עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות בבית מכוני הבריאות הלאומיים [גרנט מספרים R01 AI117211 R01 AI130060, R21 AI127954, R42 AI106375 כדי BS], מינהל המזון והתרופות האמריקאי [חוזה HHSF223201710199C כדי BML].

בכל ההליכים הכרוכים חיות תאושר ע י של החוקר אכפת לי חיה מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC).
1. הכנת Inoculum חיידקי
<ol><li>לבודד מושבות חיידקים.<ol>
<li>פס זן חיידקי (למשל, א baumannii "HUMC1") באמצעי אגר סטרילי המתאים (למשל, סויה Tryptic אגר), נזהר ליצירת מושבות המבודד.</li>
		<li>דגירה על תנאים מתאימים (למשל, בין לילה ב 37 מעלות צלזיוס).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לגדול תרבות בין לילה.<ol>
<li>בחר נציג, המושבה מבודד מהצלחת אגר עם לולאה לחסן סטרילי והשתמש בו לחסן 10 מ ל ציר סטרילי המתאים בינוני (למשל, סויה Tryptic מרק).</li>
		<li>לאפשר את הדגימה להגיע שלב נייח תנאים נאותים (למשל, 37 ° C ברעידות-200 סל ד לילה בבקבוקון חרוט פרקו-כובע, 50-mL).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לגדל את תת-תרבות.<ol>
<li>העברת 100 μL של תרבות לילה 10 מ ל מרק סטרילי טריים באמצעות פיפטה.</li>
		<li>אפשר להגיע שלב מעריכית/יומן תנאים נאותים (למשל, 37 ° C ברעידות ב rpm 200 עבור 3 h בבקבוקון חרוט פרקו-כובע, 50-mL).</li>
	</ol>
</li>
	<li>לשטוף את תת-תרבות.<ol>
<li>הסר את תת-תרבות סביבתו ומוכנסות.</li>
		<li>צנטריפוגה ב g × 4,000 עבור 5 דקות כדי הצניפה החיידקים.</li>
		<li>האחות וזורקים את תגובת שיקוע.</li>
		<li>להוסיף 10 מ ל תמיסת סטרילית באגירה פוספט (PBS) צניפה, מערבולת נמרצות עד resuspended לגמרי.</li>
		<li>חזור על שלבים 1.4.2 - 1.4.4 פעמיים, עבור סכום כולל של 3 שוטף.</li>
	</ol>
</li>
	<li>התאם את ריכוז חיידקי ההשעיה.<ol>
<li>באמצעות ספקטרופוטומטרים המודד צפיפות אופטית על 600 nm (OD600), למדוד את הצפיפות האופטית של המתלה חיידקי.</li>
		<li>להוסיף PBS סטרילי ההשעיה חיידקי עד הצפיפות האופטית של inoculum טיפות יתר600 של 0.5, באמצעות את משוואת Cאני× Vאני = Cf× Vנ, איפה ריכוז "C", "V" הוא אחסון, "אני" היא ראשונית, ו- "f" היא סופית. * Cf תמיד צריך להיות 0.5; Vf הוא המשתנה לפתור.</li>
		<li>אם ההשעיה חיידקי יורד יתר600 של 0.5, centrifuge זה ב g × 4,000 עבור 5 דקות כדי הצניפה החיידקים ולהסיר את הכמות המתאימה של תגובת שיקוע להגיע עם יתר600 של 0.5.</li>
		<li>ביצוע דילולים סדרתי ב- PBS סטרילי (למשל, שלושה דילולים בטחונות כדי להשיג × 10 1-6) וצלחת על אגר סטרילי כדי לקבוע מקדם המתאם החושפת את ריכוז חיידקי המושבה יוצרי יחידות מ"ל (CFUs/mL) בבית יתר600 של 0.5. הערה: ערך מקדם המתאם תשתנה עבור כל זן של כל מין, צריכה להיקבע לפני inoculum לקראת זיהום.</li>
		<li>לאחר קביעת מקדם המתאם, להשתמש בו כדי ליצור inoculum של הריכוז הרצוי (למשל, 2 × 108- 1 × 109 CFUs/mL); אם inoculum הרצוי גדול מ ה OD600 של 0.5, centrifuge את המתלים חיידקי ב g × 4,000 עבור 5 דקות כדי הצניפה החיידקים ולהסיר את הכמות המתאימה של תגובת שיקוע כדי להגיע אל הריכוז הרצוי.</li>
		<li>לבצע ויוו מחקרים פיילוט כדי לקבוע את התקפה אלימה של כל בידוד החיידק ב כל זן של העכבר כמו ערכים אלה משתנים בין מבודד חיידקי מאותו המין ועכברים מרקע גנטי. למינים שונים גראם שליליים, ה LD100 בעכברים אמנם בדרך כלל 1-5 × 108 CFUs/עכבר, זנים מסוימים הם קטלני-inocula התחתון.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להקפיא aliquots זהה לשימוש עתידי כמו inocula על פי דרישה, מדויק, כפי שפורסמו בעבר8 (אופציונלי).<ol>
