המחברים תודה Tongalp Tezel, MD, יעוץ לגבי הזרקת הקדוש; תרזה Swayne, PhD, להתייעצות בנוגע מיקרוסקופ SHG; ג'ימי Duong העיצוב ואת המשאבים ביוסטטיסטיקה המתקן ליבה ביוסטטיסטיים של מכון אירווינג-המרכז הרפואי של אוניברסיטת קולומביה.
נתמך בחלקה על ידי מחקר כדי למנוע עיוורון על ידי נבחרת מוסדות של בריאות מענקים NCRR UL1RR024156, NEI P30 EY019007, NCI P30 CA013696 ו- NEI R01EY020495 (DCP). אוניברסיטת קולומביה בעל הקניין קשורים: ארה ב הוציא פטנט לא: 8,466,203 ולא: 9,125,856. הגשנו בקשה לפטנט בינלאומי: PCT/US2015/020276.
תמונות שנאספו ב Confocal ולהעניק התמחה מיקרוסקופ לשתף משאבים של הרברט אירווינג מקיף במרכז לחקר הסרטן באוניברסיטת קולומביה, נתמך על ידי NIH #P30 CA013696 (המכון הלאומי לסרטן). מיקרוסקופ קונפוקלי נרכש עם NIH להעניק #S10 RR025686.

