל של מים מזוקקים במשך 1 שעות; המים צריכים לכסות את עשבי התיבול בסנטימטר. תן את כל עשבי תיבול ביסודיות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הראשון מרתח מים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את עשבי התיבול באמצעות תנור גז או תנור אינדוקציה על כוח גבוה עד המים רותח (כ 5 - 10 דקות, משך הזמן תלוי כוח החימום, מיכל, ואת כמות עשבי תיבול ומים). סובבו את ההספק למבשיל נמוך למשך 2 שעות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון ראשון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים כוס 500 מ&quot;ל כוס עם נייר סינון רגיל או עם גזה וכותנה. בזהירות לשפוך את מרתח לתוך כוס דרך המסנן. משאירים את העשבים במיכל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החזר את שארית הצמחים הנותריםN נייר הסינון למכולה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרתח מים שני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים מים מזוקקים למיכל עם עשבי תיבול; לתת לזה לכסות את עשבי תיבול על ידי סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.3. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון שני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 1.4.1 ו 1.4.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את מרתח השני לתוך אותו כוס. מערבבים יחד את שני decoctions הראשון. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוז <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הכוס על סיר גז עם גזה תיל ללא אסבסט ביניהם, לחמם את מרתח באמצעות רתיחה נמוכה, לאט לאט ברציפות עם מוט זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מרתח מפחית ל 200 מ&quot;ל, להעביר אותו כוס 500 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 1.7.1 עד מרתח מפחית ל 100 מ&quot;ל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסון וניהול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את מרתח מרוכז בקבוק זכוכית סטרילית. תן לזה להתקרר לחדר temperatu(RT). חנות ב 4 ° C אם תוך שבוע או ב -70 ° C לאחסון לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מחט gavage, לנהל 0.14 מ&quot;ל / עכבר של מרתח כדי ovariectomized (OVX) עכברים פעם ביום, 5 ימים בשבוע במשך 12 שבועות. </li></ol></li></ol> 2. פרוטוקול II: הכנת EXD המכיל סרום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תַחשִׁיב <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את המינון השווה של חולדה (RED) באמצעות 0.15 ק&quot;ג כמשקל הגוף של כל חולדה (חודש אחד): dB = (1/60) * (90/100) * (60 / 0.15) 1/3 = 0.111 EXD / ק&quot;ג / יום. הערה: סך של 10 מ&quot;ל של EXD המכיל בסרום יש צורך להכין 100 מ&quot;ל של המדיום תרבות (10% EXD המכילים בסרום). כל חולדה צפויה לספק 2 מ&quot;ל של סרום. לכן, 6 עכברושים (הפסד 20% נלקח בחשבון) נדרשים לניהול EXD פעם ביום במשך 3 ימים. מספר EXDs הוא: (0.111 EXD / kg • יום) * (0.15 ק&quot;ג / חולדה) * (6 חולדות) * (3 ימים) = 0.300 EXD. שוב, כי EXDs נמדדים במרווחים נפרדים,השתמש 1 EXD. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחשב את נפח EXD מיושם לכל חולדה ( כלומר, V = (0.111 EXD / ק&quot;ג יום) * (0.15 ק&quot;ג / חולדה) * (50 מ&quot;ל / EXD) = 0.83 מ&quot;ל / חולדה • יום). </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שְׁרִיָה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את חומרי הגלם עבור 1 EXD לתוך מיכל עם מכסה. מסיר את עשבי תיבול גלם במים מזוקקים במשך 1 שעות; המים צריכים לכסות את עשבי התיבול בסנטימטר. תן את כל עשבי תיבול ביסודיות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הראשון מרתח מים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מחממים את עשבי תיבול באמצעות סיר אינדוקציה על כוח גבוה עד המים רותח (כ 5 - 10 דקות, משך הזמן תלוי כוח החום, מיכל, ואת כמות עשבי תיבול ומים). סובבו את ההספק עד לשעה נמוכה עבור 2 שעות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון ראשון <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכסים כוס 500 מ&quot;ל כוס עם נייר סינון רגיל או עם גזה וכותנה. בזהירות לשפוך את מרתח לתוך כוס דרך המסנן. משאירים את העשבים במיכל. </li><li&gt; החזירו את שאריות העשבים על נייר הסינון למכולה. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מרתח מים שני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מוסיפים מים מזוקקים למיכל עם עשבי תיבול; לתת לזה לכסות את עשבי תיבול על ידי סנטימטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.4. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סינון שני <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלבים 2.5.1 ו -2.5.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יוצקים את מרתח השני לתוך אותו כוס כמו בשלב 2.4.1 ומערבבים את decoctions הראשון והשני יחד. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ריכוז <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את הכוס על כיריים גז עם גזה חוט ללא אסבסט ביניהם, לחמם את מרתח באמצעות רתיחה נמוכה, לאט לאט ברציפות עם מוט זכוכית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כאשר מרתח מפחית ל 100 מ&quot;ל, להעביר אותו כוס 100 מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזור על שלב 2.7.1 עד מרתח מפחית 50 מ&quot;ל. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אחסון וניהול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מעבירים את מרתח מרוכז לתוך סטריבקבוק זכוכית אייל. תן לזה להתקרר RT. חנות ב 4 ° C אם תוך שבוע או ב -70 ° C לאחסון לטווח ארוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Intragastrically לנהל 0.83 מ&quot;ל / חולדה פעם ביום במשך 3 ימים. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> EXD המכיל הכנה בסרום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את החולדות על ידי הזרקת intraperitoneally של 300 מ&quot;ל / 100 גרם של 80 מ&quot;ג / ק&quot;ג קטמין ו 10 מ&quot;ג / ק&quot;ג xylazine בשעה 1 אחרי הממשל האחרון של EXD. אישור הרדמה נכונה על ידי קמצוץ אצבע. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את העור ואת הצפק של החולדה מהבטן לתחתית בית החזה באמצעות אזמל (או מספריים הפעלה ישר). יצירת חתך של אורך ועומק של כ 5 ס&quot;מ ו 0.5 ס&quot;מ, בהתאמה. להזיז את הקרביים הבטן משמאל באמצעות נייר טישו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות נייר רקמות, להסיר את רקמת החיבור של אבי העורקים הבטן לחשוף בבירור את כלי השיט. