The authors have no acknowledgements.

פרוטוקולים אלה פעלו בהתאם להנחיות של ועדת האתיקה במחקר האנושית של המוסד שלנו. 1. קונבנציונלי קרנית קולגן CXL (C-CXL) 1. הכנת החולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5 ימים לפני הניתוח, לשים pilocarpine% 1 טיפות פעמיים ביום בעיניים שטופלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר הניתוח, בתנאים אספטיים, לשכב על גב המטופל שלו / שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל הרדמה מקומית כגון oxybuprocaine 0.4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות את העין ואת העור סביב העין עם יוד חיטוי פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בספקולום מכסה כדי לשמור על העיניים פתוחות. </li></ol> 2. הסרת אפיתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן 9.0 מ&quot;מ של הקרנית עם סמן קרני מעגל המרכזי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את 7.0-9.0 מ&quot;מ המרכזי של אפיתל קרני על ידי הטריה מכאנית בעזרת מרית בוטה. </li></ol> 3. ריבופלבין יישום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל 0.1% ריבופלבין עם 20% Dextran על ה<html> קרנית דואר בכל דקות במשך 20 דקות. </li></ol> הקרנת 4. UVA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר את הקרנית עם אור באורך גל UVA 370 ננומטר בirradiance של 3 mW / 2 סנטימטר (5.4 מנת משטח / 2 סנטימטר J) ובמרחק 5 סנטימטר עובד למשך 30 דקות. </li></ol><img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig1.jpg" /> איור 1:. הקרנת UVA בC-CXL הקרנית מוקרן עם אור באורך גל UVA 370 ננומטר בirradiance של 3 mW / 2 סנטימטר (5.4 מנת משטח / 2 סנטימטר J) ובמרחק 5 סנטימטר עובד במשך 30 דקות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הקרנה, חלים טיפות ריבופלבין לקרנית כל 5 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך הקרנה, להוסיף הרדמה מקומית (oxybuprocaine 0.4%) במידת צורך. </li></ol>&quot;&gt; 5. סוף הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> טיפות לשים אנטיביוטיקה (tobramycin 0.3%) ודמעות מלאכותיות (Hyaluronate טיפות 0.18%) לתוך העין פעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עדשות מגע תחבושת רכות בסוף הניתוח עד מחדש epithelialization הוא מלא. Epithelialization-מחדש בדרך כלל לוקח 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרשום משככי כאבים כגון אקמול (500 מ&quot;ג) בתוספת קודאין (30 מ&quot;ג), 6 כדורים ביום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר epithelialization מחדש של הקרנית, ליזום טיפול מקומי בסטרואידים (מ&quot;ג / מיליליטר dexamethasone 1 אקטואלי) ולהמשיך במשך 3-4 שבועות. בנוסף, השתמש דמעות מלאכותיות 4 פעמים ביום למשך 1 חודש. </li></ol> 2. קרנית מואצת קולגן CXL (CXL-) 1. הכנת החולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5 ימים לפני הניתוח, לשים pilocarpine% 1 טיפות פעמיים ביום בעיניים שטופלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר הניתוח, בתנאים אספטיים, לשכב על גב המטופל שלו / שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל הרדמה מקומית כגון oxybuprocaine 0.4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נקה את הדואראתם והעור סביב העין עם יוד חיטוי פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בספקולום מכסה כדי לשמור על העיניים פתוחות. </li></ol> 2. הסרת אפיתל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סמן 9.0 מ&quot;מ המרכזי של הקרנית עם סמן קרני מעגל </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את 7.0-9.0 מ&quot;מ המרכזי של אפיתל קרני על ידי הטריה מכאנית בעזרת מרית בוטה. </li></ol> 3. ריבופלבין יישום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל ריבופלבין 0.1% ללא Dextran על הקרנית כל 2 דקות במשך 10 דקות. </li></ol> הקרנת 4. UVA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר את הקרנית עם אור באורך גל UVA 370 ננומטר בirradiance של 30 mW / 2 סנטימטר (5.4 J / 2 סנטימטר מינון פני השטח) ובמרחק עבודה 5 סנטימטר 3 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך ההקרנה, להוסיף הרדמה מקומית (oxybuproca &amp; # 239; ne 0.4%) במידת צורך. </li></ol> 5. סוף הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח טיפות אנטיביוטיות (tobramycin 0.3%) ודמעות מלאכותיות (Hyaluronate טיפות 0<html> .18%) לתוך העין פעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים עדשות מגע תחבושת רכות בסוף הניתוח עד מחדש epithelialization הוא מלא. Epithelialization-מחדש בדרך כלל לוקח 3 ימים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרשום משככי כאבים כגון אקמול (500 מ&quot;ג) בתוספת קודאין (30 מ&quot;ג), 6 כדורים ביום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר epithelialization מחדש של הקרנית, ליזום טיפול מקומי בסטרואידים (מ&quot;ג / מיליליטר dexamethasone 1 אקטואלי) ולהמשיך במשך 3-4 שבועות. בנוסף, השתמש דמעות מלאכותיות 4 פעמים ביום למשך 1 חודש. </li></ol> 3. Iontophoresis (I-CXL) 1. הכנת החולה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 5 ימים לפני הניתוח, לשים pilocarpine% 1 טיפות פעמיים ביום בעיניים שטופלו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחדר הניתוח, בתנאים אספטיים, לשכב על גב המטופל שלו / שלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנהל הרדמה מקומית כגון oxybuprocaine 0.4%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקות את העין ואת העור סביב העין עם יוד חיטוי פעמיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש בספקולום מכסה כדי לשמור על העיניים פתוחות. </li></ol><html> _step &quot;&gt; 2. מקמו את התקן Iontophoresis. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל האלקטרודה הפסיבית הדביקה על המצח מתחת לשדה האופרטיבי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל האלקטרודה הפעילה, טבעת יניקה, לעין הפתוחה. מרכז את טבעת היניקה בפריפריה של הקרנית לפני שחרור היניקה. </li></ol><img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig2.jpg" /> איור 2. מכשיר Iontophoresis. אלקטרודה הפסיבית מוחלת על המצח מתחת לשדה האופרטיבי ואלקטרודה הפעילה, טבעת יניקה, מוחל על העיניים פתוחות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 3. ריבופלבין יישום <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מלא את טבעת היניקה עם% 0.1 hypoosmolar ריבופלבין ללא Dextran. </li></ol><html> jpg &quot;/&gt; איור 3. יישום ריבופלבין באני-CXL. טבעת היניקה מלאה בriboflavine 0.1% hypoosmolar ללא Dextran. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <ol start="2" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> התחל הזרם החשמלי על 0.2 מילי-אמפר ולהגדיל בהדרגה עד 1.0 מילי-אמפר לשעת iontophoresis כולל של 5 דקות (איור 4). </li></ol><img alt="איור 4" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig4.jpg" /> איור 4. מכשיר Iontophoresis לריבופלבין חדירה. הזרם החשמלי הוא בתחילה 0.2 מילי-אמפר וגדל בהדרגה עד 1.0 מילי-אמפר. זמן iontophoresis הכולל הוא 5 דקות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> EP &quot;&gt; 4. UVA הקרנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכשיר את הקרנית עם אור באורך גל UVA 370 ננומטר בirradiance של 10 mW / 2 סנטימטר (5.4 J / 2 סנטימטר מינון פני השטח) ובמרחק עבודה 5 סנטימטר ל9 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> במהלך ההקרנה, להוסיף הרדמה מקומית (oxybuproca &amp; # 239; ne 0.4%) במידת צורך. </li></ol> 5. סוף הניתוח <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הנח טיפות אנטיביוטיות (tobramycin 0.3%) ודמעות מלאכותיות (Hyaluronate טיפות 0.18%) לתוך העין פעלה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לרשום משככי כאבים כגון אקמול (500 מ&quot;ג) בתוספת קודאין (30 מ&quot;ג), 6 כדורים ביום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר ניתוח, ליזום טיפול מקומי בסטרואידים (1 מ&quot;ג / מיליליטר dexamethasone אקטואלי) ולהמשיך במשך 3-4 שבועות. בנוסף, השתמש דמעות מלאכותיות 4 פעמים ביום למשך 1 חודש. </li></ol>