כל ההליכים בוצעו באמצעות ארנב cadaveric העיניים בתוך ראשי ארנב outbred ללא פגע. הנחיות גופים מוסדיים וכל הלאומי טיפול ושימוש של חיות מעבדה עקבו אחריך
1. הכנת פתרונות
<ol><li>SMG הכנה TXL:<ol>
<li>להכין 1 מ"ל של 0.2 מ' ריכוז נתרן ביקרבונט פתרון (NaHCO3) הפתרון באמצעות 0.0165 גר' אבקה NaHCO3 מומס 1 מ"ל של מים מזוקקים.</li>
		<li>להמיס 0.1016 מ"ג נתרן אבקת hydroxymethylglycinate (SMG) 1 מ"ל של מים מזוקקים להגיע לריכוז סופי של 800 מ מ SMG. להתאים את הפתרון סודיום ביקרבונט ריכוז סופי של 0.1 M NaHCO3 ו- 400 מ SMG. ריכוזי SMG בהתאם cross-linking לאפקט הרצוי. בפרוטוקול המתוארים כאן השתמשנו 40, 100 ו- 400 מ SMG.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. subTenon של הזריקה עבור TXL באמצעות SMG
<ol><li>למלא מזרקים אינסולין 1 מ"ל שני (25 גרם מחטים) עם שליטה µL 400 והפתרון SMG, בהתאמה.</li>
	<li>מקום הראש של הארנב מטוס פרופיל בעזרת כרית. קלקר או מחסנית הנייר ניתן לתקן את הראש במצב אופטימלי.</li>
	<li>תמשוך את העפעפיים עם מפשק רחם רפואת עיניים.</li>
	<li>למדוד את ראשוני לחץ תוך-עיני (IOP) באמצעות מכשיר tonometry applanation.</li>
	<li>לסמן באתר של הזרקת המיועד על החלק האמצעי העליון של לימבוס עם סמן רקמות.</li>
	<li>. משכי לחמית סביב האתר של הזרקת עם מלקחיים conjunctival (או כל מלקחיים עם קצה עגול משונן) והכנס את המחט דרך הלחמית, הזנת הכמוסה של לגלף קוצים רק מעט מעבר האתר מסומן limbal (כלומר, 2-3 מ מ לימבוס). ניתן גם לבצע חתך קטן בלחמית עם מספריים איריס כדי להקל את המעבר של המחט דרך הכמוסה של לגלף קוצים.</li>
	<li>פעם אחת בתוך הכמוסה של לגלף קוצים, ודא כי המחט הוא נייד בחופשיות על-ידי הזזתה צד אל צד. במהלך תקופה זו, העולם לא צריכים לזוז זה מאשר השמה נכונה של המחט מעל sclera ב תת-לגלף קוצים של (רח') שטח.</li>
	<li>להזריק את הפתרון של המזרק וזורקים את המחט. מייד לאחר ההזרקה, יצטברו הנוזל בחלל sT יצירה של בליטה קדמית ראה דרך הלחמית (קרי, chemosis).</li>
	<li>חזור על המדידה IOP כדי לאשר כי היא לא שינתה עקב ניקוב בהיסח הדעת של כדור הארץ.</li>
	<li>להסיר את המכסה קצ ת, ולבצע עיסוי דיגיטלי דרך העפעפיים סגורות למשך כ 2-3 דקות.</li>
	<li>. תשאיר את הראש עבור תקופת דגירה של 3.5 h (בטמפרטורת החדר = 18 ° C) הנידון להתקדם לשלב הבא.</li>
</ol>3. רקמות הכנה
<ol><li>תמשוך את העפעפיים בעזרת קצ ת העפעף כדי למטב גישה אל העולם. בחר בגודל אופטימלי קצ ת בהתאם לגודל העין.</li>
	<li>להפריד לחמית המקיפים את לימבוס. אם זה כבר חרות ליד האתר של הזרקת, circumferentially להרחיב את הגבולות אז זה יכיל גודל של inoculum של 1 x 1 ס מ.</li>
	<li>חותכים את שרירי העינית במיוחד באתרים שלהם של הכניסה scleral.</li>
	<li>לרומם את גלגל העין עם מלקחיים, דחיפתו מהצד האחורי. זה מספק גישה אל העולם האחורי, יקל על חיתוך של עצב הראייה עם אופטלמולוגיות עורק, וריד הממוקמים בעמוד האחורי של כדור הארץ.</li>
	<li>לגזור את corneoscleral מורכבים, עם הגבול החיצוני כולל ההזרקה מסומן. הכתם עדיין צריך להיות גלוי על החלק הנותר sclera.</li>
	<li>הסר את קורפוס vitreus ואת כל השכבות מחוברת בצד הפנימי של בסקלרה על-ידי החלת המתיחה עם מלקחיים רקמות. הערה: צעדים נוספים תלויים ההליכים הבאים המבוצעת: 4. - ניתוח DSC, 5. - מיקרוסקופ SHG.</li>
</ol>4. לצורך ניתוח DSC אזוריים
<ol><li>
לעין שטופלו: לגזור ארבע סקטורים scleral מגביע scleral הנותרים עם המספריים כך באתר של הזריקה הוא בגזרה העליונה מיושרת מרכזי. לחתוך 3 המגזרים הנותרים של הצדדים לרוחב (קרי, האף ואת זמני), והן התחתון. הערה: המספור של המגזרים (1-4) אשר מחולקות ריבועים (1-16) הוא הפגינו איור 1A.</li>
	<li>חותכים מהמגזרים scleral (1-4) לריבועים קטנים (1-16) של 4 x 4 מ מ כל אחד. סקטור 1 צריך להיות מחולק 9 ריבועים (להפוך את האתר המדויק של הזרקת משבצת יחידה [ריבוע 2]). לחלק מגזרים 2 ו- 3 2 ריבועים (ריבועים 10-11 ו- 12-13) והמגזר 4 3 ריבועים (ריבועים 14-16).</li>
	<li>להקצות מספר כל ריבוע, כפי שמוצג באיור 1 א', כדי להתאים את המרחק של הרקמה שנותחה מהמיקום של האזור מוזרק.</li>
	<li>
לעין שליטה: לאחר חלוקת הרקמה ארבע סקטורים scleral (בדומה לרקמת שטופלו) לגזור ריבוע חתיכות רקמה מהמיקומים הבאים: 3 ריבועים מהמגזר העליון (סקטור 1), 1 מ בכל צד (מגזרים 2 ו- 3), ו- 1 מ מגזר התחתון (מגזר 4).</li>
	<li>לגרד את הרבדים הנותרים רשתית, חיבור, לשטוף פעמיים עם PBS טריים בכל פעם, עוזב את החלקים בתוך פתרון עבור 10 s בכל פעם.</li>
