המחברים רוצה להודות המתנדבים בשל השתתפותם מחקרים אלה ואת הצוות הכירורגי במרכז הרפואי בבוסטון למתן ביופסיות רקמת שומן. ד ר Gokce נתמך על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) מענקים HL081587, HL114675 ו- HL126141. ד ר Farb נתמך על-ידי NIH להעניק K23 HL135394.

הפרוטוקול ואת דוגמאות המתוארים כאן אושרו על ידי בוסטון אוניברסיטת הנהלת בית הספר של רפואה מוסדיים סקירה (IRB, פרוטוקול #H-25644), נערכו בהתאם הצהרת הלסינקי. כל הנושאים הניתנים בכתב הסכמה מדעת לפני השתתפות.
 1. ההכנה של פתרונות, מיקרו-זכוכית קנולות <ol><li>הכן הפתרון מלוחים חומצי 4-2-hydrosyethyl-1-piperazineethanesulfonic (HEPES). עבור 1 ליטר, להמיס 8.059 g NaCl, 0.298 גרם אשלגן כלורי, 0.296 g MgSO 4 &#8226; 7 שעות 2 O, 0.235 g CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O. 0.16 g ח' 2 PO 4, 0.01 גרם EDTA, 1.081 g D-גלוקוז ו- 2.383 g HEPES חומצה ב- 950 מ"ל של יונים . מים. לבצע את עוצמת הקול 1 ליטר מים יונים. להתאים את ה-pH ל 7.4 באמצעות NaOH. HEPES מאגר ניתן לאחסן 7 ימים ב- 4 מעלות צלזיוס</li>
	<li>להכין את 20 x מלאי מאגר מלח. עבור 1 ליטר, להוסיף 143.8 g NaCl, g 7.0 אשלגן כלורי, 5.9 גרם MgSO 4 ו- g 7.4 CaCl 2 &#8226; 2 H 2 O לתוך 900 מ ל מים מזוקקים. לבצע הווליום 1 ליטר מים יונים. לאחסן פתרון מניות ב- 4 מעלות צלזיוס</li>
	<li>להכין את 20 x מלאי מאגר. 1 ליטר, הוסיפו 26.8 g NaHCO 3 ו- 0.2 גר' EDTA·2H 2 O לתוך 900 מ ל מים יונים. לבצע הווליום 1 ליטר מים יונים. לאחסן פתרון מניות ב- 4 מעלות צלזיוס</li>
	<li>להכין את הפתרון קרבס לשמש במהלך הניסויים פיזיולוגיים. 1 ליטר, להוסיף 900 מ ל מים יונים, 50 מ של 20 x מלאי מאגר, 50 מ של 20 x בופר מלח, 0.99 g D-גלוקוז ו- 0.16 g ח' 2 PO 4. להתאים את ה-pH ל 7.4 באמצעות HCl. כדי לשמור על רמת החומציות של המאגר, מערבבים כל הזמן, לכסות עם פרפין או בועה ברציפות.
	<ol><li>סימון ה-pH בכל 20 דקות להפוך את הפתרון קרבס טריים מדי יום.</li>
	</ol></li> <li>להפוך קנולות מיקרו-זכוכית עם קוטר פנימי של 40-240 מיקרומטר באמצעות של פולר המחט זמינים מסחרית/פיפטה. הגודל של זכוכית קנולות נקבע לפי גודל הקוטר הפנימי של כלי הדם מבודדים (50-350 מיקרומטר). לחלופין, לרכוש מיקרו-זכוכית קנולות של גודל שנקבע מראש.</li>
</ol> 2. הכנה של ריאגנטים <ol><li>הכן האצטילכולין (אחח, 10 -2 מ', פתרון מניות). להמיס 18.29 g ביונים 10 מ"ל מים. חנות aliquots 1 מ"ל של מניות פתרון (10 -2 מ') ב- 80 ° c ביום של הניסוי באופן סדרתי לדלל להשיג ריכוז העבודה הבאות: 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8, 10 -9 מ'</li>
	<li>להכין את papaverine (2 x 10 -2 מ', פתרון מניות). להמיס 0.07517 g ביונים 10 מ"ל מים. הכינו 10 aliquots µL של פתרון מניות וחנות ב-80 ° ג באופן סדרתי לדלל כדי לקבל 10 -4, 10 -5, 10 -6, 10 -7, 10 -8 מ' ביום של הניסוי-</li>
	<li>להכין את endothelin-1 (ET-1, 2 x 10 -5 מ', פתרון מניות). להמיס 50 µg endothelin 1-1 מ של 1% BSA/PBS. לאחסן 1 מ"ל aliquots של פתרון מניות (2 x 10 -5 מ') ב- 80 ° c ביום של הניסוי לדלל בריכוז העבודה 10 -10 מ' ביום של ניסוי.</li>
	<li>לאחסן ריאגנטים גם-20 ° C או עד-80 מעלות בהתאם לסוג מקפיא זמין, אך לא יותר מ 6 חודשים.</li>
</ol> 3. רקמת שומן איסוף והכנת כלי <ol><li>לגייס גברים שמנים ונשים (מדד מסת הגוף (BMI) &#8805; 35 kg/m ², גיל &#8805; 18 שנה) שהשתתפו בתוכנית ניתוח בריאטרי ב בוסטון רפואי מרכז (BMC). סך של נושאים 40 השתתפו בניסויים אלה.</li>
	<li>לאסוף דגימות רקמת שומן תת עורית של הקרביים במהלך ניתוחים בריאטרי המתוכנן על ידי המנתח מבצע את.
	<ol><li>הקציר תת עורית רקמות adipose מ לקיר הבטן התחתונה, מהבטן שומן שנשאב omentum greater, בהתאמה. גודל המדגם טיפוסי רקמת שומן משתנה בין 3-10 מ ג של רקמת.</li>
		<li>המקום רקמות באופן מיידי תוך קר HEPES מאגר פתרון עם pH של 7.4 וחנות ב 4 ° C עבור עד 24 ח' 
		הערה: בנוסף, אדיפוז רבים ניתן לקבל מאנשים רזה כמו גם במהלך סוגים אחרים של ניתוחים כגון בקע תיקונים או ניתוח פלסטי, וניתן גם ביופסיה מן בתחנה תת עורית באמצעות ביופסיה טרנס-עורית כרית שומן בטן < מה המצב class = "xref" > 6.</li>
	</ol></li> <li>באמצעות מיקרוסקופ לנתיחה רקמות, ומספריים מיקרו מיקרו-מלקחיים, הסר בזהירות שמסביב שומן ורקמות רבים אדיפוז קטן (50-350 מיקרומטר intraluminal קוטר, 2-3 מ מ אורך).</li>