<ol>
	<li>Rabinowitz, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keratoconus.">Keratoconus.</a> Surv Ophthalmol. 42 (4), 297-319 (1998).</li><li>Tuori, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunohistochemical+composition+of+corneal+basement+membrane+in+keratoconus.">The immunohistochemical composition of corneal basement membrane in keratoconus.</a> Curr Eye Res. 16 (8), 792-801 (1997).</li><li>Wollensak, G., Spoerl, E., Seiler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Riboflavin/ultraviolet-A-induced+collagen+cross-linking+for+the+treatment+of+keratoconus.">Riboflavin/ultraviolet-A-induced collagen cross-linking for the treatment of keratoconus.</a> Am J Ophthalmol. 135 (5), 620-627 (2003).</li><li>Raiskup-Wolf, F., Hoyer, A., Spoerl, E., Pillunat, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+cross-linking+with+riboflavin+and+ultraviolet-A+light+in+keratoconus:+long-term+results.">Collagen cross-linking with riboflavin and ultraviolet-A light in keratoconus: long-term results.</a> J Cataract Refract Surg. 34 (5), 796-801 (2008).</li><li>Vinciguerra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=topographic,+tomographic,+and+aberrometric+analysis+of+keratoconic+eyes+undergoing+corneal+cross-linking.">topographic, tomographic, and aberrometric analysis of keratoconic eyes undergoing corneal cross-linking.</a> Ophthalmology. 116 (3), 369-378 (2009).</li><li>Caporossi, A., Mazzotta, C., Baiocchi, S., Caporossi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+results+of+riboflavin+ultraviolet-A+corneal+collagen+cross-linking+for+keratoconus+in+Italy:+the+Siena+eye+cross+study.">Long-term results of riboflavin ultraviolet-A corneal collagen cross-linking for keratoconus in Italy: the Siena eye cross study.</a> Am J Ophthalmol. 149 (4), 585-593 (2010).</li><li>Greenstein, S. A., Fry, K. L., Hersh, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+topography+indices+after+corneal+collagen+cross-linking+for+keratoconus+and+corneal+ectasia:+one-year+results.">Corneal topography indices after corneal collagen cross-linking for keratoconus and corneal ectasia: one-year results.</a> J Cataract Refract Surg. 37 (7), 1282-1290 (2011).</li><li>Ghanem, R. C., Santhiago, M. R., Berti, T., Netto, M. V., Ghanem, V. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topographic+corneal+wavefront,+and+refractive+outcomes+2+years+after+collagen+cross-linking+for+progressive+keratoconus.">Topographic corneal wavefront, and refractive outcomes 2 years after collagen cross-linking for progressive keratoconus.</a> Cornea. 33 (1), 43-48 (2014).</li><li>Koller, T., Mrochen, M., Seiler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complication+and+failure+rates+after+corneal+cross-linking.">Complication and failure rates after corneal cross-linking.</a> J Cataract Refract Surg. 35 (8), 1358-1362 (2009).</li><li>Rocha, K. M., Ramos-Esteban, J. C., Qian, Y., Herekar, S., Krueger, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+riboflavin-UVA+cross-linking+and+&#8220;flash-linking&#8221;+using+surface+wave+elastometry.">Comparative study of riboflavin-UVA cross-linking and &#8220;flash-linking&#8221; using surface wave elastometry.</a> J Refract Surg. 24 (7), 748-751 (2008).</li><li>Caporossi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+corneal+collagen+crosslinking+for+progressive+keratoconus:+24-month+clinical+results.">Transepithelial corneal collagen crosslinking for progressive keratoconus: 24-month clinical results.</a> J Cataract Refract Surg. 39 (8), 1157-1163 (2013).</li><li>Bikbova, G., Bikbov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+corneal+collagen+cross-linking+by+iontophoresis+of+riboflavin.">Transepithelial corneal collagen cross-linking by iontophoresis of riboflavin.</a> Acta Ophthalmol. 92 (1), 30-34 (2014).</li><li>Efron, N., Hollingsworth, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+perspectives+on+keratoconus+as+revealed+by+corneal+confocal+microscopy.">New perspectives on keratoconus as revealed by corneal confocal microscopy.</a> Clin Exp Optom. 91 (1), 34-55 (2008).</li><li>Patel, D. V., McGhee, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+corneal+sub-basal+nerve+plexus+in+keratoconus+by+in+vivo+laser+scanning+confocal+microscopy.">Mapping the corneal sub-basal nerve plexus in keratoconus by in vivo laser scanning confocal microscopy.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 47 (4), 1348-1351 (2006).</li><li>Ku, J. Y., Niederer, R. L., Patel, D. V., Sherwin, T., McGhee, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+scanning+in+vivo+confocal+analysis+of+keratocyte+density+in+keratoconus.">Laser scanning in vivo confocal analysis of keratocyte density in keratoconus.</a> Ophthalmology. 115 (5), 845-850 (2008).</li><li>Mazzotta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+healing+after+riboflavin+ultraviolet-A+collagen+cross-linking+determined+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+vivo:+early+and+late+modifications.">Corneal healing after riboflavin ultraviolet-A collagen cross-linking determined by confocal laser scanning microscopy in vivo: early and late modifications.</a> Am J Ophthalmol. 146 (4), 527-533 (2008).</li><li>Seiler, T., Hafezi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+cross-linking-induced+stromal+demarcation+line.">Corneal cross-linking-induced stromal demarcation line.</a> Cornea. 25 (9), 1057-1059 (2006).</li><li>Doors, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+anterior+segment+optical+coherence+tomography+to+study+corneal+changes+after+collagen+cross-linking.">Use of anterior segment optical coherence tomography to study corneal changes after collagen cross-linking.</a> Am J Ophthalmol. 148 (6), 844-851 (2009).</li><li>Mazzotta, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+progressive+keratoconus+by+riboflavin-UVA-induced+cross-linking+of+corneal+collagen:+ultrastructural+analysis+by+Heidelberg+Retinal+Tomograph+II+in+vivo+confocal+microscopy+in+humans.">Treatment of progressive keratoconus by riboflavin-UVA-induced cross-linking of corneal collagen: ultrastructural analysis by Heidelberg Retinal Tomograph II in vivo confocal microscopy in humans.