</ol>5. עבור הדמיה SHG
<ol><li>חותכים את החלק העליון של sclera באמצעות מספריים כדי ליצור אזור 1 x 1 ס מ עם האתר של הזרקת מיושר מרכזי.</li>
	<li>לגרד את הרבדים הנותרים רשתית ו מקלעת דמית העין ולשטוף פעמיים עם PBS טריים בכל פעם עוזב את החלקים בפתרון במשך כ 10 s.</li>
	<li>המקום הרקמה 1 מ"ל צינורות מלאים PBS פתרון תחבורה כדי מתקן הדמיה. כל ההליכים, בעקבות זמן הדגירה, החל הקרע של גלגל העין צריכה להתבצע תוך שעה.</li>
</ol>6. מיקרוסקופ פרוטוקול
הערה: פרוטוקול זה לאות הדמיה מפוזרים בחזרה SHG של קולגן רקמת בסקלרה המותאם במיוחד עבור הלייזר מיקרוסקופ סורק.
<ol><li>
מיקרוסקופ להגדיר
	<ol>
<li>כדי למקסם האות והרזולוציה כאשר ביצוע מיקרוסקופ SHG משתמש של העדשה המטרה מטב לצורך שידור אינפרא-אדום אור ועם מפתח נומרי גבוהה (NA). המטרה שלנו היא Nikon Apo LWD 25 x / NA1.1 מים טבילה.</li>
		<li>התאם את הקולר תיקון של העדשה כדי להתאים את עומק הדגימה, במקרה הזה זה העובי של coverslip, 0.17 מילימטרים.</li>
		<li>הר העדשה המטרה 25 x ומוסיפים כמות נדיבה של שימון ג'ל על בסיס מים כדי לכסות את המשטח הדמיה לפני הרכבה המדגם. הג'ל על בסיס מים לא יתפוגג במהלך הניסוי, ומכאן ישמרו על איכות התמונה.</li>
		<li>מקום הרקמה scleral של צינורית 1 מ"ל עם PBS ללא ייבוש בין שני coverslips עגול 25 מ מ (בצד episcleral למטה) מתן קשר מקסימלי בין episclera את פני השטח coverslip. הערה: הרקמה ניתן גם להניח חשפו על coverslip. כמות טובה של PBS צריך לשמור על הרקמה להתייבש במהלך דימות. במקרה זה, הוסף את פיסת רקמה של PBS לאחר הרכבת את cellchamber.</li>
		<li>להרכיב את התא תא על-ידי הצבת של 25-ממ עגול coverslip, יחיד או בטכניקה של סנדוויץ ', בחלק התחתון של התא, בורג את החלק העליון למטה על מנת ליצור של אטום עגול קאמרית. . אל תהרוס מטה בחוזקה כאשר coverslip העליון משמש, על מנת להימנע באופן מלאכותי שיטוח, נזק הרקמה.</li>
		<li>הר תא תא עם דגימת הרקמות על הבמה מיקרוסקופ.</li>
		<li>הגדר המיקרוסקופ לתצוגה העין באור המשודרת.</li>
		<li>למקם את הבמה ולהתאים את הגובה של המטרה כך המשטח התחתון של המדגם נמצא בפוקוס, כפי שנקבע על ידי ביקורת בשטח בהיר דרך היצירה העין.</li>
		<li>כבו אורות מלבד צג המחשב, לחסום כמה שיותר אור מהצג ככל האפשר עם סדינים רדיד אלומיניום עטוף על הבמה מיקרוסקופ. מזעור כל אור תועה להגיע את גלאי יבטיח הרכישה נמוך-רעש, כמו גלאי חאספ NDD יש רגישות גבוהה.</li>
		<li>בחלונית ' Ti Pad של התוכנה, בדוק ההגדרה עדשה שהפרטים נכונים.</li>
		<li>בחלונית ' GUI קומפקטי A1, לבחור את לייזר אינפרא-אדום עבור הדמיה, בחרו את גלאי NDD ובחרו את ערוץ דאפי מצוידת במסנן bandpass 400-450 ננומטר.</li>
		<li>בחלונית ' A1 MP GUI, להגדיר את אורך הגל של הלייזר האינפרא-אדום 860 ננומטר, פתח התריס.</li>
		<li>הגדר סריקת תנאים בחלונית GUI קומפקטי A1 כדלקמן לייזר. בחר: (א) Galvano סורק לסריקת חד-כיוונית (ב), (ג) פיקסל להתעכב זמן 6.2 µs, (ד) מסגרת בגודל 1,024 x 1,024 פיקסלים, (ה) קו ממוצע של 2 x הערה: Galvano והסורק סריקה חד-כיוונית מבטיחה יישור מדויק של נקודה אחרי נקודה. גודל של 1,024 x 1,024 עבור שדה הראייה מלא מיתרגם בגודל בפיקסלים של 0.5 μm /pixel. קו בממוצע יקטין את רעש שוט בתמונה.</li>
		<li>הגדר הדמיה תנאים בחלונית GUI קומפקטי A1 על-ידי התאמת רווח כוח, גלאי לייזר. פתח בהרכב תראה את הטבלה (LUTs) הצגת היסטוגרמה של ערכי העוצמה פיקסל בתמונה הנוכחית. הדמיה חיה במצב "למצוא" וקביעת להגדיל את טווח ערכי הפיקסלים שזוהו על-ידי התאמת רווח כוח, גלאי לייזר. הימנע רוויה. ערכים אופייניים הם כוח לייזר 2.5%, סך של 2.35 W-860 nm, 100 HV (גלאי רווח).</li>
		<li>הערה: עבור התקנה זו, עוצמת הלייזר נמדד עם מד הכוח הפנימי הוא 5.2 mW. בכל פעם ניסוי מבוצע, מחדש להתאים את האחוז לייזר כזה המדידה חשמל פנימית היא קבועה ב- 5.2 mW בין ההפעלות הדמיה. כדאי לשים לב בעת הגדרת עוצמת הלייזר. הלייזר זיקית II הוא לייזר W 3-800 nm, 10% או כוח עליון יכול העלול לגרום נזק לרקמות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
ייבוא תמונות
	<ol>
<li>במצב תצוגה מקדימה, לסרוק אזור הרקמה באמצעות הכלי סקירה XYZ.</li>
		<li>הגדר את הדימות ברזולוציה נמוכה יותר (256x256 פיקסלים, אין קו בממוצע) כדי להאיץ את רכישת תמונות במצב זה.</li>