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> צייר את הדם לאט מן אבי העורקים הבטן באמצעות מזרק 10 מ&quot;ל, 22-מד. להעביר אותוצינור 15 סטרילי סטרילי לאחר הסרת המחט; חולדה אחת יכולה לייצר 8-10 מ&quot;ל של דם. הערה: החולדה צריכה להיות חיה ( כלומר, עם אבי העורקים הבטן פועם) כאשר מתחילים את ציור הדם ומת לאחר סיום הציור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קריש הדם במצב זקוף במשך 30 - 60 דקות בחדר RT. צנטריפוגה ב XG 500-600 במשך 20 דקות. בזהירות במקום את כל supernatant (בסרום) בצינור 50 מ&quot;ל סטרילי אחד לערבב את כל הסרום (מבעלי חיים שונים) יחד. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בצע איטום החום על ידי דוגרים את הסרום באמבט מים 56 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות. מסנן את הסרום באמצעות מסנן מזרק עם 0.22 מיקרומטר נקבוביות גודל הידרופילי polyethersulfone קרום. השתמש בסרום טרי או לאחסן אותו ב -20 מעלות צלזיוס. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תכשירים המכילים תרופה בסרום (המשמשים בקבוצת הביקורת) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניהול כל חולדה עם נפח זהה של מלוחים (0.83 מ&quot;ל) פעם ביום במשך 3 ימים. השלבים האחרים הם כמו בשלב 2.9.</li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יישום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 10 מ&quot;ל של EXD המכיל בסרום או בסרום המכיל בסרום לכל 100 מ&quot;ל של המדיום, בתוספת 1% פניצילין סטרפטומיצין (PS) 23 . </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+evaluation+of+in+vitro+effects+and+interactions+of+active+fractions+in+a+Chinese+medicinal+formula+(Yaotongning+Capsule)+on+rat+chondrocytes.">Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes.</a> J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).</li><li>Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+the+seven+crude+drug+components+in+the+sleep-promoting+effect+of+Yokukansan.">The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan.</a> J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).</li><li>Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Medicinal+Categorization+of+Atractylodes+japonica+Koidz.+by+Using+Internal+Transcribed+Spacer+Sequencing+Analysis+and+HPLC+Fingerprinting+Combined+with+Statistical+Tools.">Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819 (2016).</li><li>Sheridan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+of+metabolic+fingerprinting+as+a+tool+for+the+modernisation+of+TCM+preparations.">The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations.</a> J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).</li><li>Planas, G. M., Kucacute, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contraceptive+Properties+of+Stevia+rebaudiana.">Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana.</a> Science. 162 (3857), 1007 (1968).</li><li>Tashino, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term="Serum+pharmacology"+and+"serum+pharmaceutical+chemistry":+from+pharmacology+of+Chinese+traditional+medicines+to+start+a+new+measurement+of+drug+concentration+in+blood.">"Serum pharmacology" and "serum pharmaceutical chemistry": from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood.</a> Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).</li><li>Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Guanxin+Shutong+capsule+drug-containing+serum+on+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+endothelial+dysfunction+through+nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidase+and+the+nitric+oxide+pathway.">Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway.</a> Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).</li><li>Fu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+Vivo+Stromal+Cell-Derived+Factor+1-Mediated+Differentiation+of+Mouse+Bone+Marrow+Mesenchymal+Stem+Cells+into+Hepatocytes+Is+Enhanced+by+Chinese+Medicine+Yiguanjian+Drug-Containing+Serum.">Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439 (2016).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+serum+pharmacology+in+evaluating+the+antitumor+effect+of+Fuzheng+Yiliu+Decoction+from+Chinese+Medicine.">Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine.</a> Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).</li><li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mechanism:+Erxian+Decoction,+a+Chinese+medicine+formula,+for+relieving+menopausal+syndrome.">A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome.</a> J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).</li><li>Sze, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Erxian+decoction,+a+Chinese+medicinal+formulation,+on+serum+lipid+profile+in+a+rat+model+of+menopause.">Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause.</a> Chin Med. 6, 40 (2011).</li><li>Zhong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+randomized,+double-blind,+controlled+trial+of+a+Chinese+herbal+formula+(Er-Xian+decoction)+for+menopausal+symptoms+in+Hong+Kong+perimenopausal+women.">A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women.</a> Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).</li><li>Wang, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steroidogenic+effect+of+Erxian+decoction+for+relieving+menopause+via+the+p-Akt/PKB+pathway+in+vitro+and+in+vivo.">Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo.</a> J Ethnopharmacol. , (2016).</li><li>Lin, L., Wu, S., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Clinical+observation+and+experimental+study+of+the+treatment+of+aplastic+anemia+by+warming+and+tonifying+the+spleen+and+kidney].">[Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney].</a> Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).</li><li>Nian, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiosteoporotic+activity+of+Er-Xian+Decoction,+a+traditional+Chinese+herbal+formula,+in+ovariectomized+rats.">Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats.</a> J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).</li><li>Qin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiosteoporotic+chemical+constituents+from+Er-Xian+Decoction,+a+traditional+Chinese+herbal+formula.">Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula.</a> J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).</li><li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+HNMR-based+metabonomics+study+of+postmenopausal+osteoporosis+and+intervention+effects+of+Er-Xian+Decoction+in+ovariectomized+rats.">A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats.</a> Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).</li><li>Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Clinical+observation+of+bushen+er'xian+decoction+in+treating+premature+ovarian+failure].">[Clinical observation of bushen er'xian decoction in treating premature ovarian failure].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).</li><li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-angiogenic+activity+of+Erxian+Decoction,+a+traditional+Chinese+herbal+formula,+in+zebrafish.">Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish.</a> Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).</li><li>Chu, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vitro+and+in+vivo+investigation+of+the+antimetastatic+effects+of+a+Chinese+medicinal+decoction,+erxian+decoction,+on+human+ovarian+cancer+models.">An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models.</a> Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).</li><li>Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Er-Xian+Decoction,+a+traditional+Chinese+herbal+formula,+intervening+early+in+hypothalamic-pituitary+axis+of+male+rats+with+delayed+puberty.">Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty.</a> Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).</li><li>Miao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Experimental animals and technology. 1997, 145 (1997).</li><li>Soleimani, M., Nadri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+protocol+for+isolation+and+culture+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+bone+marrow.">A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow.</a> Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).</li><li>Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Er-Xian+Decoction+Stimulates+Osteoblastic+Differentiation+of+Bone+Mesenchymal+Stem+Cells+in+Ovariectomized+Mice+and+Its+Gene+Profile+Analysis.">Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis.</a> Stem Cells International. 2016, 4079210 (2016).</li><li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).</li><li>Wu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+determination+of+seven+flavonoids+in+dog+plasma+by+ultra-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry+and+its+application+to+a+bioequivalence+study+of+bioactive+components+in+Herba+Epimedii+and+Er-Xian+Decoction.">Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction.</a> J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).</li><li>Hu, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+major+chemical+constituents+and+their+metabolites+in+rat+plasma+and+various+organs+after+oral+administration+of+effective+Erxian+Decoction+(EXD)+fraction+by+liquid+chromatography-mass+spectrometry.">Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry.</a> Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).</li><li>Xue, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+and+interaction+of+icariin,+curculigoside,+and+berberine+in+er-xian+decoction,+a+traditional+chinese+medicinal+formula,+on+osteoclastic+bone+resorption.">Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption.</a> Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).</li><li>Nair, A. B., Jacob, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+practice+guide+for+dose+conversion+between+animals+and+human.">A simple practice guide for dose conversion between animals and human.</a> J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+the+traditional+Chinese+medicine+xuesaitong+on+intestinal+ischemia-reperfusion+injury+in+rats.">Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats.</a> Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).</li><li>Li, Z., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+methods+for+Chinese+herbs+serum+pharmcology.">On the methods for Chinese herbs serum pharmcology.</a> Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).</li><li>Jiang, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating-blood+and+dispelling-toxin+on+ox-LDL-induced+inflammatory+factors'+expression+in+endothelial+cells.">Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors' expression in endothelial cells.</a> Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).</li><li>Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Effect+of+Chinese+herbal+drug-containing+serum+for+activating+blood,+activating+blood+and+dispelling+toxin+on+TNF-alpha-induced+adherence+between+endothelial+cells+and+neutrophils+and+the+expression+of+MAPK+pathway].">[Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway].</a> Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).</li><li>Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Ling+Qi+Juan+Gan+capsule+drug-containing+serum+on+PDGF-induced+proliferation+and+JAK/STAT+signaling+of+HSC-T6+cells].">Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells].</a> Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).</li><li>Li, Y. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Some+issues+in+methology+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology].">[Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology].</a> Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[A+review+of+Chinese+herbs+serum+pharmcology+methodological+study].">[A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study].</a> Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).</li><li>Zhang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[Issues+and+strategies+for+study+of+serum+pharmcology+in+oncology].">[Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology].</a> Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).</li></ol>