</a> Cornea. 26 (4), 390-397 (2007).</li><li>Kymionis, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+the+corneal+collagen+cross-linking+demarcation+line+using+confocal+microscopy+and+anterior+segment+optical+coherence+tomography+in+keratoconic+patients.">Correlation of the corneal collagen cross-linking demarcation line using confocal microscopy and anterior segment optical coherence tomography in keratoconic patients.</a> Am J Ophthalmol. 157 (1), 110-115 (2014).</li><li>Yam, J. C., Chan, C. W., Cheng, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+collagen+cross-linking+demarcation+line+depth+assessed+by+Visante+OCT+After+CXL+for+keratoconus+and+corneal+ectasia.">Corneal collagen cross-linking demarcation line depth assessed by Visante OCT After CXL for keratoconus and corneal ectasia.</a> J Refract Surg. 28 (7), 475-481 (2012).</li><li>Jordan, C., Patel, D. V., Abeysekera, N., McGhee, C. .. N. .. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+confocal+microscopy+analyses+of+corneal+microstructural+changes+in+a+prospective+study+of+collagen+cross-linking+in+keratoconus.">In vivo confocal microscopy analyses of corneal microstructural changes in a prospective study of collagen cross-linking in keratoconus.</a> Ophthalmology. 121 (2), 469-474 (2014).</li><li>Touboul, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+confocal+microscopy+following+conventional,+transepithelial,+and+accelerated+corneal+collagen+cross-linking+procedures+for+keratoconus.">Corneal confocal microscopy following conventional, transepithelial, and accelerated corneal collagen cross-linking procedures for keratoconus.</a> J Refract Surg. 28 (11), 769-776 (2012).</li><li>Bouheraoua, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+coherence+tomography+and+confocal+microscopy+following+three+different+protocols+of+corneal+collagen-crosslinking+in+keratoconus.">Optical coherence tomography and confocal microscopy following three different protocols of corneal collagen-crosslinking in keratoconus.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (11), 7601-7609 (2014).</li><li>Hafezi, F., Mrochen, M., Iseli, H. P., Seiler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+crosslinking+with+ultraviolet-A+and+hypoosmolar+riboflavin+solution+in+thin+corneas.">Collagen crosslinking with ultraviolet-A and hypoosmolar riboflavin solution in thin corneas.</a> J Cataract Refract Surg. 35 (4), 621-624 (2009).</li><li>C&#305;nar, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+accelerated+and+conventional+corneal+collagen+cross-linking+for+progressive+keratoconus.">Comparison of accelerated and conventional corneal collagen cross-linking for progressive keratoconus.</a> Cutan Ocul Toxicol. 33 (3), 218-222 (2013).</li><li>Cing&#252;, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+corneal+endothelial+changes+following+accelerated+collagen+cross-linking+for+the+treatment+of+progressive+keratoconus.">Transient corneal endothelial changes following accelerated collagen cross-linking for the treatment of progressive keratoconus.</a> Cutan Ocul Toxicol. 33 (2), 127-131 (2013).</li><li>Spoerl, E., Mrochen, M., Sliney, D., Trokel, S., Seiler, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+of+UVA-riboflavin+cross-linking+of+the+cornea.">Safety of UVA-riboflavin cross-linking of the cornea.</a> Cornea. 26 (4), 385-389 (2007).</li><li>Gokhale, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+endothelial+damage+after+collagen+cross-linking+treatment.">Corneal endothelial damage after collagen cross-linking treatment.</a> Cornea. 30 (12), 1495-1498 (2011).</li><li>Rootman, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacokinetics+and+safety+of+transcorneal+iontophoresis+of+tobramycin+in+the+rabbit.">Pharmacokinetics and safety of transcorneal iontophoresis of tobramycin in the rabbit.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 29 (9), 1397-1401 (1998).</li><li>Vinciguerra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+iontophoresis+corneal+collagen+cross-linking+for+progressive+keratoconus:+initial+clinical+outcomes.">Transepithelial iontophoresis corneal collagen cross-linking for progressive keratoconus: initial clinical outcomes.</a> J Refract Surg. 30 (11), 746-753 (2014).</li><li>Caporossi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Riboflavin-UVA-induced+corneal+collagen+cross-linking+in+pediatric+patients.">Riboflavin-UVA-induced corneal collagen cross-linking in pediatric patients.</a> Cornea. 31 (3), 227-231 (2012).</li><li>Buzzonetti, L., Petrocelli, G., Valente, P., Larossi, G., Ardia, R., Petroni, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Iontophoretic+transepithelial+corneal+cross-linking+to+halt+keratoconus+in+pediatric+cases:+15-month+follow-up.">Iontophoretic transepithelial corneal cross-linking to halt keratoconus in pediatric cases: 15-month follow-up.</a> Cornea. 34 (5), 512-515 (2015).</li><li>Baiocchi, S., Mazzotta, C., Cerretani, D., Caporossi, T., Caporossi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corneal+crosslinking:+riboflavin+concentration+in+corneal+stroma+exposed+with+and+without+epithelium.">Corneal crosslinking: riboflavin concentration in corneal stroma exposed with and without epithelium.</a> J Cataract Refract Surg. 35 (5), 893-899 (2009).</li><li>Wollensak, G., Iomdina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+and+histological+changes+after+corneal+crosslinking+with+and+without+epithelial+debridement.">Biomechanical and histological changes after corneal crosslinking with and without epithelial debridement.</a> J Cataract Refract Surg. 35 (3), 540-546 (2009).</li><li>Soeters, N., Wisse, R. P., Godefrooij, D. A., Imhof, S. M., Tahzib, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transepithelial+versus+epithelium-off+corneal+cross-linking+for+the+treatment+of+progressive+keratoconus:+a+randomized+controlled+trial.">Transepithelial versus epithelium-off corneal cross-linking for the treatment of progressive keratoconus: a randomized controlled trial.</a> Am J Ophthalmol. 159 (5), 821-828 (2015).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