		<li>לכידת 5 x 5, 3 x 3 או תצוגה יחידה של שדות כדי לכסות את המשטח כולו של הרקמה. בכל מקום, לפני הלכידה סקירה, להפעיל את מצב "סרוק" חיים ולהביא את הרקמה להתמקד. שימו לב כי אזורים שונים של רקמת יהיה שונה מעט עמדות לכיוון צירית.</li>
		<li>למצוא אזור שטוח שבו סיבי הקולגן נראים בתחום התצוגה כולו ולחץ פעמיים את העמדה בכלי סקירה כדי לעבור את השלב למיקום מסוים זה.</li>
		<li>הפעלת מצב "סרוק" בשידור חי, להתאים את מיקום Z המטרה כך המטוס התחתון נמצא בפוקוס ולהשתמש, בלוח Ti, הכונן Z להזזת המישור אופטי 10-15 μm מעל שכבה תחתונה זו.</li>
		<li>רוכשים תמונה ברזולוציה גבוהה עם 1,024 x 1,024 פיקסלים ו- 2 x קו בממוצע, באמצעות לחצן "ללכוד".</li>
		<li>לשמור את המיקום סקירה XYZ באמצעות לחצן "+". פעולה זו מבטיחה כי באותו האזור של רקמה לא הלכידה מחדש.</li>
		<li>עבור כל פיסת רקמה ללכוד 10 תמונות של המבט של שדות שאינם חופפים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. DSC פרוטוקול
הערה: המשך לשלב הזה ברגע השלמת רקמות הכנה, לניתוח DSC אזורית, או לאחר רקמת הדמיה בעת ביצוע SHGM.
<ol><li>להכין DSC מחבתות, שקל ותויגו. הערה: שלב זה צריך להיעשות לפני ניתוח רקמה כדי למזער רקמות לייבוש.</li>
	<li>יבש כל ריבוע scleral ברקמות ספיגה ושים אותה על החלק התחתון של הסיר DSC באמצעות מלקחיים במיתולגיות.</li>
	<li>שוקל את המחבת עם רקמות בתוך ואת המכסה crimped ורטוב מכוסה כדי להשיג את הרקמה משקל (מסה של הדגימות צריך להיות בטווח של 5 עד 11 מ ג). הערה: חותם כל הפאן-שימוש של צובטן לפני שימשיך דגימת הרקמות הבאה. המחבתות הן באופן הרמטי, מניעת אובדן מים לפני ניתוח תרמי.</li>
	<li>ברגע המדגם הוא מסולסל, במקום זה על מיקומה המיועד על המגש DSC. צריך להיות 6 דוגמאות עבור הפקד ו-16 לעין שטופלו.</li>
	<li>ליצור שיטה באמצעות כלי ניהול תוכנה, המציין את המשקל של הרקמה, ולהפעיל את הניתוח התרמי באמצעות הפרמטרים הבאים: טווח טמפרטורה של 40 עד 80 ° C, קצב חימום: 1 ° C/min, זרימת חום: 17.37 mW, זרימת גז (N2): 19.8 mL/min. גז בלחץ: בר 2.2.</li>
	<li>עם סיום, לנתח את הנתונים עבור כל דגימה על-ידי חילוץ הפסגה טמפרטורת המעבר-דנטורציה תרמית אשר מתרחשת באמצעות כלי ניהול התוכנה.</li>
</ol>8. ניתוח תמונות
<ol><li>
אות SHG
	<ol>
<li>בחר לפחות 5-10 התמונות קנאס מתוך כל טיפול ואת השליטה שלה, כך האזור של התמונה מאוכלס בעיקר סיבי קולגן.</li>
		<li>להעלות כל תמונה בתוכנת ImageJ, למדוד את עוצמת הפיקסלים הממוצע על-ידי בחירה נתח > מדד לתמונה הפעילה.</li>
		<li>ערכי שחולצו מדווחים כמו עוצמת פיקסל רשע לבין יכול גם תוצג על-ידי ההיסטוגרמה של עוצמות על-ידי בחירה מתוך התפריט נתח > היסטוגרמה.</li>
		<li>באמצעות גיליון Excel, ליצור טבלה כדי לתעד את כל הנתונים נמדד בהתאם לזהות הדגימה</li>
		<li>לחשב את וסטיית בעוצמה פיקסל עבור כל תנאי הטיפול ושליטה.</li>
		<li>באמצעות של התלמיד במבחן t, להשוות הבדלים להשוואות pairwise כל של ריכוזים (כלומר, 40 מ מ SMG לעומת 0 ו- 400 מ מ SMG לעומת 0). [P≤0.05].</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Waviness
	<ol>
<li>בחר תמונה המציגה סיבי קולגן. צריך להיות מנותח לפחות 10 תמונות לכל דגימה (כולל דגימת בקרה לריכוז כל - לפחות 40 בסה כ).</li>
		<li>פתח ImageJ > תוספים > NeuronJ. NeuronJ דורש התקנה מוקדמת.</li>
		<li>להעלות imagesby כל גרירה לתוך חלון שנפתח NeuronJ .</li>
		<li>ליצור עקיבה קווים לאורך הסיבים, בעקבות קו המתאר של fibril עם העכבר (עט ציור טבליות יכול לשמש), לחץ על M כדי למדוד את המרחק של אורך סיבים הכולל.</li>
		<li>בחר "אפשרות" לצייר קו ישר וצורניים ולחבר את ההתחלה ואת הסוף מתאר סיבים מצוירות בעבר. כעת לחץ על M כדי למדוד את אורך מקצה-לקצה.</li>
		<li>חזור על הפעולות אותו על הסיבים לפחות 10 לכל תמונה.</li>
		<li>לאסוף את שתי מדידות מכל הסיבים 10, קלט את הנתונים לתוך גיליון אלקטרוני של excel, המבטאת אורך סיבים הכולל (מתאר) ואורך end-to-end (או מתחבר ישר קו) כמו אורך [עיקול] והאורך [ליניאריים], בהתאמה.</li>
		<li>חישוב מדד waviness (W) תוך שימוש בנוסחה: W = אורך [עיקול] / אורך [ליניאריים].</li>
		<li>לחשב את אחוז waviness השוואת נתוני התמונות של samples(SMG) שטופלו עם תמונות מדגימות שליטה באמצעות הנוסחה: (W [SMG] - 1) / (W [שליטה] - 1)</li>
		<li>לבצע מבחן t pairwise עבור אינדקס waviness (W) על מנת לקבוע את ההבדלים סטטיסטית (p-ערכים) מורפולוגיה סיבי הקולגן של בין טיפול שונה תנאים ושליטה.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