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

בשנים האחרונות הוקדשה תשומת לב רבה יותר לתרופות צמחיות, סוג אחד של רפואה אלטרנטיבית שהוחל בסביבה הקלינית בעולם המזרחי במשך אלפי שנים. שונה מן &quot;הספסל למיטה&quot; דפוס של הרפואה המודרנית, צמחי מרפא מסורתיים הראשון דורשים את &quot;המיטה לספסל&quot; דפוס להסביר את המנגנונים ש...

עניין במחקר ויישום של צמחי מרפא מסורתיים כיום גדל. בניגוד לתרופות מודרניות, שבהן מרכיבים כימיים מוגדרים, נוסחאות צמחיות כוללות חומרים לא ידועים ודורשות תהליכי מיצוי על מנת לאפשר את אספקת המרכיבים הפעילים שלהם. למרות שמחקרים רבים מנסים לבחור תרכובת קטנה אחת עם מבנה ידוע כמייצג של כל העשב או נוסחת צמחים, לא יעילות pharmacological ולא מנגנונים יכול להיחשב שווה 1 , 2 . בעוד טביעת אצבע מאפשרת ניתוח של המרכיבים של צמחי מרפא מורכבים, כמה המרכיבים עדיין לא ניתח בבירור, מה שמוביל אתגר כאשר שילוב של כל תמציות עבור מחקר 3 . האינטראקציות של המרכיבים / תמציות רבים מתווכים את ההשפעות הטיפוליות של תרופות צמחיות. כדי לשמור על יתרון זה, לחלץ את הטופס המסורתי decoct<html> יון - עדיין בשימוש נרחב במרפאה. מאז הליך החילוץ יש השפעה רבה על יעילות טיפולית, פרוטוקול סטנדרטי של מרתח מים מסורתי הוא הכרחי, במיוחד עבור vivo מחקרים 4 , 5 . מצד שני, כאשר חוקרים מנגנונים פרמקולוגיים, ניהול של צמחים decoctions במהלך במבחנה או vivo לשעבר מחקרים גם אתגר. הרעיון של סרום המכיל סמים הוצע לראשונה על ידי Tashino בשנת 1988 6 . מאז, מספר גדל והולך של חוקרים יש להחיל אותו על תרופות צמחיות 7 , 8 , 9 . למרות שלשימוש בסרום המכיל סמים יש מגבלות מסוימות, כגון השפעתם של מרכיבים מסוימים של הסרום, היא עדיין נחשבת כשיטה המחקה מקרוב את התנאים הפיזיולוגיים. &quot;Jove_content&quot;&gt; תמצית אר-שיאן פותחה בתחילת שנות החמישים כדי להקל על תסמיני גיל המעבר 10 , 11 , 12 , 13 . זה גם הוחל על הטיפול של anaemia 14 , אוסטיאופורוזיס גיל המעבר 15 , 16 , 17 , כישלון שחלות מוקדמות 18 , סרטן השד 19 , סרטן השחלות 20 , בגיל ההתבגרות מאוחרת 21 . כאן, אנו מציגים פרוטוקולים מפורטים להכנת שני ero-xian מרתח (EXD) ואת סרום המכיל סרום. בנוסף, אנו מתארים את היישום של EXD ו- EXD המכילים בסרום מודלים מוראופאוס אוסטיאופורוטיות. EXD מורכב מ 9 גרם כל אחד Orcioides Orchioides Curculigo , Herbaa Epimedii </eM&gt;, Radix Morindae Officinalis , ו- Radix Angelicae Sinensis ו- 6 גרם כל אחד מקליפת Phellodendri ו- Rhizoma Anemarrhenae למטופל מבוגר ליום. המינון המקביל לעכבר הוא 0.1418 EXD / kg / day בהתבסס על המשוואה הבאה 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA ו- dB מתייחסים למינון לכל משקל גוף (mg / kg) של האדם והעכבר, בהתאמה. המינון, במ&quot;ג / ק&quot;ג, מוחלף במספר EXD / kg. RA ו- RB מייצגים את גורם הגוף האנושי ואת גורם הגוף העכבר, בהתאמה, אשר פרופורציונלי ל (שטח משטח הגוף (m 2 ) / משקל גוף (ק&quot;ג)) 2/3 (ראה טבלה 1 ). WA ו WB מצביעים על bodyweight (ק&quot;ג) של האדם והעכבר, בהתאמה.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="651">
	