CXL באמצעות קרינת UVA וריבופלבין הוא הטיפול הסטנדרטי למעצר ההתקדמות של קרטוקונוס. ריבופלבין הוא הפוטוסנסיטייזר אשר גורם קשרים קוולנטיים (קישורים צולבים) כימיים כאשר מוקרן עם UVA 3. בקרנית, תופעה זו יוצרת צלב קישורים בין סיבי קולגן המגבירים קשיחות קרנית. למרות שתופעה זו מתוארת היטב, עד עכשיו לא הייתה שום עדות ישירה של קישורים צולבים intracorneal. עם זאת, מספר מחקרים דיווחו התייצבות Kmax לאחר ההליך ובכך הוכיח את היעילות של C-CXL 3-8. השאלה האם יעילות זה נובעת קישורים צולבים או לשינויי microstructural אחרים בסטרומה הקרנית נותרה ללא מענה. אחת התוצאות הקליניות העקיפות של יעילות CXL הוא קו התיחום קרני זוהה עם AS OCT ו1 IVCM חודש לאחר CXL. לאחרונה, Kymionis et al. הראה כי אווה hyperreflectanceluated באמצעות AS אוקטובר מתאים לאזור המעבר בין acellular והאזור הסלולרי ראה במיקרוסקופ confocal 20. לפיכך, קו תיחום הקרנית ראה כאוקטובר חייב מתאים לאזור של keratocytes וfibroblastes מופעל תחת סטרומה acellular ומעל אחד נורמלי. יחד עם זאת, ים ומקורבים 21 לא הצליחו להוכיח קשר בין עומק קו תיחום CXL עם שינוי של חדות ראייה ושל K-ערך המקסימאלי של 6 חודשים לאחר C-CXL. השאלה אם כמות גדולה יותר של CXL יכולה לגרום לשיפור גדול יותר בחדות ראייה וירידה גדולה יותר של keratometry נשארה הנושא למחקרים עם מעקב לאחר ניתוח ארוך יותר. בנוסף, בנוגע לספירת צפיפות keratocyte סטרומה הקדמית הממוצעת בIVCM, ירידה משמעותית נצפתה במהלך 6 החודשים הראשונים, עם נורמליזציה לאחר 12 חודשים עם C-CXL ו- CXL, ולאחר 6 חודשים עם I-CXL 22-24 . כתוצאה מכך, שונה בקרנית microstructuralשינויים יופיעו תלויות בסוג של פרוטוקול cross-linking קולגן בשימוש. תוצאה זו והעובדה כי קו תיחום הקרנית הופיע עמוק יותר באופן משמעותי לאחר C-CXL מאשר אחרי-CXL או I-CXL מאפשר לנו לדון באינדיקציה והיעילות של שלושת פרוטוקולים אלה. הפרוטוקול הקונבנציונלי כבר הוכיח את יעילותה ובטיחות במעקב מקסימאלי של 6 שנים 3-8. C-CXL דורש pachymetry קרנית של לפחות 400 מיקרומטר כדי להגן על תאי האנדותל 25. החסרונות העיקריים שלה קשורים לתקופת זמן (שעה 1) ואת הצורך להסיר את האפיתל. ואכן, זה מוביל לחולה אי נוחות וכאב ויכול לגרום לכמה סיבוכים כגון דלקת קרנית זיהומיות וסטרומה אובך 9. יחד עם זאת, לעת עתה, פרוטוקול זה עדיין מומלץ לטיפול בקרטוקונוס המתקדם, במיוחד כאשר האבולוציה היא אגרסיבית. בהתחשב בכך שאחד החסרונות העיקריים של C-CXL היה המשך דואר של ההליך, הפרוטוקול המואץ בתחילה שמטרתה צמצום זמן פעולה במסירת irradiance הגבוהה לקרנית 26. עם זאת, צמצום זמן ההשריה עד 10 דקות עלולה להגביל את החדירה תוך-סטרומה של ריבופלאבין לקרנית, ובכך מוביל לקו התיחום קרני נצפה שטחי. גם אם זה לא דווח ולמרות העובדה שאותו המספר של פוטונים לגעת בסיבים, זה אפשרי, כי irradiance הגבוהה פי 10 ב- CXL מרחיבה את הסיכון לפציעות האנדותל 27, 28. בהקשר זה, הוא חשוב לציין כי העדר הפולימרים בריבופלאבין משמש ל- CXL עשוי להסביר את היעדר נזק אנדותל למרות irradiance גבוהה יותר. ואכן, Dextran ידוע להם השפעה האוסמוטי שמובילה לדילול קרנית במהלך ההליך ובכך לנזק אנדותל פוטנציאל 29. כתוצאה מכך, CXL המואץ נראה שיטת CXL בטוחה. בנוסף, של הפרוטוקול-CXLeems להיות יעיל; אכן K-הערך המרבי נותר יציב ברמה של 6 חודשי מעקב. עם זאת, כפי שלC-CXL, המגבלה העיקרית שלה היא desepithelialization המוביל לכאב וסיבוכים אפשריים כגון אובך וזיהום בקרנית 9. ביצע טובול et al. את מחקר איכותי באמצעות מיקרוסקופ confocal של חולים שטופלו ב- CXL 23. ואכן, בהשוואה ל- C-CXL, השפעת התקשות של UVA-ריבופלאבין נראה בולט ביותר ב150-200 מיקרומטר הקדמי של הקרנית עם אפופטוזיס keratocyte יותר ורפלקטיביות סטרומה המוגברת. ממצא זה מצביע על כך שחולים עם קרניות דקות (עובי מינימאלי של 350-400 מיקרומטר) עשויים ליהנות מCXL המואץ. בשלב זה, ריבופלאבין תת osmolar שמוביל לנפיחות של קרניות דקות לפני C-CXL משמש מאז פרוטוקול זה עדיין דורש pachymetry קרנית של לפחות 400 מיקרומטר כדי למנוע נזק אנדותל 25. עם זאת, מואץ CXL ניתן מעדיףentially לשמש בעתיד לטיפול חודר מהר יותר ופחות לייצב קרטוקונוס לקרניות דקות יותר. עם זאת, יש צורך במחקרים ארוך טווח כדי לתאם את העומק של קו התיחום עם ההשפעה על ביומכניקה של קרנית באופן חד משמעי. Iontophoresis CXL הוא פרוטוקול transepithelial אחד שפותח לאחרונה, כדי למנוע הטרייה אפיתל 12, 30. יישום של כוחות זרם חשמליים ריבופלאבין תת osmolar לחדור סטרומה הקרנית. Vinciguerra ועמיתים לעבודה בחנו 20 עיניים שעברו CXL iontophoresis במחקר פרוספקטיבי. הם הראו שKmax היה יציב 1 שנה לאחר ההליך. עם זאת, קו הגבול לא היה שייך למדידה עם AS אוקטובר במהלך המעקב 31. באופן דומה, במחקר שלנו, קו תיחום הקרנית הוערך כבאוקטובר היה לראות כמעט בעומק ממוצע של 214 מיקרומטר בפחות ממחצית החולים (46.5%). בנוסף, מיקרוסקופיה confocal חשפה AP keratocyte הרבה פחותoptosis ורפלקטיביות סטרומה עלתה אחרי ש- CXL מאשר אחרי שני פרוטוקולים אחרים. ואכן, באמצעות מיקרוסקופ confocal וריבופלבין שונה (Ricrolin TE), Caporossi et al. חקר פרוטוקול נוסף של crosslinking transepithelial. באשר לiontophoresis, הם מוצאים שאפופטוזיס של keratocytes סטרומה היה שטחי (כלומר עומק של 140 מיקרומטר) וראו בצורה לא אחידה בסטרומה הקדמית 11. בנוסף, הם אישרו כי פרוטוקול Epi-על זה הביא להתפתחות קרטוקונוס לאחר 24 חודשים של מעקב, והוסיף בנימה של זהירות ליישומה בילדים שסובלים לעתים קרובות מצורות אגרסיביות יותר של המחלה 32. ואכן, כפי שלפרוטוקולי transepithelial אחרים, iontophoresis לא נראה על מנת להבטיח שיפור במדדים טופוגרפיים בילדים 33. היעדר זה ​​של יעילות יכול להיות מוסבר על ידי ריבופלאבין המוגבל וחדירת UVA עם אפיתל באתר 11,34-36. ואכן, האפיתל הוא physiמחסום קאל לשני ריבופלבין וחדירת UVA, המגביל את העומק של אפופטוזיס וכך תופעות ביו-מכאניות של קרנית 11. בנוסף, ריבופלבין במקביל משמש כהפוטוסנסיטייזר וחוסם UV במהלך החשיפה לקרינת UV 28. כתוצאה מכך זה מתקבל על הדעת כי, כלפרוטוקולי transepithelial אחרים, חדירת ריבופלאבין מספיקה במהלך iontophoresis לא רק להגביל את היעילות של ההליך, אלא גם להגדיל את הסיכון לניזק לתאי האנדותל. יחד עם זאת, אין אובדן תא האנדותל צוין עדיין לאחר iontophoresis. לבסוף, במחקר שלנו, בדומה לVinciguerra et al. 31, K-הערך הגבוה ביותר הופיע יציב 6 חודשים לאחר ש- CXL. עם זאת, זה נותר לראות מקופץ מעקב ארוך יותר אם נוהל החדש זה נשאר יציב. כך, כמו בפרוטוקולי Epi-ON אחרים, זהירות היא לדרוש בעת שימוש iontophoresis. עם זאת, התלהבות CXL transepithelial מובנת, בהתחשב בירידה של פוטנציאלסיבוכי CXL. עם CXL Epi-OFF, סיבוכים מתרחשים בכ- 1% מהמקרים בעצם נגרמים על ידי אובך זמני 9. לרוע המזל, אובך זה לעתים משאיר צלקות בקרנית. כתוצאה מכך, אנו מאמינים שכיום, יש להשתמש בזהירות CXL iontophoresis על מטופלי ילדים והיינו בעיקר להציע פרוטוקול זה לחולים עם קרניות דקות וקרטוקונוס המתקדם לאט. באופן חד משמעי, לגבי חדירה, פרוטוקול CXL הקונבנציונלי נשאר האופציה סטנדרטית לטיפול בקרטוקונוס המתקדם. CXL המואץ נראה חלופה מהירה, יעילה ובטוחה לטיפול בבמיוחד קרניות דקות. Iontophoresis קשור עם פחות נזק של keratocytes הקדמי וקו תיחום פחות גלוי ולכן יש לשקול בזהירות רבה יותר.