	<li>לקשור את כל הענפים על רבים באמצעות ניילון קטנה או התפרים משי לפני cannulating על מכשור ניסוי ברטט נימי זכוכית. בזהירות לנתח רבים מאז נזק אפילו מזערי של הקיר arteriole גורם משמעותי לשינויים פונקציונליים.
	<ol><li>מזער חשיפה כלי אור וחום כפי שהוא עלול לגרום vasodilation. מכיוון שזה יכול להיות לפעמים קשה להבחין רבים מן venules, לזהות את הטון הגודל של שריר חלק של כלי על ידי קטיעת את הטיפים של כלי. רבים הם בדרך כלל קטנים יותר ומדגימים צליל גדול יותר בהשוואה venules.</li>
	</ol></li> <li>להכין את החדר אורגן. לאט לאט למלא פיפטות נימי זכוכית של צינורות גומי עם הפתרון קרבס באמצעות מזרק 10 מ ל-</li>
	<li>פעם אבובים מגומי מלא פיפטות נימי זכוכית טובע בפתרון קרבס בתוך תא איברים, נקרר רבים וישבו לבטח על פיפטות מאובטחת ו לקשור בשני קצוות arteriole עם ניילון או משי תפר קשרים בזהירות.</li>
	<li>למלא תא איברים עם פתרון קרבס עד 2 מ"ל.</li>
	<li>לאבטח לחדר עוגב על הבמה עם המיקרוסקופ הפוכה (הגדלה 10 X / 0.25 המטרה), מצלמת וידאו-</li>
	<li>להפעיל בתוכנת איתור קצה המוזרם ב בזמן אמת בקצב דגימה של 1 קילו-הרץ (מסגרות לשנייה 1).</li>
	<li>לחבר צד אחד של הצנרת מווסת הפתרון קרבס לחץ מילוי מאגרי חינם של microbubbles, כמו בועות ניתן להציג שגיאה ניסיוני. להתחבר לצד השני של צינורות בלחץ תא איברים.</li>
	<li>להתחבר קרבס פתרון מלא לחץ המאגרים מתמר לחץ עם אבובים נקי.</li>
	<li>לשלוט זרימה אינטרה-luminal על ידי ויסות הגובה של אלה שני מאגרים; לכן, כאשר מאגרי ממוקמים באותו גובה, אין זרימת אינטרה-luminal תתרחש.</li>
	<li>לאחר כל התהליכים האלה, הושלמו, להפעיל חימום לחסום תוכנית תוכנה כדי לשמור על טמפרטורה 37 ° ג ברציפות perfuse את הכלי עם פתרון קרבס, לאוורר עם תערובת גז של 5% CO 2, 21% O 2 ו- 74% N 2 7 , 8 לאורך כל תהליך ניסיוני.</li>
	<li>כדי להשיג את הלחץ הרצוי בתוך מעבד הדה לומן של כלי מבודד להגדיל בהדרגה את הלחץ intraluminal (5 מ מ כספית, כל 5 דקות) באמצעות יחידת בקרת לחץ בחלונית ' myo ממשק, כך בקצב איטי כדי למנוע נזק שכבת אנדותל. 
	הערה: לאחר הלחץ מגיע ל- 60 מ מ כספית, תקופה equilibration 20-30 דקות נדרשת כדי לייצב את הספינה. כל תפקוד כלי הדם מחקרים מבוצעים ב 60 מ מ כספית ל 37 ° C ב- pH 7.4. 7</li></ol> 4. הערכה של אדיפוז פונקציה Microvascular הערה: באופן כללי, יכול להיות elicited arteriole אדיפוז תלויי-אנדותל vasodilation בתגובה פיזיולוגית (זרימה-induced), גירויים תרופתי (Ach-induced).
<ol><li>Vasodilation בתיווך זרימה, תלויי-אנדותל <ol><li>בעקבות לחץ, להקליט את הקוטר של arteriole אדיפוז במנוחה (Di). זה נקרא קוטר הבסיס מנוחתו.</li>
		<li>מראש מתכווצים כלי הדם ~ 55% מקוטר בסיס המנוחה (Dp) על-ידי הוספת 1 µL של endothelin-1 (ET-1, 10 &#8722; 10 מ') ישירות אל אמבט ואל חכה 5 דקות לקבלת אפקט. חזור על תהליך זה עד להגיע % ~ 55 להזמנה מראש מכווץ המדינה.</li>
		<li>בעקבות ההתכווצות קדם, זירוז זרימה רציפה לתוך מרחב intraluminal של רקמת שומן רבים, שוויון, בכיוונים מנוגדים כך הבדל לחץ יכול להתפתח ברחבי הספינה מבלי לשנות את הלחץ intraluminal רשע של 60 מ מ כספית. 
		הערה: לדוגמה, אם מאגר אחד עולה על ידי 10 ס מ גובה, השני צריך להיות ירדו על ידי 10 ס מ לשנות מעברי צבע בלחץ, ובכך לשנות את קצב הזרימה intraluminal. אם מדידת קצב זרימה מדויקים יותר הם הרצויה, מערכת זרימה כמותית-מד ניתן ליישם את הסידור ניסיוני.</li>
		<li>למדוד התארכות בתיווך זרימה 3-5 דקות לאחר אתחול של אינדוקציה זרימה. רמות intraluminal זרימה (לחץ מעברי צבע) יכולים להיות בטווח של 0 - 100 cmH 2 O. להגדיל כל תוספת לחץ שיפוע על-ידי Δ10 cmH 2 O כל 5-6 דקות, עד למקסימום של 100 cmH 2 O. 
		הערה: על מנת לזרז את הלידה זרימה שכבתית יציב ב לומן, בשני גדלים עצה בצינורית זכוכית מיקרו צריכה להיות מאוד קרובה הקוטר הפנימי של רבים; אחרת, היא לייצר תזרים מערבולות בתוך לומן, זירוז שגיאות מדידה לא רצויים.</li>
		<li>בעקבות זרימה-מתווכת המבדק התארכות, להחזיר את הלחץ מאגרים לאותו גובה (60 מ מ כספית).</li>
		<li>לאחר מכן, לשטוף arteriole קאמרית מאת מיד הסרת פתרון קאמרית ולהחליף עם פתרון קרבס טריים. פעולה זו מתבצעת בזהירות כדי לא לשבש את arteriole על תנאי בתוך התא.</li>
		<li>חזור על תהליך זה 3 - 4 פעמים במשך 20-30 דקות, או עד הספינה מבודדת מחזירה עד לקוטר בסיסית מנוחתו.</li>
	</ol></li> <li>Vasodilation בתיווך אצטילכולין, תלוית אנדותל, <ol><li>כאשר arteriole אדיפוז חזר עד לקוטר בסיסית מנוחתו, מראש מתכווצים כלי ~ 55% על-ידי ניהול endothelin-1 (ET-1, 10 &#8722; 10 מ') ישירות אל האמבטיה, כפי שתואר לעיל בסעיף 4.1.2.</li>