	<tbody>
		<tr height="165">
			<td height="165" style="height:165px;width:216px;">Curculigo orchioides Gaertn (9&#8201;g), Herbaa Epimedii (9&#8201;g), Radix Morindae Officinalis (9&#8201;g), Radix Angelicae Sinensis (9&#8201;g), Cortex Phellodendri (6&#8201;g), and Rhizoma Anemarrhenae (6&#8201;g)</td>
			<td style="width:149px;">Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN)</td>
			<td style="width:119px;">160922</td>
			<td style="width:167px;">EXD components</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:216px;">Filter paper</td>
			<td style="width:149px;">GElifesciences</td>
			<td style="width:119px;">99-103-952</td>
			<td style="width:167px;">Filter EXD decoction before concentration</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Imprinting Control Region (ICR) mice</td>
			<td style="width:149px;">Shanghai Laboratory Animal Center</td>
			<td style="width:119px;">SCXK 2007-0005</td>
			<td style="width:167px;">In vivo study</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:216px;">Sprague Dawley rats</td>
			<td style="width:149px;">Shanghai Laboratory Animal Center</td>
			<td style="width:119px;">SCXK 2007-0005</td>
			<td style="width:167px;">EXD-containing serum preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:216px;">Syringe filter</td>
			<td style="width:149px;">Millipore</td>
			<td style="width:119px;">SLGP033RB</td>
			<td style="width:167px;">0.22 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr height="61">
			<td height="61" style="height:61px;width:216px;">gavage needles (10 ml)</td>
			<td style="width:149px;">Shanghai BO Ge trade sales department</td>
			<td align="right" style="width:119px;">59104274</td>
			<td style="width:167px;">Adminstration of EXD</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;">Ketamine (80 mg/kg)&#160;</td>
			<td style="width:149px;">Fujian Gutian Pharma Co. Ltd</td>
			<td style="width:119px;">H35020148</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Xylazine (10 mg/kg)</td>
			<td style="width:149px;">Sunway Pharma Co. Ltd</td>
			<td style="width:119px;">CB07591</td>
			<td>Anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="81">
			<td height="81" style="height:81px;width:216px;">Dulbecco&#8217;s modification of Eagle&#8217;s medium Dulbecco (DMEM) culture medium</td>
			<td style="width:149px;">Gibco</td>
			<td style="width:119px;">12800-116</td>
			<td style="width:167px;">DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Streptomycin</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">1277</td>
			<td style="width:167px;">100 &#181;g / ml</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Penicillin</td>
			<td style="width:149px;">Sigma</td>
			<td align="right" style="width:119px;">4687</td>
			<td style="width:167px;">100 &#181;g / ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

preparation of herbal medicine: er-xian decoction and er-xian-containing serum for in vivo and in vitro experiments