המחברים אין לחשוף.

מתנהל ניסויים הראו עדויות לשימוש של מיקרוסקופיית אות SHG כמו שיטה להערכה של קולגן cross-linking אפקטים ב בסקלרה, מעלים את האפשרות העתידית של שימוש בטכניקה זו כלי ניטור עבור cross-linking טיפולים זה יעד קולגן חלבונים. ראוי לציין, כלי נגינה כבר נמצא בשימוש קליני זה יכול שעלולים ללכוד את האות SHG. למרות הכלי ...

. קוצר ראייה מתקדמת היא שמהווה יהיה ניתן לטיפול באמצעות אי-אנזימטי scleral cross-linking (פוטו אטמוספרי ו/או כימית), זה הגיוני בהתחשב בכך חסימת קולגן cross אנזימטי-linking יכול להגדיל טופס ניסיוני קיפוח (FD)-induced קוצר ראייה1. Elsheikh ו פיליפס2 שנדונו לאחרונה את היתכנות ופוטנציאל השימוש הקרנה רגיל אולטרה סגול-A (UVA)-ריבופלבין מתווכת פוטו אטמוספרי cross-linking (הידוע גם בשם דרזדן לפרוטוקול), מקוצר כאן בתור (ריבופלבין CXL) לייצוב scleral האחורי לעצור את התארכות צירית, קוצר ראייה. שיטה זו פוטו אטמוספרי שימש בהצלחה לטיפול הקשורה של המשטח הקדמי גלוב (קרי, הקרנית בולטות) ראיתי קרטוקונוס, פוסט-לאסיק keratectasia. עם זאת, יישום של הפרוטוקול CXL עבור בסקלרה מתעכבת על ידי נושאים הקשורים קשיים בגישה sclera האחורי עם מקור אור אולטרה סגול (UV), כמו גם את הצורך לשינוי הרבה יותר רקמת פני שטח. כי נאמר, הגישה CXL שימש לעצירת התארכות צירית בצורה ויזואלית, שללה ארנבים (על-ידי tarsorrhaphy), למרות מספר מחוזות בסקלרה האחורי נדרש אזורי הקרנה נפרדים מרובים באותו מחקר3. לעומת זאת, הזרקה של ייצוב סוכן כימי (קרי, הסוכן cross-linking) דרך המרחב הקדוש יכול לייצג דרך פשוטה יותר כדי לשנות את sclera האחורי, נמנע הצורך היכרות עם מקור אור UV. טכניקת ההזרקה הזו מוכרת היטב דרך שימושית של גרימת הרדמה עינית במהלך הליכי ophthalmologic כגון קטרקט כירורגיה4,5,6. Wollensak7 תיאר בעבר השימוש זריקה sT באמצעות גליצראלדהיד (cross-linking סוכן כימי דומה ברעיון פורמלדהיד שחרור סוכנים (פארס) המתוארים במחקר זה) להתקשות את sclera ארנב ואת genipin יש הוכח כדי להגביל את אורך צירית ב- FD שרקנים8,9. חוקרים אלה הראו יתרון ברור של שימוש סוכן כימי מסיסים על הטכניקה CXL פוטו אטמוספרי. לפיכך, scleral cross-linking באמצעות סוכן כימי זריקות מסוג כלשהו, כולל את פארס (קרי, TXL)10, יכול לספק שיטת טיפול אפשרי לעצור את ההתקדמות של התארכות scleral ראיתי קוצר ראייה.
ב הפרוטוקולים המובאת כאן, אנו משתמשים פתרון cross-linking כימית של נתרן hydroxymethylglycinate (SMG), באמצעות הזרקת sT לסקלרה של ארנב cadaveric עיניים. יישמנו פרוטוקולים דומה בעבר עבור אקטואלי כימי cross-linking הקרנית. ובמיוחד במחקרים שדווחה בעבר האלה, ריכוז התלויים cross-linking אפקטים היתה אפשרות להשיג באמצעות SMG, עם מגוון אפקט הנמשכים מעל זה השגה עם פוטו אטמוספרי CXL כפי שנקבע על ידי ניתוח דנטורציה התרמי11 .
כאן נתאר פרוטוקולים כדי להעריך את השפעת SMG מועברת באמצעות זריקות sT רקמת scleral, דנטורציה תרמי באמצעות Calorimetry סריקה דיפרנציאלית (DSC), ואת השנייה הרמונית דור מיקרוסקופ (SHGM) cross-linking.
שימוש דיפרנציאלי calorimetry סריקה (DSC), הידוע גם בשם אנליזה תרמית, מעבר דנטורציה תרמי נמדד, בשביל לרקמות scleral זה יוכפל לאחר המרתו מודרכת על ידי תכונות collagens fibrillar, מאז הם מהווים את הרוב בצובר של חלבון. שיטה זו מוערך יציבותו של המבנה המולקולרי של קולגן, חוב צולבים לייצב את הסיבים קולגן, מבנה שלישוני מקור החלבון העיקרי. במהלך חימום DSC, טמפרטורה קריטית המעבר מושגת שתוצאתו דנטורציה של מולקולת הקולגן, וכתוצאה מכך שהשתחרר של סליל משולש, תהליך המהווה מה הידוע בכינויו ג'לטין. דנטורציה תרמית זה משבש קשרי מימן לאורך מולקולת הקולגן, יכול להיות מוזז שהטמפרטורות עד המושרה cross-linking שיטות12,13. בשיטה זו נעשה שימוש במשך עשורים רבים, במיוחד בענף biomaterials ועל תהליכים הכוללים הכנת עור. אולם, שיטה זו דורש מיצוי של הרקמה בסקלרה, ולכן יכול להיות רק שימושי כמו טכניקה ex-vivo .
הדור השני-הרמוני מיקרוסקופ (SHGM) מבוססת על מאפיינים אופטיים ליניארי של חומר מסוים, עם סביבות מולקולרית הלא-centrosymmetric. חומרים כאלה, אור אינטנסיבי, לדוגמה אור המיוצר על ידי לייזרים, מחולל אותות SHG, שבו התקרית אור מוכפל בתדר. חומרים ביולוגיים ידועים כדי ליצור SHG אותות הם קולגן, microtubules, שרירים צולבות הקישור חוטים שרירן. לדוגמה, קולגן מתלהבים עם אור אינפרא-אדום של גל nm 860 יפלוט אות SHG בטווח גלוי עם 430 ננומטר אורך הגל. השני הרמונית דור (SHG) אות הדמיה היא שיטה מבטיחה להערכת cross-linking קולגן טיפולית. זה ידוע כבר יותר מ-30 שנה כי הסיבים קולגן ברקמות פולטים אותות SHG14. עם זאת, רק לאחרונה יכול תמונות ברזולוציה גבוהה ניתן להשיג15 במגוון של רקמות, כולל גיד16, עור, סחוס17, כלי הדם18, ו קולגן ג'לים19.
בהתבסס על הידע הזה, מחקר זה מעריך את השינויים אות SHG המושרה בסקלרה דרך SMG כימית המושרה cross-linking של קולגן. התוצאות מצביעות על כי השינוי SMG בסקלרה מגביר את אותות SHG המופק רקמת קולגן סיבים חבילות (גבוה יותר סדר רבעוני המבנה המורכב קולגן הסיבים), מייצרת גם בשינוי מורפולוגיות מבני הקולגן רשת סיבים, משתקפת סיבים צרור "מיישר."

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1441">
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:245px;">MILLI-Q SYNTHESIS A10 120V</td>
			<td style="width:289px;">EMD Millipore, Massachusetts, USA</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:796px;">Double distilled, deionized water. - protocol step 1.1.1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sodium hydroxymethylglycinate&#160;</td>
			<td>Tyger Chemicals Scientific, Inc. Ewing, NJ, USA</td>
			<td></td>
			<td>Crosslinking reagent - protocol step 1.1.2</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Injection needle with luer-lock syringe</td>
			<td>BD Eclipse, NJ, USA</td>
			<td></td>
			<td>Syringe for sub tenon injection. - protocol step 2.1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Rabbit head</td>
			<td>La Granja poultry</td>
			<td>Outbred</td>
			<td>Rabbit head separated and delivered within 1 hour postmortem. - protocol step 2.2</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Tono-pen&#160;</td>
			<td>Reichter Technologies Depew, NY</td>
			<td></td>
			<td>IOP measurements - protocol step 2.4</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">DSC 6000 Autosampler</td>
			<td>Perkin-Elmer Waltham, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td>Thermal denaturation analyzer - protocol step 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Pyris software&#160;</td>
			<td>Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA</td>
			<td>Ver 11.0</td>
			<td>&#160;protocol step 7.5</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">CFI75 Apochromat LWD 25X/1.10 W MP</td>
			<td>Nikon Instruments, Melville, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td>A water immersionn objective with high IR transmittance with a working distance of 2.0 mm - protocol step 8.1.1.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">GenTeal&#160;</td>
			<td>Alcon, Fort Worth, TX&#160;</td>
			<td>B000URVDQ8</td>
			<td>Water-based gel used as objective immersion medium instead of water to prevent evaporation - 8.1.1</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Chameleon Vision II&#160;</td>
			<td>Coherent, Santa Clara,CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>Ti:Sapphire pulsed laser with a 140 fs pulse width at 80 MHz and a tunable range from 680 nm to 1080 nm. - protocol step 8.1.11</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">AttoFluor cell chamber</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Inc</td>
			<td>A7816</td>
			<td>Fixation of the cover slip - protocol step 8.1.3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">25-mm round coverslips, #1.5</td>
			<td>Neuvitro Corporation, Vancouver, WA, USA</td>
			<td>GG-25-1.5</td>
			<td>protocol step 8.1.3</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Eclipse Ti-E</td>
			<td>Nikon Instruments, Melville, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td>protocol step 8.1.4.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Non-descanned (NDD) GaAsP detector</td>
			<td>Nikon Instruments, Melville, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td>Equipped with a 400-450 nm band pass filter - protocol step 8.1.7</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">A1R-MP laser scanning system</td>
			<td>Nikon Instruments, Melville, NY, USA</td>
			<td></td>
			<td>Compatible with infrared (IR) multi-photon excitation. - protocol step 8.1.8</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">NIS Elements software</td>
			<td>Nikon Instruments, Melville, NY, USA</td>
			<td>Ver 4.3</td>
			<td>refered to as &#34;software&#34; in the text - protocol step 8.1.9</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Fiji/ImageJ</td>
			<td>National Institute of Health</td>
			<td></td>
			<td>&#160;protocol step 9.1.2</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">NeuronJ</td>
			<td style="width:289px;">Eric Meijering, Erasmus University Medical Center, Rotterdam, The Netherlands</td>
			<td></td>
			<td>https://imagescience.org/meijering/software/neuronj/, for protocol step 9.2.2</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Microsoft Excel&#160;</td>
			<td>Microsoft Corporation, Redmond, WA, USA</td>
			<td>Ver 14</td>
			<td>protocol step 9.2.8</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