		<li>בעקבות ההתכווצות קדם, לנהל ברצף הגדלת מינון (2 µL) של אצטילכולין שהוא קולטן בתיווך, תחמוצת החנקן אגוניסט (אחח, 10 -9 עד 10 -5 מ') ישירות אל בית המרחץ. להקליט את השינוי arteriolar קוטר 5 דקות לאחר מתן של מנה לכל.</li>
		<li>פעם כלי הקיבול הגיעה מישור בעקבות ניהול של המנה הסופית Ach, לשטוף את כלי הקיבול 3 - 4 פעמים עם פתרון קרבס. לאפשר 20-30 דקות על הכלי להתאושש ולחזור נח בסיסית בקוטר. כדי לסייע לשמור על pH של קאמבר איברים, לשנות קרבס פתרון כל 15 דקות</li>
	</ol></li> <li>דגירה של arteriole עם N w - ניטרו - l-ארגינין מתיל אסטר (L-שם, 10 -4 מ'), מעכב של תחמוצת החנקן סינתאז למשך 30 דקות, ואז אני חוזר 4.2.1 ו 4.2.2 לאפיין את התרומה היחסית של תחמוצת החנקן כדי vasodilation בתיווך אוה.</li>
	<li>להעריך vasodilation אנדותל-עצמאית (הפונקציה השריר החלק בכלי הדם) ואת הכדאיות כלי מאת המינהל רציפים של מינונים הגוברת של papaverine (10 -8 עד 10 -4 מ') ישירות אל בית המרחץ. אם קוטר הכלי לא לחזור, או יעלה על הקוטר בסיסית (Di) מנוחתו בתגובה papaverine (דהיינו vasodilation המתאים), שקול את כלי הקיבול כלכלית ולמחוק נקודות נתונים.</li>
</ol> 5. ניתוח נתונים וחישוב <ol><li>חשב תגובתיות כלי הדם. השתמש vasodilation אחוז לביטוי נתונים כדי להסביר הבדלים בסיסית בקוטר כלי ולחשב באמצעות המשוואה הבאה: % vasodilation = (DT-Dp/Di-Dp) × 100 איפה DT הקוטר מוקלטות בנקודת זמן נתון (מקסימום קוטר), Dp הוא בקוטר שנרשם לאחר התוספת של סוכן vasoconstriction (כלומר. ET-1 המושרה קוטר הכיווץ), והוא די הקוטר נרשם מיד לפני התוספת של סוכן vasoconstriction (קוטר הבסיס בזמן מנוחה). 9</li> <li>מגדירים רגישות vasodilation ו- vasoconstriction (מנה-תגובה) כדי אגוניסט הריכוז של Ach, papaverine או ET-1 ולחושים 50% של התגובה מקסימלי (EC 50) אשר יכולה להיות מוגדרת על-ידי הפרמטר sigmoidal, המותווים, כפי שתואר לעיל. 10 הערה: לימודי בין הצופה הפארמצבטית vasodilation של אדיפוז microvessels יש מקדם המתאם (CC) גבוהה של 0.99 (n = 10 ניסויים כלי) במעבדה שלנו.</li></ol>
 6. ניתוח סטטיסטי <ol><li>אקספרס רציפה מדידות אומר ± ב- SEM... אלה נוטים בדרך כלל להיות מופץ. לנתח את כלי הדם תגובתיות של אדיפוז רבים על ידי אמצעים חזר ANOVA דו-כיווני.</li>
	<li>. לחלופין, להשוות בין השטח מתחת לעקומה (AUC) של העלילה עבור vasodilation המצטבר מינון-תגובות בין קבוצות הטיפול. בכל המקרים, שקול P &#60; 0.05 סטטיסטית.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96 (4), 313-326 (1999).</li><li>Jadeja, R. N., Rachakonda, V., Bagi, Z., Khurana, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+Myogenic+Response+and+Vasoactivity+In+Resistance+Mesenteric+Arteries+Using+Pressure+Myography.">Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography.</a> J Vis Exp. (101), e50997 (2015).</li><li>Gutterman, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Human+Microcirculation:+Regulation+of+Flow+and+Beyond.">The Human Microcirculation: Regulation of Flow and Beyond.</a> Circ Res. 118 (1), 157-172 (2016).</li><li>Fuster, J. J., Ouchi, N., Gokce, N., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity-Induced+Changes+in+Adipose+Tissue+Microenvironment+and+Their+Impact+on+Cardiovascular+Disease.">Obesity-Induced Changes in Adipose Tissue Microenvironment and Their Impact on Cardiovascular Disease.</a> Circ Res. 118 (11), 1786-1807 (2016).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+adipose+tissue+inflammation+represents+an+intermediate+cardiometabolic+phenotype+in+obesity.">Reduced adipose tissue inflammation represents an intermediate cardiometabolic phenotype in obesity.</a> J Am Coll Cardiol. 58 (3), 232-237 (2011).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WNT5A-JNK+regulation+of+vascular+insulin+resistance+in+human+obesity.">WNT5A-JNK regulation of vascular insulin resistance in human obesity.</a> Vasc Med. 21 (6), 489-496 (2016).