צמחי מרפא מסורתיים, רפואה אלטרנטיבית בקליניקה הקלינית, זכו לתשומת לב מוגברת בשנים האחרונות. לפני המסירה לגוף, הליך החילוץ הנוסף נדרש בדרך כלל לשחרר את המרכיבים הפעילים מעשבי תיבול. מרתח מים הוא הליך החילוץ הקלאסי, כי הוא עדיין בשימוש נרחב בהגדרות הקליניות. כאן, אנו מציעים פרוטוקול מפורט עבור er-xian מרתח (EXD) על מנת ליישם decoctions צמחים למחקרים ניסיוניים. חישוב המינון המתאים לבעלי חיים מתואר, כמו גם את ארבעת השלבים העיקריים של EXD: השריה, מרתח מים, סינון, וריכוז. בנוסף, EXD המכיל בסרום הוא הציג חולדות כאמצעי אימות במבחנה . הנה, חולדות היו מנוהלים בעל פה EXD במשך שלושה ימים. לאחר מכן נאספו דגימות דם, הופעלו, צנטריפוגה, וסוננו. סרום, מדולל עם המדיום התרבות, ניתן להשתמש כדי לטפל בתאים או רקמות ב VJ less לדוגמה, EXD הוחל הן על vivo והן במבחנה מחקרים הוכיח כי EXD משפר osteogenesis. פרוטוקול זה יכול לשמש הפניה להכנת ויישום של תרופות צמחיות.

ההשפעה של EXD על צפיפות העצם של עכברי OVX מכתבים של heatoxylin ו eosin (H &amp; E) של סעיף החוליה המותני מראה גדל trabeculae העצם לאחר טיפול EXD ב vivo ( איור 1 א , פאנל ימין) לעומת אלה בקבוצת OVX ( איור 1 א</str...

Watch this Scientific Journal Video about Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments at JoVE.com

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

כאן, אנו מציגים את ההכנה של מרתח א-שיאן (EXD) בארבעה שלבים - השריה, מרתח, סינון וריכוז - ומדגימים את הניהול של סרום מכין EXD מוכן לחולדות. שיטות אלה חלים על in vivo ובמחקר חוץ גופית של decoctions צמחים כגון תרופות סיניות מסורתיות.

הכנה של צמחי מרפא: Er-Xian מרתח ו Er-Xian המכיל בסרום עבור<em&gt; בויבו</em&gt;<em&gt; במבחנה</em&gt; ניסויים

Traditional herbal medicine, an alternative medicine in the clinical setting, has received increased attention in recent years. Before delivery to the ...

preparation-herbal-medicine-er-xian-decoction-er-xian-containing

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

10.9K Views.  Shanghai University of Traditional Chinese Medicine.  כאן, אנו מציגים את ההכנה של מרתח א-שיאן (EXD) בארבעה שלבים - השריה, מרתח, סינון וריכוז - ומדגימים את הניהול של סרום מכין EXD מוכן לחולדות. שיטות אלה חלים על in vivo ובמחקר חוץ גופית של decoctions צמחים כגון תרופות סיניות מסורתיות. 

Video: Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

בF-MRI 19 vivo למעקב סלולרי

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Carotid Artery Infusions for Pharmacokinetic and Pharmacodynamic Analysis of Taxanes in Mice

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study model. As the use of mouse models are often a vital step in preclinical drug discovery and drug development1-8, it is necessary to design a system to introduce drugs into mice in a uniform, reproducible manner. Ideally, the system should permit the collection of blood samples at regular intervals over a set time course. The ability to measure drug concentrations by mass-spectrometry, has allowed investigators to follow the changes in plasma drug levels over time in individual mice1, 9, 10. In this study, paclitaxel was introduced into transgenic mice as a continuous arterial infusion over three hours, while blood samples were simultaneously taken by retro-orbital bleeds at set time points. Carotid artery infusions are a potential alternative to jugular vein infusions, when factors such as mammary tumors or other obstructions make jugular infusions impractical. Using this technique, paclitaxel concentrations in plasma and tissue achieved similar levels as compared to jugular infusion. In this tutorial, we will demonstrate how to successfully catheterize the carotid artery by preparing an optimized catheter for the individual mouse model, then show how to insert and secure the catheter into the mouse carotid artery, thread the end of the catheter out through the back of the mouse&#8217;s neck, and hook the mouse to a pump to deliver a controlled rate of drug influx. Multiple low volume retro-orbital bleeds allow for analysis of plasma drug concentrations over time.