קרטוקונוס הוא ectasia קרני דו-צדדי ומתקדם בדרך כלל דיווח ב 1 ב2,000 באוכלוסייה הכללית 1 וכתוצאה מכך השינוי של צורת הקרנית ולכן ירידה בראייה 2. קרטוקונוס הוא בדרך כלל נמצא בגיל ההתבגרות המוקדמת ומתקדם עד השלישי לעשור הרביעי של חיים כאשר המחלה בדרך כלל נוטה לייצב, למרות התקדמות יכולה להיות משתנה במהלך חייו של מטופל. על ידי עצירת התקדמות קרטוקונוס, מקשרים צלב מטרה על keratoplasty לדחות או להימנע. עד כה, הטיפול יעיל ובטוח היחיד של קרטוקונוס המתקדם המוכח במחקרים קליניים הוא הפרוטוקול הקונבנציונלי קולגן בקרנית קישור הצולב (C-CXL), שמטרתו להגביר את הקשיחות ולכן לעצור את התקדמות קרטוקונוס 3-8. על מנת לקצר את זמן פעולה וגורמים אחרים סיכון האפשרי של C-CXL, כגון קרנית מדבקת או סטרומה אובך 9, יש כמה פרוטוקולים משופריםתואר. ראשית, בCXL המואץ (CXL-), irradiance גבוהה יותר של UVA מועברת לקרנית מעל מופחת זמן 10. שנית, כדי למנוע את הצורך בהטריה אפיתל, גישות transepithelial להיות מועסקים. למרבה הצער, הם הצלחה מוגבלת בהשוואה לפרוטוקול המקובל 11. שיטת transepithelial האחרונה למסירת ריבופלאבין קרנית במהלך CXL היא iontophoresis (I-CXL), אבל הערכה קפדנית של טיפול זה עדיין לא ביצעה 12. Iontophoresis הוא טכניקה לא פולשנית שבזרם חשמלי קטן מיושם כדי לשפר את החדירה של תרופה המיוננת דרך רקמות. בCXL ידי iontophoresis, ריבופלבין הוא מיונן לחדור הקרנית באמצעות אפיתל. במיקרוסקופיה confocal vivo (IVCM) היא שיטת ההדמיה הקרנית שיכול להדגיש את השינויים התאיים של קרניות חריגות במחלות כגון קרטוקונוס 13. ואכן, IVCMהוכיח שינויים לכל השכבות של הקרנית בקרטוקונוס עם ירידה מסוימת בצפיפות של מקלעת תת-בסיס העצב וסטרומה keratocytes 13-15. בנוסף, IVCM הוכיח להיות נוח מאוד לניתוח microstructural של הקרנית לאחר C-CXL 16. קו התיחום קרני מתואר כקו hyperreflective ראה בטומוגרפיה קוהרנטיות אופטית מקטע קדמי (AS אוקטובר) 1 חודש לאחר C-CXL בעומק של 300 מיקרומטר 17,18. IVCM C-CXL הבא מספק מידע על שינויים מבניים בקרנית, לרבות העדר keratocytes קרני עד לעומק של 300 מיקרומטר. העומק של אזור acellular זה, כמו גם את העומק של קו התיחום בתוך סטרומה הקרנית חשף כאוקטובר, נראה להיות קשורים לעומק האפקטיבי של טיפול CXL 19, ומדידה של עומק קו התיחום קרני בAS אוקטובר 1 חודש לאחר CXL הוצע כיעיל קלינישיטה להערכת אפקטיבי CXL 18. במחקר הנוכחי אנו חוקרים את היעילות של שלושה פרוטוקולים שונים של crosslinking קולגן בקרנית (קונבנציונליים, מואץ, וiontophoresis) באמצעות מדידה של קו תיחום סטרומה הקרנית על ידי AS OCT ומיקרוסקופיה confocal. אנחנו יתר על כן משמשים IVCM לנתח כמותית קרני מיקרו שינויים לאחר שלושה הטיפולים.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Riboflavin&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; Product number</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C-CXL</td>
			<td>Sooft SPA, Montegiorgio, Italy</td>
			<td>Ricrolin&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 468465-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A-CXL</td>
			<td>Avedro Inc, Waltham, Massachusetts</td>
			<td>VibeX&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 520-01863-006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I-CXL</td>
			<td>Sooft SPA, Montegiorgio, Italy</td>
			<td>Ricrolin+&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; 975481-6</td>
			<td>Passive electrode: PROTENS ELITE 4848LE/ Active electrode: IONTOFOR CXL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>UVA Machine</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Vega</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>UVA: 3 mW/cm2 30 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KXL System</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>UVA: 30 mW/cm2 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Vega</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>UVA: 10 mW/cm2 9 min</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