</li><li>Durand, M. J., Phillips, S. A., Widlansky, M. E., Otterson, M. F., Gutterman, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+renin-angiotensin+system+contributes+to+blunted+vasodilation+induced+by+transient+high+pressure+in+human+adipose+microvessels.">The vascular renin-angiotensin system contributes to blunted vasodilation induced by transient high pressure in human adipose microvessels.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 307 (1), H25-H32 (2014).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxygenase+inhibition+improves+endothelial+vasomotor+dysfunction+of+visceral+adipose+arterioles+in+human+obesity.">Cyclooxygenase inhibition improves endothelial vasomotor dysfunction of visceral adipose arterioles in human obesity.</a> Obesity (Silver Spring). 22 (2), 349-355 (2014).</li><li>Park, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+age+on+the+vasodilatory+function+of+human+skeletal+muscle+feed+arteries.">Impact of age on the vasodilatory function of human skeletal muscle feed arteries.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 310 (2), H217-H225 (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skeletal+muscle+feed+arteries+studied+in+vitro:+the+effect+of+temperature+on+alpha(1)-adrenergic+responsiveness.">Human skeletal muscle feed arteries studied in vitro: the effect of temperature on alpha(1)-adrenergic responsiveness.</a> Exp Physiol. 96 (9), 907-918 (2011).</li><li>Grizelj, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+flow-and+acetylcholine-induced+dilations+in+visceral+compared+to+subcutaneous+adipose+arterioles+in+human+morbid+obesity.">Reduced flow-and acetylcholine-induced dilations in visceral compared to subcutaneous adipose arterioles in human morbid obesity.</a> Microcirculation. 22 (1), 44-53 (2015).</li><li>Farb, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arteriolar+function+in+visceral+adipose+tissue+is+impaired+in+human+obesity.">Arteriolar function in visceral adipose tissue is impaired in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (2), 467-473 (2012).</li><li>Tanner, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamin-Related+Protein+1+Mediates+Low+Glucose-Induced+Endothelial+Dysfunction+in+Human+Arterioles.">Dynamin-Related Protein 1 Mediates Low Glucose-Induced Endothelial Dysfunction in Human Arterioles.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. , (2016).</li><li>Ives, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alpha1-Adrenergic+responsiveness+in+human+skeletal+muscle+feed+arteries:+the+impact+of+reducing+extracellular+pH.">alpha1-Adrenergic responsiveness in human skeletal muscle feed arteries: the impact of reducing extracellular pH.</a> Exp Physiol. 98 (1), 256-267 (2013).</li><li>Dharmashankar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase-dependent+vasodilation+of+human+subcutaneous+arterioles+correlates+with+noninvasive+measurements+of+endothelial+function.">Nitric oxide synthase-dependent vasodilation of human subcutaneous arterioles correlates with noninvasive measurements of endothelial function.</a> Am J Hypertens. 25 (5), 528-534 (2012).</li><li>Truran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+and+leptomeningeal+arteriole+endothelial+dysfunction+induced+by+beta-amyloid+peptide:+a+practical+human+model+to+study+Alzheimer's+disease+vasculopathy.">Adipose and leptomeningeal arteriole endothelial dysfunction induced by beta-amyloid peptide: a practical human model to study Alzheimer's disease vasculopathy.</a> J Neurosci Methods. 235, 123-129 (2014).</li><li>Karki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forkhead+box+O-1+modulation+improves+endothelial+insulin+resistance+in+human+obesity.">Forkhead box O-1 modulation improves endothelial insulin resistance in human obesity.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (6), 1498-1506 (2015).</li><li>Shahid, M., Buys, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+murine+resistance+artery+function+using+pressure+myography.">Assessing murine resistance artery function using pressure myography.</a> J Vis Exp. (76), (2013).</li></ol>