This method was developed with the goal of delivering a steady drug solution via the carotid artery, to assess the pharmacokinetics of novel drugs in mouse models.

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

When proposing the use of a drug, drug combination, or drug delivery into a novel system, one must assess the pharmacokinetics of the drug in the study ...

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same pathway, are likely to fail. Emphasis must be placed upon the inhibition of pathways that are responsible for intrinsic and/or adaptive resistance to therapy. An active field of investigation is the development and testing of DNA repair inhibitors that promote the action of, and prevent resistance to, commonly used chemotherapy and radiotherapy. We used a novel protocol to evaluate the effectiveness of BRCA2 inhibition as a means to sensitize tumor cells to the DNA damaging drug cisplatin. Tumor cell metabolism (acidification and respiration) was monitored in real-time for a period of 72 hr to delineate treatment effectiveness on a minute by minute basis. In combination, we performed an assessment of metastatic frequency using a chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM) model of extravasation and invasion. This protocol addresses some of the weaknesses of commonly used in vitro and in vivo methods to evaluate novel cancer therapy regimens. It can be used in addition to common methods such as cell proliferation assays, cell death assays, and in vivo murine xenograft studies, to more closely discriminate amongst candidate targets and agents, and select only the most promising candidates for further development.

Evaluating the Effectiveness of Cancer Drug Sensitization In Vitro and In Vivo

Here, real-time monitoring of tumor cell metabolism, combined with an in vivo chicken embryo chorio-allantoic membrane (CAM) model of metastasis, are used to evaluate novel anti-cancer targets/agents for their ability to sensitize tumor cells to DNA damaging chemotherapeutics.

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות<em&gt; במבחנה</em&gt; ו<em&gt; In vivo</em

Due to the high level of heterogeneity and mutations inherent in human cancers, single agent therapies, or combination regimens which target the same ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.
First we describe how to generate subcutaneous tumors in mice, using antigen-negative cell lines as negative controls and antigen-positive cells as positive controls in the same mice for intraindividual comparison. We outline how to administer intravenously near-infrared fluorophore labelled (AlexaFluor680) antigen-specific nanobodies and conventional antibodies. In vivo imaging was performed with a small-animal NIRF-Imaging system. After the in vivo imaging experiments the mice were sacrificed. We then describe how to prepare the tumors for parallel ex vivo analyses by flow cytometry and fluorescence microscopy to validate in vivo imaging results.
The use of the near-infrared fluorophore labelled nanobodies allows for non-invasive same day imaging in vivo. Our protocols describe the ex vivo quantification of the specific labeling efficiency of tumor cells by flow cytometry and analysis of the distribution of the antibody constructs within the tumors by fluorescence microscopy. Using near-infrared fluorophore labelled probes allows for non-invasive, economical in vivo imaging with the unique ability to exploit the same probe without further secondary labelling for ex vivo validation experiments using flow cytometry and fluorescence microscopy.

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence xenograft imaging experiments in mice using fluorophore labelled nanobodies and conventional antibodies.

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס<em&gt; In vivo</em&gt; ניסויי גידול xenograft NIRF הדמיה בעכברים באמצעות<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cytometry הזרימה ומיקרוסקופי

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות<em&gt; In vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic study in the liver. Here, numerous assays are described to comprehensively measure the phenotype and parameters of hepatic steatosis in mouse and hepatocyte models. 
Combining the physiological, histological, and biochemical methods, this system can be used to assess the progress of hepatic steatosis. In vivo, the measurements of body weight and nuclear magnetic resonance (NMR) provide a general understanding of mice in a non-invasive manner. Hematoxylin and Eosin (H&amp;E) and Oil Red O staining determine the histological morphology and lipid deposition of liver tissue under nutrient overload conditions, such as high-fat diet feeding. Next, the total lipid contents are isolated by chloroform/methanol extraction, which are followed by a biochemical analysis for triglyceride and cholesterol. Moreover, mouse primary hepatocytes are treated with high glucose plus insulin to stimulate lipid accumulation, an efficient in vitro model to mimic diet-induced hyperglycemia and hyperinsulinemia in vivo. Then, the lipid deposition is measured by Oil Red O staining and chloroform/methanol extraction. Oil Red O staining determines intuitive hepatic steatotic phenotypes, while the lipid extraction analysis determines the parameters that can be analyzed statistically. The present protocols are of interest to scientists in the fields of fatty liver diseases, insulin resistance, and type 2 diabetes.