three different protocols of corneal collagen crosslinking in keratoconus: conventional, accelerated and iontophoresis

קרטוקונוס הוא ectasia קרני דו-צדדי ומתקדם. כדי להאט את התקדמותה, מקשרים בין-קרני קולגן (CXL) לאחרונה הציגו כאפשרות טיפול יעילה. במדעים ביולוגיים וכימיים, crosslinking מתייחס לקשרים כימיים חדשים שנוצרו בין מולקולות. לפיכך, המטרה של CXL קולגן בקרנית היא להגדיל באופן סינטטי היווצרות crosslinks בין סיבי קולגן בסטרומה הקרנית. למרות שהיעילות של CXL הקונבנציונלי הפרוטוקול (C-CXL) כבר הוכחה בכמה מחקרים קליניים, היא עשויה להפיק תועלת משיפורים במשך ההליך והסרת האפיתל של קרנית. לפיכך, על מנת לספק הערכה עקבית של שני פרוטוקולי CXL חדשים ומותאמים, שחקרנו חולי קרטוקונוס שעבר אחד משלושת טיפולי CXL: iontophoresis (I-CXL), מואץ CXL (CXL-), וCXL הקונבנציונלי ( C-CXL). -CXL הוא CXL מהר הליך 6 זמן uלשיר irradiance UVA עשרה זמן גבוהה יותר אבל עדיין כולל הסרת האפיתל. Iontophoresis הוא טכניקה לא פולשנית transepithelial בי זרם חשמלי קטן מיושם כדי לשפר את חדירת ריבופלאבין לאורך הקרנית. שימוש בטומוגרפיה לכידות קדמית קטע אופטית (AS אוקטובר) ובמיקרוסקופיה confocal vivo (IVCM), אנו מגיעים למסקנה כי בעניין עומק חדירת טיפול, פרוטוקול CXL קונבנציונלי נשאר סטנדרטי לטיפול בקרטוקונוס המתקדם. נראה CXL המואץ להיות אלטרנטיבה מהירה, יעילה ובטוחה לטיפול בקרניות דקות. השימוש בiontophoresis עדיין נחקר ויש לשקול בזהירות רבה יותר.

<html> קו התיחום קרני היה גלוי בAS אוקטובר ב -92% מהמקרים בעומק ממוצע של 301.6 מיקרומטר (SD, 73.6) <img alt="איור 5" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig5.jpg" /> איור קו 5. תיחום לאחר C-CXL. סריקה ברזולוציה גבוהה מקטע הקדמי של קרנית קוהרנטיות אופטית טומוגרפיה (AS אוקטובר) לדמיין את קו תיחום סטרומה הקרנית בעומק ממוצע של 358 מיקרומטר חודש 1 (חץ לבן), לאחר צולב קולגן בקרנית קונבנציונלית קישור (C-CXL). בר סולם 250 מיקרומטר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig5large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> 1 חודש לאחר C-CXL, ואילו לאחר-CXL שראה ב85.5% מהמקרים בעומק ממוצע של 183.1 מיקרומטר (SD, 39.6). עומס / 53,119 / 53119fig6.jpg &quot;/&gt; איור 6. קו תיחום אחרי-CXL. סריקה ברזולוציה גבוהה מקטע הקדמי של קרנית קוהרנטיות אופטית טומוגרפיה (AS אוקטובר) לדמיין את קו תיחום סטרומה הקרנית בעומק ממוצע של 176 מיקרומטר חודש 1 (חץ לבן), לאחר צולב קולגן בקרנית מואצת קישור (CXL-). בר סולם:. 250 מיקרומטר <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig6large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> לבסוף, אחרי ש- CXL, קו התיחום קרני היה לראות רק ב46.5% מהמקרים בעומק ממוצע של 214 מיקרומטר (SD, 37.5). ההבדלים בעומק קו תיחום הקרנית הבאים או C-CXL, CXL-או-אני CXL היו מובהקים סטטיסטי (p &lt;0.001 ו- p = 0.01). קו התיחום היה נוכח באופן משמעותי יותר לעתים קרובות לאחר C-CXL ו- CXL מאשר אחרי ש- CXL (p = 0.005). <img alt="איור 7" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig7.jpg" /> איור 7. קו תיחום אחרי ש- CXL. סריקה ברזולוציה גבוהה מקטע הקדמי של קרנית קוהרנטיות אופטית טומוגרפיה (AS אוקטובר) לדמיין את קו תיחום סטרומה הקרנית בעומק ממוצע של 238.5 מיקרומטר (חץ לבן), 1 חודש לאחר iontophoresis (I-CXL ). בר סולם:. 250 מיקרומטר <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53119/53119fig7large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> אין סיבוכי התוך או לאחר ניתוח התגלו במעקב חולה בתוך 6 חודשים לאחר היישום של כל אחד משלושת הפרוטוקולים, כולל לא נמצאה הבדלים משמעותיים בספירת תאי אנדותל. יתר על כן, K-הערך המקסימאלי (Kmax) נשאר יציב לכל אחד מהפרוטוקולים לאחר 6 חודשי מעקב. <img alt="שולחן 1" src="/files/ftp_upload/53119/53119tab1.jpg" /></p&gt; טבלת 1. יעילות ובטיחות של כל פרוטוקול של CXL. אבולוציה של K-הערך המקסימאלי (dioptry, D) והצפיפות האנדותל הבא (C-CXL) הקונבנציונלי, מואץ (CXL-), וiontophoresis (I-CXL) cross-linking. עבור כל אחד מהפרוטוקולים, בתקופה שלאחר ניתוח 1-3 החודש, בצקת סטרומה קדמית עם קונות תאי וגרעינים keratocyte מקוטעים נצפתה עם IVCM. לאחר 6 חודשים, אכלוס של סטרומה הקדמית עם גרעיני keratocyte נתפס והיה גדול יותר לאחר ש- CXL מאשר אחרי שני פרוטוקולים אחרים. התיחום בין סטרומה הקרנית צולבים ולא צמוד-צלב-נתפס כאזור שבו keratocytes הפך מוארך ומוקף בלהקות סטרומה היפר-רעיוני גדולות. <img alt="איור 8" src="/files/ftp_upload/53119/53119fig8.jpg" /> איור 8 .: Microstructural שינויים בקרנית לאחר CCXL סריקות בvivo confocal מיקרוסקופ (IVCM) של סטרומה הקרנית השיגה 1 חודש לאחר (C-CXL) cross-linking קולגן הקונבנציונלי:. בצקת סטרומה קדמית עם ציטופלסמה היפר-רעיוני (חצים לבנים) וקונות תאי (כוכביות) הם נצפו. בר סולם: 50 מיקרומטר.