לעורכים יש אין גילויים או ניגודי עניינים לדווח.

הקרע ובידוד של אדיפוז רבים מן הרקמות הסובבות יכול להיות תהליך מהגידולים ועתירת זהיר תשומת לב לכל פרט טכני פרוטוקול. ההליך microdissection דורש מוקפד מיומנויות וכלי ניתוח מיוחדים כדי למנוע נזק אפשרי של שריר חלק או אנדותל תא שכבות microvasculature. דקירות מקרית קטנה בקיר arteriolar יכול למנוע intraluminal לחץ ותוצאו...

Videomicroscopy היא טכניקה שימושית מנוצל כדי לבחון את תפקוד עושות קטנים רבים מן החי ניסויים ex-vivo. המעבדה שלנו התמקדה לנתח את microvessels הקטן של תאי רקמת שומן שונים כדי לאפיין את ההשפעות של אדיפוז שונים microenvironments על microvasculature. היתרון העיקרי של טכניקה זו היא כי כלי הדם של הגוף האנושי להישאר פונקציונלי יכולים להיבדק בקלות בתוך דקות עד שעות בעקבות ביופסיה. מצבים פיזיולוגיים הן חיקה ויציבה transmural הלחץ נשמר בשטח intraluminal באמצעות קנולות מיקרו-זכוכית אשר מסכם את הדברים מאפיינים רבים ויוו . 1 , 2 . בנוסף, מלכודת videomicroscopy אמין עם תוכנת זיהוי קצה אוטומטית מאפשרת עבור הערכה כמותית והן איכותית של אנדותל תלוית ועצמאית - מרחיב כלי דם, מצר את כלי הדם קיבולת של בודדים כלי ב בזמן אמת, המתיר הערכת פיזיולוגיים מהירה בתגובה לגירויים פיזיים ולא תרופתי. 3 טכניקות אחרות microvascular הינם גם זמינים כגון חוט myography, אשר נוטה להיות פחות זמן רב ולמדוד את המתח התגובות אגוניסטים שונים על ידי כוח מתמר.
המעבדה שלנו הוחל videomicroscopy שבחן את הקשר בין תפקוד כלי הדם, התמקדות השפעת תחומים שונים רקמת שומן על להערכת השמנה. השמנה מרכזית עם הצטברות שומן מהבטן התוך בבטן נקשרה הקרוב ביותר adipocytokine ייצור, חילוף חומרים לקוי של הסיכון cardiometabolic. זה הניחו כי תפקוד רקמת שומן עם ייצור יתר של pro-atherogenic dysregulation ציטוקינים ו adipokine הם בחריפות מעורבים תהליכים אלה, אך מולקולות ספציפיות רגולטוריות ומטרות הטיפול נותרו במידה רבה לא ידועות. 4 . זאת ועוד, רקמת שומן מקומית ברמה rarefaction נימי, זלוף לקוי קושרו רקמת שומן pseudohypoxia ו- dysregulation מטבולית. ההשערה כי מחלות לב וכלי דם עשוי להיות התוצאה של בעיות בתפקוד רקמת שומן הוא מתפתח. מתווכים פרו-atherogenic שוחרר שומן, במיוחד בשיתוף עם מרכז/מהבטן השמנה, סביר לקדם בתפקוד אנדותל, שינויים בכלי הדם פתוגניים שניתן להתבטא באופן מקומי להערכת אדיפוז וזוהה באמצעות במסמך זה תיאר מתודולוגיה. 5
הערכה תפקודית של רקמת שומן מבודדת רבים היא גישה שימושית כדי להשיג הבנה של פתופסיולוגיה ואת המנגנונים המולקולריים שתורמים בתפקוד כלי הדם האנושי ההשמנה. לחקור מנגנונים שתורמים תפקוד ספציפי דיפו השמן, פיתחנו שיטות לבחון אנדותל תלוית ותגובות - עצמאית vasodilatory של microvasculature, ולהעריך את הביטוי רגולטוריות שונות מועמדים לזווג הקרביים ו התת-עורית (SC) רקמת שומן דגימות המתקבל הנושאים כרסתן בזמנו של ניתוח בריאטרי.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Chemical Name</td>
			<td style="width:159px;"></td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Acetylcholine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">A6625</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">D-(+)-Glucose</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">G5767</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Endothelin-1</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E7764</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N&#8217;,N&#8217;-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E3889</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">E9884</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">HEPES</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">H3784</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:46px;width:352px;">Nw-nito-L-arginine methyl ester hydrochloride</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">N5751</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">M7506</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Potassium chloride (KCL)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3911</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P5655</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Papaverine</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">P3510</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:352px;">Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S6014</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:352px;">Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td style="width:159px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:132px;">S7653</td>
			<td style="width:127px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:352px;">Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2Po4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Name</td>
			<td style="width:159px;">Company</td>
			<td style="width:132px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:127px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Forceps</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>15000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Inverted microscope</td>
			<td>Zeiss Achromat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Laboratory tubing</td>
			<td>Euro-Pharm</td>
			<td>250100306F999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Needle/pippette puller</td>
			<td>David kopf instruments</td>
			<td>720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Ophthalmic monofilament nylon suture</td>
			<td>Surgical specialties</td>
			<td>A7756N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scissors</td>
			<td>Finescience tools</td>
			<td>150000-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Vessel Chamber</td>
			<td>DMT</td>
			<td>VAS v.2.1</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of human adipose tissue microvascular function using videomicroscopy