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Here, optimized methods to generate in vivo and in vitro models of hepatic steatosis and to analyze the steatotic phenotypes and related physiological parameters are described.

ניתוח אופטימלי של<em&gt; In vivo</em&gt; ו<em&gt; במבחנה</em&gt; כבדית steatosis

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene and cell therapies are highly promising alternative approaches for CVD treatment. However, the broad clinical application of gene therapy is greatly limited by the lack of suitable gene delivery systems. The development of appropriate gene delivery vectors can provide a solution to current challenges in cell therapy. In particular, existing drawbacks, such as limited efficiency and low cell retention in the injured organ, could be overcome by appropriate cell engineering (i.e., genetic) prior to transplantation. The presented protocol describes the efficient and safe transient modification of endothelial cells using a polyethyleneimine superparamagnetic magnetic nanoparticle (PEI/MNP)-based delivery vector. Also, the algorithm and methods for cell characterization are defined. The successful intracellular delivery of microRNA (miR) into human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) has been achieved without affecting cell viability, functionality, or intercellular communication. Moreover, this approach was proven to cause a strong functional effect in introduced exogenous miR. Importantly, the application of this MNP-based vector ensures cell magnetization, with accompanying possibilities of magnetic targeting and non-invasive MRI tracing. This may provide a basis for magnetically guided, genetically engineered cell therapeutics that can be monitored non-invasively with MRI.

Preparation and In Vitro Characterization of Magnetized miR-modified Endothelial Cells

This manuscript describes the efficient, non-viral delivery of miR to endothelial cells by a PEI/MNP vector and their magnetization. Thus, in addition to genetic modification, this approach allows for magnetic cell guidance and MRI detectability. The technique can be used to improve the characteristics of therapeutic cell products.

הכנה<em&gt; במבחנה</em&gt; אפיון ממוגנטים miR-modified לתאי אנדותל

To date, the available surgical and pharmacological treatments for cardiovascular diseases (CVD) are limited and often palliative. At the same time, gene ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Preparation Of Gushukang (GSK) Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang (GSK) granules, a marketed prescription in China, have bone-protective effects in treating POP. Before administration to the body, one standard preparation procedure is commonly required, which aims to promote the release of active constituents from raw herbs and enhance the pharmacological effects as well as therapeutic outcomes. This study proposes a detailed protocol for using GSK granules in in vivo and in vitro experimental assays. The authors first provide a detailed protocol to calculate the animal-appropriate dosages of granules for in vivo investigation: weighing, dissolving, storage, and administration. Second, this article describes protocols for micro-CT scanning and the measurement of bone parameters. Sample preparation, protocols for running the micro-CT machine and quantification of bone parameters were evaluated. Third, serum-containing GSK granules are prepared, and drug-containing serum is extracted for in vitro osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. GSK granules were intragastrically administered twice per day to rats for three consecutive days. Blood was then collected, centrifuged, inactivated, and filtered. Finally, serum was diluted and used for performing osteoclastogenesis and osteoblastogenesis. The protocol described here can be considered a reference for pharmacological investigations of herbal prescription medicines, such as granules.

Preparation Of Gushukang GSK Granules for In Vivo and In Vitro Experiments

This article provides a detailed protocol for preparing a working solution of Gushukang granules for animal studies and GSK granule containing serum for in vitro experiments. This protocol can be applied to pharmacological investigations of herbal medicines as well as prescriptions for both in vivo and in vitro experiments.

הכנת הגרגירים של גושוקאנג (GSK) בגרגרים בVivo ובניסויים חוץ-גופית

Traditional Chinese herbal medicine plays a role as an alternative method in treating many diseases, such as postmenopausal osteoporosis (POP). Gushukang ...

הכנה של צמחי מרפא: Er-Xian מרתח ו Er-Xian המכיל בסרום עבור

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

בF-MRI ¹⁹ vivo למעקב סלולרי

חליטות עורק הראשי לpharmacokinetic וpharmacodynamic ניתוח של taxanes בעכברים

הערכת היעילות של תרופות למלחמה בסרטן רגישות

אימות של Nanobody ונוגדנים מבוסס

טלמטריה תוך רחמי למדידת לחץ עכבר התכווצות

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

ניתוח אופטימלי של

הכנה

במבחנה and In Vivo זיהוי של Mitophagy ב תאים אנושיים, C. Elegansועכברים

הכנת הגרגירים של גושוקאנג (GSK) בגרגרים בVivo ובניסויים חוץ-גופית