Watch this Scientific Journal Video about Three Different Protocols of Corneal Collagen Crosslinking in Keratoconus: Conventional, Accelerated and Iontophoresis at JoVE.com

Three Different Protocols of Corneal Collagen Crosslinking in Keratoconus: Conventional, Accelerated and Iontophoresis

Corneal collagen cross-linking (CXL) is the only conservative treatment currently available to halt keratoconus progression by improving the biomechanical rigidity of the corneal stroma. The aim of this manuscript is to highlight the methods of three different protocols of CXL: conventional CXL (C-CXL), accelerated CXL (A-CXL), and iontophoresis CXL (I-CXL).

שלושה פרוטוקולים שונים של קרנית קולגן Crosslinking בקרטוקונוס: קונבנציונלי, מואץ וIontophoresis

Keratoconus is a bilateral and progressive corneal ectasia. In order to slow down its progression, corneal collagen cross-linking (CXL) has recently been ...

three-different-protocols-corneal-collagen-crosslinking-keratoconus

Universidad San Sebastian

Research

JoVE Journal

Medicine

19.8K Views.  Quinze-Vingts National Ophthalmology Hospital. Corneal collagen cross-linking (CXL) is the only conservative treatment currently available to halt keratoconus progression by improving the biomechanical rigidity of the corneal stroma. The aim of this manuscript is to highlight the methods of three different protocols of CXL: conventional CXL (C-CXL), accelerated CXL (A-CXL), and iontophoresis CXL (I-CXL).

Video: Three Different Protocols of Corneal Collagen Crosslinking in Keratoconus: Conventional, Accelerated and Iontophoresis

Staining Protocols for Human Pancreatic Islets

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and beta mass ranges from 500 to 1500 mg 1-3. With this known heterogeneity, a standard processing and staining procedure was developed so that pancreatic regions were clearly defined and islets characterized using rigorous histopathology and immunolocalization examinations. 
Standardized procedures for processing human pancreas recovered from organ donors are described in part 1 of this series. The pancreas is processed into 3 main regions (head, body, tail) followed by transverse sections. Transverse sections from the pancreas head are further divided, as indicated based on size, and numbered alphabetically to denote subsections. This standardization allows for a complete cross sectional analysis of the head region including the uncinate region which contains islets composed primarily of pancreatic polypeptide cells to the tail region.
The current report comprises part 2 of this series and describes the procedures used for serial sectioning and histopathological characterization of the pancreatic paraffin sections with an emphasis on islet endocrine cells, replication, and T-cell infiltrates. Pathology of pancreatic sections is intended to characterize both exocrine, ductular, and endocrine components. The exocrine compartment is evaluated for the presence of pancreatitis (active or chronic), atrophy, fibrosis, and fat, as well as the duct system, particularly in relationship to the presence of pancreatic intraductal neoplasia4. Islets are evaluated for morphology, size, and density, endocrine cells, inflammation, fibrosis, amyloid, and the presence of replicating or apoptotic cells using H&amp;E and IHC stains. 
The final component described in part 2 is the provision of the stained slides as digitized whole slide images. The digitized slides are organized by case and pancreas region in an online pathology database creating a virtual biobank. Access to this online collection is currently provided to over 200 clinicians and scientists involved in type 1 diabetes research. The online database provides a means for rapid and complete data sharing and for investigators to select blocks for paraffin or frozen serial sections.

This video demonstrates procedures for characterization of human pancreatic islets using hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry (IHC). Pancreatic sections from head, body, and tail regions are stained by both H&amp;E and IHC to determine islet endocrine composition (insulin, glucagon, and pancreatic polypeptide), cell replication (Ki67), and inflammatory infiltrates (H&E, CD3). The uncinate region is localized using IHC for pancreatic polypeptide.

הפרוטוקולים מכתים עבור איי הלבלב אדם

Estimates of islet area and numbers and endocrine cell composition in the adult human pancreas vary from several hundred thousand to several million and ...

An Alkali-burn Injury Model of Corneal Neovascularization in the Mouse

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the cornea, which can be caused by trauma, keratoplasty or infectious disease, breaks down the so called &lsquo;angiogenic privilege' of the cornea and forms the basis of multiple visual pathologies that may even lead to blindness. Although there are several treatment options available, the fundamental medical need presented by corneal neovascular pathologies remains unmet. In order to develop safe, effective, and targeted therapies, a reliable model of corneal NV and pharmacological intervention is required. Here, we describe an alkali-burn injury corneal neovascularization model in the mouse. This protocol provides a method for the application of a controlled alkali-burn injury to the cornea, administration of a pharmacological compound of interest, and visualization of the result. This method could prove instrumental for studying the mechanisms and opportunities for intervention in corneal NV and other neovascular disorders.

Neovascularization (NV) of the cornea can complicate multiple visual pathologies. Utilizing a controlled, alkali-burn injury model, a quantifiable level of corneal NV can be produced for mechanistic study of corneal NV and evaluation of potential therapies for neovascular disorders.

פגיעה דגם אלקלי לשרוף של הקרנית neovascularization בעכבר

Under normal conditions, the cornea is avascular, and this transparency is essential for maintaining good visual acuity. Neovascularization (NV) of the ...

A Rat Model of Ventricular Fibrillation and Resuscitation by Conventional Closed-chest Technique

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic components of cardiopulmonary resuscitation in humans is herein described. The model was developed in 1988 and has been used in approximately 70 peer-reviewed publications examining a myriad of resuscitation aspects including its physiology and pathophysiology, determinants of resuscitability, pharmacologic interventions, and even the effects of cell therapies. The model featured in this presentation includes: (1) vascular catheterization to measure aortic and right atrial pressures, to measure cardiac output by thermodilution, and to electrically induce ventricular fibrillation; and (2) tracheal intubation for positive pressure ventilation with oxygen enriched gas and assessment of the end-tidal CO2. A typical sequence of intervention entails: (1) electrical induction of ventricular fibrillation, (2) chest compression using a mechanical piston device concomitantly with positive pressure ventilation delivering oxygen-enriched gas, (3) electrical shocks to terminate ventricular fibrillation and reestablish cardiac activity, (4) assessment of post-resuscitation hemodynamic and metabolic function, and (5) assessment of survival and recovery of organ function. A robust inventory of measurements is available that includes &#8211; but is not limited to &#8211; hemodynamic, metabolic, and tissue measurements. The model has been highly effective in developing new resuscitation concepts and examining novel therapeutic interventions before their testing in larger and translationally more relevant animal models of cardiac arrest and resuscitation.

This article describes a rat model of electrically-induced ventricular fibrillation and resuscitation by chest compression, ventilation, and delivery of electrical shocks that simulates an episode of sudden cardiac arrest and conventional cardiopulmonary resuscitation. The model enables gathering insights on the pathophysiology of cardiac arrest and exploration of new resuscitation strategies.

מודל עכברוש של פרפור חדרים והחייאה על ידי קונבנציונלי סגור חזה טכניקה

A rat model of electrically-induced ventricular fibrillation followed by cardiac resuscitation using a closed chest technique that incorporates the basic ...