second harmonic generation signals in rabbit sclera as a tool for evaluation of therapeutic tissue cross-linking (txl) for myopia

שיטות לחיזוק הרקמה על ידי החדרת קשרים כימיים (שאינם אנזימטי cross-linking) לחלבונים מבניים (fibrillar collagens) לטיפול כוללות cross-linking פוטו אטמוספרי ורקמות cross-linking שיטות (TXL). שיטות כאלה עבור גרימת שינויים במאפייני רקמה מכנית להיות מועסקים בקרנית הקרנית דליל (נחלש באופן מכני) הפרעות כגון קרטוקונוס, כמו גם את sclera ב קוצר ראייה מתקדמת, בו דליל ואת היחלשות של הצד האחורי בסקלרה מתרחשת ותורם סביר כדי התארכות צירית. החלבונים המטרה העיקרית לחיזוק רקמות כאלה הם collagens fibrillar, המהווים את הרוב הגדול של חלבונים משקל יבש קרנית, sclera. הצלחתנו, fibrillar collagens הן המקור העיקרי של אותות הרמונית הדור השני בחלל חוץ-תאית ברקמות. לכן, השינויים של החלבונים קולגן, כגון אלה המושרה דרך cross-linking טיפולים, יכול באופן פוטנציאלי ועוזרת quantitated באמצעות מיקרוסקופ הרמונית הדור השני (SHGM). ניטור SHGM אותות באמצעות לייזר למערכת מיקרוסקופ בשילוב עם אור אינפרא-אדום עירור סריקת מקור הוא שיטת ההדמיה מודרני מרגש את נהנית השימוש הנרחב במדעים ביו. לפיכך, המחקר הנוכחי נערך על מנת להעריך את השימוש במיקרוסקופ SHGM כמו אמצעי למדידת המושרה cross-linking אפקטים ב- ex-vivo ארנב בסקלרה, בעקבות זריקה של חומר כימי cross-linking הסוכן לחלל תת-לגלף קוצים של (sT), הזרקת הגישה כי הוא מנהג לגרימת הרדמה עינית במהלך הליכי קליניים ophthalmologic. החומר הכימי cross-linking הסוכן, נתרן hydroxymethylglycinate (SMG), נמצא במרחק של מחלקה של קוסמטיים משמרים המכונה פורמלדהיד שחרור סוכנים (פארס). שינויים scleral בעקבות התגובה עם SMG, גרמו העלאות SHG אותות, בקורלציה עם שינויי טמפרטורה דנטורציה תרמי, שיטה סטנדרטית להערכת המושרה רקמות cross-linking אפקטים.

טמפרטורה דנטורציה תרמי (Tm) כמו שיטת assay להעריך TXL cross-linking אפקט: סכום כולל של 16 זוגות עיניים ארנב שימשו בניסויים אלה ההליך TXL. כחלק הראשונית של מחקר זה, הוערך הלוקליזציה של אפקט cross-linking, המושרה על ידי זריקה אחת של SMG cross-linking סוכן דרך סנט החלל בראש ארנב cadaveric. זה סוג של ני...

Watch this Scientific Journal Video about Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia at JoVE.com

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

השני דור הרמונית אותות ב הארנב בסקלרה ככלי להערכה של רקמות טיפולית cross-linking של קוצר ראייה (TXL)

פרוטוקול זה מתאר שיטות להערכת cross-linking כימי בסקלרה ארנב באמצעות הדור השני הרמונית הדמיה ודיפרנציאלי סריקה calorimetry.

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy ...

second-harmonic-generation-signals-rabbit-sclera-as-tool-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia

7.7K Views.  Columbia University College of Physicians and Surgeons. פרוטוקול זה מתאר שיטות להערכת cross-linking כימי בסקלרה ארנב באמצעות הדור השני הרמונית הדמיה ודיפרנציאלי סריקה calorimetry.

Video: Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

Generation of Comprehensive Thoracic Oncology Database - Tool for Translational Research

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer specimens and clinical data to be available to researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database also captures a large volume of genomic and proteomic data obtained from various tumor tissue studies. A team of clinical and basic science researchers, a biostatistician, and a bioinformatics expert was convened to design the database. Variables of interest were clearly defined and their descriptions were written within a standard operating manual to ensure consistency of data annotation. Using a protocol for prospective tissue banking and another protocol for retrospective banking, tumor and normal tissue samples from patients consented to these protocols were collected. Clinical information such as demographics, cancer characterization, and treatment plans for these patients were abstracted and entered into an Access database. Proteomic and genomic data have been included in the database and have been linked to clinical information for patients described within the database. The data from each table were linked using the relationships function in Microsoft Access to allow the database manager to connect clinical and laboratory information during a query. The queried data can then be exported for statistical analysis and hypothesis generation.

A thoracic oncology database was developed to serve as a comprehensive repository for clinical and laboratory data for the purposes of translational research. The database will serve translational cancer researchers within the Thoracic Oncology Research Program. This database is adaptable to other cancer models, as well as other human diseases.

הדור של מסד נתונים מקיף החזה אונקולוגיה - כלי למחקר Translational

The Thoracic Oncology Program Database Project was created to serve as a comprehensive, verified, and accessible repository for well-annotated cancer ...