בעוד השמנה קשורה קשר הדוק להתפתחות מחלה מטבולית, לב וכלי דם, מעט מאוד ידוע על המנגנונים המפקחים על תהליכים אלו. זה המשוערות כי מתווכים פרו-atherogenic שוחרר רקמות שומן במיוחד בשיתוף עם השמנה מרכזית/ויסצרלית עשוי לקדם שינויים בכלי הדם פתוגניים באופן מקומי, מערכתית, הרעיון כי מחלות לב וכלי דם עשוי להיות תוצאה של חוסר תפקוד רקמת שומן ממשיכה להתפתח. כאן, אנו מתארים שיטה ייחודית של videomicroscopy זה כרוך ניתוח של תגובות מרחיב כלי דם ומצר את כלי הדם של שלם רבים אנושי קטן יוסר בתחנה אדיפוז מהנושאים אנושי חי. Videomicroscopy משמש כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של microvessels מבודדים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים או תרופתי באמצעות מערכת לחוץ המחקה תנאים ויוו . הטכניקה היא גישה שימושית כדי להשיג הבנה של פתופסיולוגיה ואת המנגנונים המולקולריים שתורמים בתפקוד כלי הדם באופן מקומי בתוך חצרו רקמת שומן. יתר על כן, חריגות בתוך microvasculature רקמת שומן גם קושרו עם מחלות מערכתיות. אנחנו מוחלים בטכניקה זו כדי לבחון תגובות וסקולרית דיפו ספציפיים בנושאים מהשמנת יתר. אנחנו העריכו אנדותל תלוית vasodilation הזרימה המוגברת והן אצל רבים אדיפוז (50-350 קוטר פנימי מיקרומטר, 2-3 מ מ אורך) מבודד שני מחסני אדיפוז שונים במהלך ניתוח בריאטרי מ באותו הפרט. להדגים כי רבים מן השומן מהבטן התערוכה vasodilation אנדותל תלוית לקוי לעומת כלי מבודד בתחנה תת עורית. הממצאים מראים כי הקרביים microenvironment קשורה בתפקוד אנדותל כלי הדם אשר עשוי להיות רלוונטי תצפיות קליניות קישור מהבטן השמנה מוגברת למנגנונים מחלה מערכתית. הטכניקה videomicroscopy יכול לשמש כדי לבחון פנוטיפים כלי דם מן המחסנים שומן שונים, כמו גם משווים ממצאים בין אנשים עם דרגות שונות של השמנת יתר, חוסר תפקוד מטבולי. השיטה יכולה לשמש גם כדי לבחון תגובות כלי הדם longitudinally בתגובה התערבויות קליניות.

המעבדה שלנו השתמשה videomicroscopy כדי לבחון אנדותל תלוית ו- vasodilation עצמאיים, וכן תפקוד vasocontractile של רקמת שומן רבים מבודד שומן תת עורית ואת הקרביים של בני אדם שמנים. הסידור ניסיוני האופיינית מוצג איור 1A. רקמת שומן רבים מושעה בין שני פיפטות נימי זכוכית, מאובטחת במקום...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy at JoVE.com

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

Videomicroscopy מערכות משמשות כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של רקמת שומן מבודדת רבים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ולא תרופתי. טכניקה זו ניתן לבחון פנוטיפים microvascular בתחומים שונים רקמת שומן בבני מהשמנת יתר.

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

assessment-human-adipose-tissue-microvascular-function-using

Research

JoVE Journal

Medicine

7.4K Views.  Boston University School of Medicine. Videomicroscopy מערכות משמשות כדי לבחון מאפיינים פונקציונליים של רקמת שומן מבודדת רבים בתגובה לגירויים פיזיולוגיים ולא תרופתי. טכניקה זו ניתן לבחון פנוטיפים microvascular בתחומים שונים רקמת שומן בבני מהשמנת יתר.

Video: Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

הערכה בלתי פולשנית של תפקוד כלי דם והאנדותל

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite fluorescent in situ elements through the optical fibers, and then record some of the emitted photons, via the same optical fibers. The light source is a laser that sends the exciting light through an element within the fiber bundle and as it scans over the sample, recreates an image pixel by pixel. As this scan is very fast, by combining it with dedicated image processing software, images in real time with a frequency of 12 frames/sec can be obtained.
We developed a technique to quantitatively characterize capillary morphology and function, using a confocal fluorescence videomicroscopy device. The first step in our experiment was to record 5 sec movies in the four quadrants of the tumor to visualize the capillary network. All movies were processed using software (ImageCell, Mauna Kea Technology, Paris France) that performs an automated segmentation of vessels around a chosen diameter (10 &mu;m in our case). Thus, we could quantify the 'functional capillary density', which is the ratio between the total vessel area and the total area of the image. This parameter was a surrogate marker for microvascular density, usually measured using pathology tools.
The second step was to record movies of the tumor over 20 min to quantify leakage of the macromolecular contrast agent through the capillary wall into the interstitium. By measuring the ratio of signal intensity in the interstitium over that in the vessels, an 'index leakage' was obtained, acting as a surrogate marker for capillary permeability.