Echocardiographic Approaches and Protocols for Comprehensive Phenotypic Characterization of Valvular Heart Disease in Mice

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in rodents, with detailed descriptions of the appropriate methods for anesthesia, the echocardiographic windows used, the imaging planes and probe orientations for image acquisition, the methods for data analysis, and the limitations of emerging technologies for the evaluation of cardiac and valvular function. Importantly, we also highlight several future areas of research in cardiac and heart valve imaging that may be leveraged to gain insights into the pathogenesis of valve disease in preclinical animal models. We propose that using a systematic approach to evaluating cardiac and heart valve function in mice can result in more robust and reproducible data, as well as facilitate the discovery of previously underappreciated phenotypes in genetically-altered and/or physiologically-stressed mice.

This protocol provides a detailed description of the echocardiographic approach for comprehensive phenotyping of heart and heart valve function in mice.

גישות פרוטוקולים אקו לאפיון פנוטיפי מקיף של מסתמית מחלות לב בעכברים

The aim of this manuscript and accompanying video is to provide an overview of the methods and approaches used for imaging heart valve function in ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

אינדוקציה של טרשת עורקים מואצת בעכברים: מודל "פגיעת חוט"

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Cardiac Magnetic Resonance for the Evaluation of Suspected Cardiac Thrombus: Conventional and Emerging Techniques

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The appearance of a mass on certain magnetic resonance (MR) sequences can help differentiate a thrombus from competing diagnoses such as a tumor. T1 and T2 signal characteristics of a thrombus are related to the evolution of hemoglobin properties. A thrombus typically does not enhance following contrast administration, which also helps differentiation from a tumor. We also highlight the emerging role of T1 mapping in the evaluation of a thrombus, which can add another level of support in diagnosis. Prior to any CMR exam, patient screening and interviews are critical to ensure safety and to optimize patient comfort. Effective communication during the exam between the technologist and the patient promotes proper breath holding technique and higher quality images. Volumetric post processing and structured reporting are helpful to ensure that the radiologist answers the ordering services&#39; question and communicates these results effectively. Optimal pre-MR safety evaluation, CMR exam execution, and post exam processing and reporting allow for delivery of high quality radiological service in the evaluation of a suspected cardiac thrombus.

The goal of this article is to describe how cardiac magnetic resonance can be used for the evaluation and diagnosis of a suspected cardiac thrombus. The method presented will describe data acquisition as well as the pre-procedure and post-procedure protocol.

תהודה מגנטית קרדיולוגית להערכת החשוד בתרובוס הלב: טכניקות קונבנציונליות והמתעוררים

We present the conventional cardiac magnetic resonance (CMR) protocol for evaluating a suspected thrombus and highlight emerging techniques.&#160;The ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for experimental investigations as they are normally needed for transplantation. Endothelial cell cultures often do not translate well to in vivo situations. Due to the biostructural characteristics of non-human corneas, stromal swelling during cultivation induces substantial corneal endothelial cell loss, which makes it difficult to perform cultivation for an extended period of time. Deswelling agents such as dextran are used to counteract this response. However, they also cause significant endothelial cell loss. Therefore, an ex vivo organ culture model not requiring deswelling agents was established. Pig eyes from a local slaughterhouse were used to prepare split corneal buttons. After partial corneal trephination, the outer layers of the cornea (epithelium, bowman layer, parts of the stroma) were removed. This significantly reduces corneal endothelial cell loss induced by massive stromal swelling and Descemet&#39;s membrane folding throughout longer cultivation periods and improves general preservation of the endothelial cell layer. Subsequent complete corneal trephination was followed by the removal of the split corneal button from the remaining eye bulb and cultivation. Endothelial cell density was assessed at follow-up times of up to 15 days after preparation (i.e., days 1, 8, 15) using light microscopy. The preparation technique used allows a better preservation of the endothelial cell layer enabled by less stromal tissue swelling, which results in slow and linear decline rates in split corneal buttons comparable to human donor corneas. As this standardized organo-typically cultivated research model for the first time allows a stable cultivation for at least two weeks, it is a valuable alternative to human donor corneas for future investigations of various external factors with regards to their effects on the corneal endothelium.

Here, a step-by-step protocol for the preparation and cultivation of porcine split corneal buttons is presented. As this organo-typically cultivated organ culture model shows cell death rates within 15 days, comparable to human donor corneas, it represents the first model allowing long-term cultivation of non-human corneas without adding toxic dextran.

מודל של הקרנית של הקרניות הפותל באמצעות לחצני הקרנית מפוצלת

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Simultaneous Laryngopharyngeal and Conventional Esophageal pH Monitoring

In addition to typical reflux symptoms, many patients with gastroesophageal reflux disease (GERD) present with extraesophageal symptoms such as cough, hoarseness or asthma, which can be caused by laryngopharyngeal reflux (LPR). Due to their multifactorial origin, those symptoms can be a great diagnostic and therapeutic challenge. Esophageal pH-monitoring is commonly used to determine abnormal esophageal acid exposure and confirm the diagnosis of GERD. However, for better evaluation of acid exposure above the upper esophageal sphincter, a new laryngopharyngeal pH measurement system is now available and may lead to more reliable results in patients with predominantly extraesophageal symptoms. This article aims to present a standardized protocol for simultaneous pH measurement using esophageal and laryngopharyngeal pH probes in order to obtain acid exposure scores from both measurements.

Laryngopharyngeal pH monitoring has been specifically designed to measure acid exposure above the upper esophageal sphincter and complements diagnostic evaluation in patients that present with mainly extraesophageal reflux symptoms. Patients with suspected laryngopharyngeal reflux (LPR) were evaluated using distal esophageal and laryngopharyngeal pH testing simultaneously.

ניטור סימולטני של הלוע וניטור pH הוושט הקונבנציונלי

In addition to typical reflux symptoms, many patients with gastroesophageal reflux disease (GERD) present with extraesophageal symptoms such as cough, ...

3D Imaging of PDL Collagen Fibers during Orthodontic Tooth Movement in Mandibular Murine Model

Orthodontic tooth movement is a complex biological process of altered soft and hard tissue remodeling as a result of external forces. In order to understand these complex remodeling processes, it is critical to study the tooth and periodontal tissues within their 3D context and therefore minimize any sectioning and tissue artefacts. Mouse models are often utilized in developmental and structural biology, as well as in biomechanics due to their small size, high metabolic rate, genetics and ease of handling. In principle this also makes them excellent models for dental related studies. However, a major impediment is their small tooth size, the molars in particular. This paper is aimed at providing a step by step protocol for generating orthodontic tooth movement and two methods for 3D imaging of the periodontal ligament fibrous component of a mouse mandibular molar. The first method presented is based on a micro-CT setup enabling phase enhancement&#160;imaging of fresh collagen tissues. The second method is a bone clearing method using ethyl cinnamate that enables imaging through the bone without sectioning and preserves endogenous fluorescence. Combining this clearing method with reporter mice like Flk1-Cre;TdTomato provided a first of its kind opportunity to image the 3D vasculature in the PDL and alveolar bone.

We present a protocol for generating orthodontic tooth movement in mice and methods for 3D visualization of the collagen fibers and blood vessels of periodontal ligament without sectioning.