Osteopathic Manipulative Treatment as a Useful Adjunctive Tool for Pneumonia

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in the hospitalization of 1.1 million patients2. With an average length of in-patient hospital stay of five days2, pneumonia and influenza comprise significant financial burden costing the United States $40.2 billion in 20053. Under the current Infectious Disease Society of America/American Thoracic Society guidelines, standard-of-care recommendations include the rapid administration of an appropriate antibiotic regiment, fluid replacement, and ventilation (if necessary). Non-standard therapies include the use of corticosteroids and statins; however, these therapies lack conclusive supporting evidence4. (Figure 1)

Osteopathic Manipulative Treatment (OMT) is a cost-effective adjunctive treatment of pneumonia that has been shown to reduce patients&#8217; length of hospital stay, duration of intravenous antibiotics, and incidence of respiratory failure or death when compared to subjects who received conventional care alone5. The use of manual manipulation techniques for pneumonia was first recorded as early as the Spanish influenza pandemic of 1918, when patients treated with standard medical care had an estimated mortality rate of 33%, compared to a 10% mortality rate in patients treated by osteopathic physicians6. When applied to the management of pneumonia, manual manipulation techniques bolster lymphatic flow, respiratory function, and immunological defense by targeting anatomical structures involved in the these systems7,8, 9, 10.

The objective of this review video-article is three-fold: a) summarize the findings of randomized controlled studies on the efficacy of OMT in adult patients with diagnosed pneumonia, b) demonstrate established protocols utilized by osteopathic physicians treating pneumonia, c) elucidate the physiological mechanisms behind manual manipulation of the respiratory and lymphatic systems. Specifically, we will discuss and demonstrate four routine techniques that address autonomics, lymph drainage, and rib cage mobility: 1) Rib Raising, 2) Thoracic Pump, 3) Doming of the Thoracic Diaphragm, and 4) Muscle Energy for Rib 1.5,11

Pneumonia is one of the top ten leading causes of death in the U.S. Osteopathic manipulative techniques (OMT) may be utilized as an adjunctive therapy in the treatment of pneumonia to enhance biomechanical and immune function; and ultimately, to reduce hospital stay, duration of antibiotics, incidence of respiratory failure, and mortality. In this video-article, we will review randomized controlled studies on the use of OMT in pneumonia patients, as well as demonstrate specific hands-on techniques that are routinely practiced by osteopathic physicians when treating pulmonary infections.

מניפולטיבי טיפול אוסטיאופתי ככלי משלים שימושי עבור דלקת ריאות

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in ...

A Next-generation Tissue Microarray (ngTMA) Protocol for Biomarker Studies

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into a &#8216;recipient&#8217; block and then used for a variety of biomarker applications. The construction of conventional TMAs is labor intensive, imprecise, and time-consuming. Here, a protocol using next-generation Tissue Microarrays (ngTMA) is outlined. ngTMA is based on TMA planning and design, digital pathology, and automated tissue microarraying. The protocol is illustrated using an example of 134 metastatic colorectal cancer patients. Histological, statistical and logistical aspects are considered, such as the tissue type, specific histological regions, and cell types for inclusion in the TMA, the number of tissue spots, sample size, statistical analysis, and number of TMA copies. Histological slides for each patient are scanned and uploaded onto a web-based digital platform. There, they are viewed and annotated (marked) using a 0.6-2.0 mm diameter tool, multiple times using various colors to distinguish tissue areas. Donor blocks and 12 &#8216;recipient&#8217; blocks are loaded into the instrument. Digital slides are retrieved and matched to donor block images. Repeated arraying of annotated regions is automatically performed resulting in an ngTMA. In this example, six ngTMAs are planned containing six different tissue types/histological zones. Two copies of the ngTMAs are desired. Three to four slides for each patient are scanned; 3 scan runs are necessary and performed overnight. All slides are annotated; different colors are used to represent the different tissues/zones, namely tumor center, invasion front, tumor/stroma, lymph node metastases, liver metastases, and normal tissue. 17 annotations/case are made; time for annotation is 2-3 min/case. 12 ngTMAs are produced containing 4,556 spots. Arraying time is 15-20 hr. Due to its precision, flexibility and speed, ngTMA is a powerful tool to further improve the quality of TMAs used in clinical and translational research.

A Next-generation Tissue Microarray ngTMA Protocol for Biomarker Studies

The protocol aims at optimizing the construction and quality of tissue microarrays for biomarker research. It includes aspects of planning and design, digital pathology, virtual slide annotation, and automated tissue arraying.

פרוטוקול Microarray רקמות הדור הבא (ngTMA) לביומרקר לימודים

Biomarker research relies on tissue microarrays (TMA). TMAs are produced by repeated transfer of small tissue cores from a &#8216;donor&#8217; block into ...

Fundus Photography as a Convenient Tool to Study Microvascular Responses to Cardiovascular Disease Risk Factors in Epidemiological Studies

The microcirculation consists of blood vessels with diameters less than 150 &#181;m. It makes up a large part of the circulatory system and plays an important role in maintaining cardiovascular health. The retina is a tissue that lines the interior of the eye and it is the only tissue that allows for a non-invasive analysis of the microvasculature. Nowadays, high-quality fundus images can be acquired using digital cameras. Retinal images can be collected in 5 min or less, even without dilatation of the pupils. This unobtrusive and fast procedure for visualizing the microcirculation is attractive to apply in epidemiological studies and to monitor cardiovascular health from early age up to old age.
Systemic diseases that affect the circulation can result in progressive morphological changes in the retinal vasculature. For example, changes in the vessel calibers of retinal arteries and veins have been associated with hypertension, atherosclerosis, and increased risk of stroke and myocardial infarction. The vessel widths are derived using image analysis software and the width of the six largest arteries and veins are summarized in the Central Retinal Arteriolar Equivalent (CRAE) and the Central Retinal Venular Equivalent (CRVE). The latter features have been shown useful to study the impact of modifiable lifestyle and environmental cardiovascular disease risk factors.
The procedures to acquire fundus images and the analysis steps to obtain CRAE and CRVE are described. Coefficients of variation of repeated measures of CRAE and CRVE are less than 2% and within-rater reliability is very high. Using a panel study, the rapid response of the retinal vessel calibers to short-term changes in particulate air pollution, a known risk factor for cardiovascular mortality and morbidity, is reported. In conclusion, retinal imaging is proposed as a convenient and instrumental tool for epidemiological studies to study microvascular responses to cardiovascular disease risk factors.