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In this paper, we present a method to analyze tumor microvessels in vivo using dynamic contrast-enhanced fluorescence videomicroscopy. Two quantitative parameters were acquired: functional capillary density reflecting the vascularity of the tumor, and index leakage reflecting the leakiness of the endothelial wall.

בהדמית vivo של אנגיוגנזה גידול באמצעות הקרינה Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Cerenkov Luminescence Imaging of Interscapular Brown Adipose Tissue

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely related to metabolism and energy expenditure, and its dysfunction is one important contributor for obesity and diabetes. Contrary to previous belief, recent PET/CT imaging studies indicated the BAT depots are still present in human adults. PET imaging clearly shows that BAT has considerably high uptake of 18F-FDG under certain conditions. In this video report, we demonstrate that Cerenkov luminescence imaging (CLI) with 18F-FDG can be used to optically image BAT in small animals. BAT activation is observed after intraperitoneal injection of norepinephrine (NE) and cold treatment, and depression of BAT is induced by long anesthesia. Using multiple-filter Cerenkov luminescence imaging, spectral unmixing and 3D imaging reconstruction are demonstrated. Our results suggest that CLI with 18F-FDG is a practical technique for imaging BAT in small animals, and this technique can be used as a cheap, fast, and alternative imaging tool for BAT research.

In this video report, we show the application of Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for interscapular brown adipose tissue in mice under activated and depressed conditions.

Cerenkov הארת ההדמיה של רקמות Interscapular בראון שומן

Brown adipose tissue (BAT), widely known as a &#8220;good fat&#8221; plays pivotal roles for thermogenesis in mammals. This special tissue is closely ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular weight metabolites in tissues of the treated host to achieve long-term survival. The semipermeable membrane allows engrafted encapsulated cells to avoid rejection by the immune system. The encapsulation procedure was designed to enable a controlled release of bioactive compounds, such as insulin, other hormones, and cytokines. Here we describe a method for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production and energy dissipation (thermogenesis) in the intra-abdominal adipose tissue of obese mice. Encapsulation of thermogenic catabolic cells may be potentially applicable to the prevention and treatment of obesity and type 2 diabetes. Another potential application of catabolic cells may include detoxification from alcohols or other toxic metabolites and environmental pollutants.

Here, we present a protocol for encapsulation of catabolic cells, which consume lipids for heat production in intra-abdominal adipose tissue and increase energy dissipation in obese mice.

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Transcutaneous Assessment of Renal Function in Conscious Rodents

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and time-consuming. In addition, serial blood or urine samples are required, with the associated stress for the experimental animals. A recent technique significantly reduces the investment in time and resources, minimizing the invasiveness and the animal stress, but being equally valid as the traditional approaches. The method measures transcutaneously renal function. Using an optical device and the exogenous renal marker fluorescein isothiocyanate (FITC)-sinistrin, this technique is capable of measuring the elimination kinetics of the marker through the skin. With neither blood nor urine samples nor the associated laboratory assays needed, the results of the transcutaneous measurement are almost instantaneously available. The method has been already validated in different species and successfully applied in several models of renal pathology. Moreover, due to its minimally invasive characteristics, it is suitable for sequential measurements within the same animal. Here is provided a detailed protocol to carry out the transcutaneous assessment of renal function in rodents.

Determination of glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional procedures to measure this parameter are cumbersome and require a large investment of time. Here we describe a faster and minimally invasive method to determinate GFR transcutaneously.

הערכת Transcutaneous של תפקוד כלייתי במכרסמי Conscious

Glomerular filtration rate (GFR) is the gold standard to assess overall kidney function. However, traditional methods to evaluate GFR are cumbersome and ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the development of obesity-associated complications such as type 2 diabetes. To quantitatively and qualitatively investigate the immune cell subsets in human AT deposits, we have developed a flow cytometry approach. The stromal vascular fraction (SVF), containing the immune cells, is isolated from subcutaneous and visceral AT biopsies by collagenase digestion. Adipocytes are removed after centrifugation. The SVF cells are stained for multiple membrane-bound markers selected to differentiate between immune cell subsets and analyzed using flow cytometry. As a result of this approach, pro- and anti-inflammatory macrophage subsets, dendritic cells (DCs), B-cells, CD4+ and CD8+ T-cells, and NK cells can be detected and quantified. This method gives detailed information about immune cells in AT and the amount of each specific subset. Since there are numerous fluorescent antibodies available, our flow cytometry approach can be adjusted to measure various other cellular and intracellular markers of interest.

This article describes a method to analyze immune cell content of adipose tissue by isolation of immune cells from adipose tissue and subsequent analysis using flow cytometry.

אפיון של תאים חיסוניים בתוך רקמת שומן אנושי באמצעות Cytometry זרימה

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to expend energy has made it a potential target for novel therapies to ameliorate obesity and associated metabolic disorders in humans. Though this tissue has been well studied in small animals, BAT&#39;s thermogenic capacity in humans remains largely unknown due to the difficulties of measuring its volume, activity, and distribution. Identifying and quantifying active human BAT is commonly performed using 18F-Fluorodeoxyglucose (18F-FDG) positron emission tomography and computed tomography (PET/CT) scans following cold-exposure or pharmacological activation. Here we describe a detailed image-analysis approach to quantify total-body human BAT from 18F-FDG PET/CT scans using an open-source software. We demonstrate the drawing of user-specified regions of interest to identify metabolically active adipose tissue while avoiding common non-BAT tissues, to measure BAT volume and activity, and to further characterize its anatomical distribution. Although this rigorous approach is time-consuming, we believe it will ultimately provide a foundation to develop future automated BAT quantification algorithms.