Retinal image analysis is an unobtrusive procedure for visualizing the microcirculation. The impact of cardiovascular disease risk factors can result in changes of retinal vessel calibers. The procedures to acquire fundus images and the steps for calculating the vessel calibers are described.

צילום קרקעית העין ככלי נוח ללמוד תגובות כלי הדם לגורמי סיכון קרדיווסקולריים מחלות באפידמיולוגיים לימודים

The microcirculation consists of blood vessels with diameters less than 150 &#181;m. It makes up a large part of the circulatory system and plays an ...

Therapeutic Effectiveness of a Dietary Supplement for Management of Halitosis in Dogs

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized placebo-controlled crossover clinical evaluation, we assessed&#160;the effectiveness of a dedicated dietary supplement to improve chronic halitosis in 32 dogs of different breeds and ages. This protocol describes how to evalute the presence of oral volatile suphur compunds, e.g. methyl mercaptan, hydrogen sulfide and dimethyl sulfide, by means of a portable gas chromatograph device coupled with a syringe, which was used to collect the breath, and a dedicated software, which allows the operator to monitor each compound concentration during each measurement, in a relatively short time (8 min).
A significant modification of halitosis parameters was observed after 30 days since the beginning of treatment (p &#60;0.05), while a long-lasting effect was still observed even 20 days after the suspension of the treatment. Portable gas chromatograph, which is also widely used in clinical practice, can be therefore used to confirm&#160;and control halitosis in humans and animals. Even though human and animal species present some differences,&#160;this innovative and alternative therapy for halitosis management might be extended to human clinical practice as an adjuvant dietary approach.

We describe a simple approach for diagnosis of halitosis in dogs as well as a dietary approach for its management. This protocol may be extended to the management of halitosis in humans in the near future.

יעילות טיפולית של תוסף תזונה לניהול של באשת בכלבים

Halitosis is a common complaint involving social and communicational problems in humans and also affects the pet-owner relationship. In this randomized ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

הערכת היעילות של<em&gt; H. פילורי</em&gt; חלבון HP-NAP ככלי טיפולי לטיפול בסרטן שלפוחית ​​השתן בדגם Murine Orthotopic

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

MRI-guided dmPFC-rTMS as a Treatment for Treatment-resistant Major Depressive Disorder

Here we outline the protocol for magnetic resonance imaging (MRI) guided repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) to the dorsal medial prefrontal cortex (dmPFC) in patients with major depressive disorder (MDD). Technicians used a neuronavigation system to process patient MRIs to generate a 3-dimensional head model. The head model was subsequently used to identify patient-specific stimulatory targets. The dmPFC was stimulated daily for 20 sessions. Stimulation intensity was titrated to address scalp pain associated with rTMS. Weekly assessments were conducted on the patients using the Hamilton Rating Scale for Depression (HamD17) and Beck Depression Index II (BDI-II). Treatment-resistant MDD patients achieved significant improvements on both HAMD and BDI-II. Of note, angled, double-cone coil rTMS at 120% resting motor threshold allows for optimal stimulation of deeper midline prefrontal regions, which results in a possible therapeutic application for MDD. One major limitation of the rTMS field is the heterogeneity of treatment parameters across studies, including duty cycle, number of pulses per session and intensity. Further work should be done to clarify the effect of stimulation parameters on outcome. Future dmPFC-rTMS work should include sham-controlled studies to confirm its clinical efficacy in MDD.

Here we outline the procedure for MRI-guided repetitive transcranial magnetic stimulation to the dorsomedial prefrontal cortex as an experimental treatment for major depressive disorder.

MRI מודרך dmPFC-rTMS כטיפול להפרעת דיכאון עמיד לטיפול

Here we outline the protocol for magnetic resonance imaging (MRI) guided repetitive transcranial magnetic stimulation (rTMS) to the dorsal medial ...

Scleral Cross-linking Using Riboflavin and Ultraviolet-A Radiation for Prevention of Axial Myopia in a Rabbit Model

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal abnormalities. In addition, pathological myopia is a common irreversible cause of visual impairment and blindness1-3. Our study demonstrates the effect of scleral crosslinking using riboflavin and ultraviolet-A radiation on the development of axial myopia in a rabbit model. The axial length of the eyeball was measured by A-scan ultrasound in New Zealand white rabbits aged 13 days (male and female). The eye then underwent 360&#176; conjunctival peritomy with scleral crosslinking, followed by tarsorrhaphy. Axial elongation was induced in 13 day-old New Zealand rabbits by suturing their right eye eyelids (tarsorrhaphy). The eyes were divided into quadrants, and every quadrant had two scleral irradiation zones, each with an area of 0.2 cm&#178; and a radius of 4 mm. Crosslinking was performed by dropping 0.1% dextran-free riboflavin-5-phosphate onto the irradiation zones 20 sec before ultraviolet-A irradiation and every 20 sec during the 200 sec irradiation time. UVA radiation (370 nm) was applied perpendicular to the sclera at 57 mW/cm&#178; (total UVA light dose, 57 J/cm&#178;). Tarsorrhaphies were removed on day 55, followed by repeated axial length measurements. This study demonstrates that scleral crosslinking with riboflavin and ultraviolet-A radiation effectively prevents occlusion-induced axial elongation in a rabbit model.

We demonstrate the effect of scleral crosslinking with riboflavin and UVA on an axial elongation rabbit eye. Axial elongation was induced in 13 day-old New Zealand rabbits (male and female) by suturing their right eye eyelids (tarsorrhaphy).

Scleral Cross-linking שימוש ריבופלבין ו-סגול-קרינה למניעת Axial קוצר ראיה במודל הארנב

Myopic individuals, especially those with severe myopia, are at higher-than-normal risk of cataract, glaucoma, retinal detachment and chorioretinal ...

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

Tubal ציטולוגיה של שפופרת Tube ככלי מבטיח עבור סרטן השחלות איתור מוקדם

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

בריחי וריד לנקב כאמצעי חלופי של איסוף דגימת דם בחולדות

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...