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Using free, open-source software, we have developed an analytical approach to quantify total and regional brown adipose tissue (BAT) volume and metabolic activity of BAT using 18F-FDG PET/CT.

כל הגוף ואת אזורי כימות של האדם פעיל חום רקמת שומן באמצעות 18F-FDG PET/CT...

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

A Computerized Functional Skills Assessment and Training Program Targeting Technology Based Everyday Functional Skills

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a computerized functional skills training program that was paired in half of the participants with a commercially available cognitive training (CCT) program.
Non-impaired older individuals (NC) aged 60+ (n=45) and similarly aged individuals with mild cognitive impairment (MCI; n=50) were randomized to receive 12 weeks of twice-weekly computerized functional skills training (CFST) or 12 weeks of twice-weekly sessions split between CCT and CFST. Skills trained were use of an ATM; internet banking; ticket kiosk; telephone and internet prescription refill; medication management; and internet shopping. As with previous functional capacity assessments, we focus on completion time for each simulation.
51 participants completed the training program, either by mastering all 6 tasks (34) or completing 12 weeks of training. 44 more participants completed 4 or more training sessions so they were also analyzed for improvement up to their last training session. Completion time for all 6 tests significantly improved from the baseline assessment to the final training session in both groups of participants (all p&#60;0.001 with an average improvement in task completion time of 45%). Further, there was no differential improvement in MCI and NC in the 6 tests from baseline to end of training (all t&#60;1.66, all p&#62;0.12). Finally, combined CCT plus CFST did not differ from CSFT alone on any of the percent-change score measures (all t&#60;1.64, all p&#62;0.11).
Both NC and MCI groups evidenced substantial improvements in performance. CCT supplementation led to similar functional gains with half as many training sessions. The NC participants proceeded through the training fairly rapidly even without CCT supplementation; MCI participants required more training but learned equivalently. These findings suggest that even in cases with memory impairments, functional skills can be efficiently learned with training.

This training protocol uses computerized training to teach technology-related everyday functional skills. These skills include financial skills, travel and transit, as well as medication management.

מיומנות פונקציונלית הערכה והדרכה תוכנית מיקוד הטכנולוגיה מבוסס מיומנויות פונקציונלי יומיומי

Today, many functional skills are technology-based, so development of a technology-based training program has broad importance. Here we present a ...

In Vitro Assessment of Cardiac Function Using Skinned Cardiomyocytes

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring apparatus and a motor to perform functional studies. These studies will allow measurement of cardiomyocyte stiffness (passive force) and its activation with different calcium (Ca2+)-containing solutions to determine, amongst others: maximum force development, myofilament Ca2+-sensitivity (pCa50), cooperativity (nHill) and the rate of force redevelopment (ktr). This method also enables determination of the effects of drugs acting directly on myofilaments and of the expression of exogenous recombinant proteins on both active and passive properties of cardiomyocytes. Clinically, skinned cardiomyocyte studies highlight the pathophysiology of many myocardial diseases and allow in vitro assessment of the impact of therapeutic interventions targeting the myofilaments. Altogether, this technique enables the clarification of cardiac pathophysiology by investigating correlations between in vitro and in vivo parameters in animal models and human tissue obtained during open heart or transplant surgery.

This protocol aims to describe step-by-step the technique of extraction and assessment of cardiac function using skinned cardiomyocytes. This methodology allows measurement and acutemodulation of myofilament function using small frozen biopsies that can be collected from different cardiac locations, from mice to men.

להערכת ויטרו של תפקוד הלב באמצעות קרדיומיוציטים עור

In this article, we describe the steps required to isolate a single permeabilized (&#34;skinned&#34;) cardiomyocyte and attach it to a force-measuring ...

Fat-Covered Islet Transplantation Using Epididymal White Adipose Tissue

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this procedure. However, intraperitoneal islet transplantation has some limitations, including poor transplant efficacy, difficult graft detection ability, and a lack of graftectomy capability for post-transplant analysis. In this paper, "fat-covered islet transplantation", an intraperitoneal islet transplantation method that utilizes epididymal white adipose tissue, is used to assess the therapeutic effects of bioengineered islets. The simplicity of the method lies in the seeding of islets onto epididymal white adipose tissue and using the tissue to cover the islets. While this method can be categorized as an intraperitoneal islet transplantation technique, it shares characteristics with intra-adipose tissue islet transplantation. The fat-covered islet transplantation method demonstrates more robust therapeutic effects than intra-adipose tissue islet transplantation, however, including the improvement of blood glucose and plasma insulin levels and the potential for graft removal. We recommend the adoption of this method for assessing the mechanisms of islet engraftment into white adipose tissue and the therapeutic effects of bioengineered islets.

This fat-covered islet transplantation method is suitable for the detection of engrafted islets in the intraperitoneal cavity. Notably, it does not require the use of biobinding agents or suturing.

השתלת איון מכוסה שומן באמצעות רקמת שומן לבן אפידידימלית

Islet transplantation is a cellular replacement therapy for severe diabetes mellitus. The intraperitoneal cavity is typically the transplant site for this ...