<li>להכנת 1 ליטר של חיידקי inoculum כפי שתואר לעיל, העברת שני בקבוקונים חרוט 500-mL, וצנטריפוגה ב 4,000 × g במשך 5 דקות.</li>
		<li>למחוק 450 מ של תגובת שיקוע של כל בקבוקון חרוט, resuspend את החבילות של חיידקים תגובת שיקוע הנותרים.</li>
		<li>להעביר את inoculum חיידקי מרוכז גביע 250 מ ל המכיל פס מגנטי מערבבים ומערבבים ברציפות על גבי צלחת מערבבים במהירות של 300 סל ד.</li>
		<li>להעביר בזהירות בדיוק 600 μL של inoculum חיידקי מרוכז (למשל, 1 × 1010 CFUs/mL) בעזרת פיפטה בקבוקון קריוגני 1.6-mL המכיל 300 בדיוק μL של סטרילי H2O ו- 300 μL של גליצרול סטרילית; לערבב ולאחסן ב-80 מעלות צלזיוס. הערה: גליצרול הדרושים לאחסון ניתן לבלבל את תוצאות הניסוי, לגרום לתמותה עודף ולכן יש צורך לשטוף אותו.</li>
		<li>כאשר מוכן לשימוש, להפשיר את הדגימה 10 דקות בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>להעביר 1 מ"ל בקבוקון חרוט 50-mL, להוסיף 9 מ של PBS סטרילי, צנטריפוגה ב g × 4,000 עבור 5 דקות כדי הצניפה החיידקים. וארוקן את תגובת שיקוע, resuspend שנקבע מראש כמות CFUs (קפוא ריכוז מניות ב- CFUs/mL × 1 מ"ל) באמצעי אחסון המתאים ל- PBS להגיע הריכוז הרצויה עבור inoculum זיהומית.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. מאלחש עכברים
<ol><li>קטמין/חריגות השירותים הווטרינריים הערה: הרדמה עם קטמין/חריגות השירותים הווטרינריים יש משך זמן רב, אשר מציעה מספיק זמן עבור החוקר מי חדש ב- בטכניקה זו כדי להשלים את ההליך חיסון לפני העכבר מתעורר.<ol>
<li>הכינו 10 מ"ל של פתרון להזרקה על ידי שילוב של 8.5 מ של pharmaceutifcal כיתה PBS, 1 מ"ל של 100 מ"ג/מ"ל קטמין פתרון מניות (הריכוז הסופי 10 מ"ג/מ"ל), ו- 0.5 מ ל 20 מ"ג/מ"ל פתרון מניות חריגות השירותים הווטרינריים (הריכוז הסופי 10 מ"ג/מ"ל).</li>
		<li>לנהל μL 10/g בזריקה (IP) בקרום הבטן (למשל, μL 250 בשביל עכבר 25-g).</li>
		<li>משחה אופטלמולוגיות חלות על העיניים של העכברים מרדימים עם קטמין/חריגות השירותים הווטרינריים כי העיניים שלהם הם נוטים לגרום נזק במהלך תקופות הרדמה.</li>
		<li>הנח את העכבר בתוך כלוב ונטר עד שהוא מתעורר מן ההרדמה. הערה: החיה לא אמורים להישאר ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות.</li>
	</ol>
</li>
	<li>איזופלוריין הערה: עכברים במהירות להתעורר מהרדמה איזופלוריין-induced לאחר הוסר מן החדר אינדוקציה, אז שיטת ההרדמה אמורה לשמש רק לאחר להיות בקיאים בכל ההליך חיסון.<ol>
<li>מקום העכברים תמים חדר בגודל מתאים אינדוקציה עם חמצן זורם.</li>
		<li>לאחר התא נאטם, עזים ומתנגד העכברים באמצעות מכשיר אידוי של דיוק להוסיף איזופלוריין ב 4% (v/v) למשך 5 דקות לפחות; לאשר את ההרדמה על ידי הסרת עכבר מן החדר אינדוקציה ומדידת כמה זמן לוקח להתעורר מהרדמה (~ 60 s). הערה: להיות מודעים לכך הרדמה פעמים עשויות להשתנות בהתבסס על המוסדיים הנחיות כמה חיות. עשויים לדרוש יותר מ 5 דקות כדי להיות מורדם לחלוטין.</li>
		<li>לשמור על ההרדמה עד 10 דקות על ידי התאמת את הריכוז איזופלוריין ל- 2-3%; אם משך הזמן הכולל של הרדמה > 15 דקות, להחיל משחה אופטלמולוגיות על העיניים של עכברים מורדם.</li>
		<li>הנח את העכבר בתוך כלוב ונטר עד שהוא מתעורר מן ההרדמה, כמו שלב 2.1.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. מזריקים/מדביקים עכברים
<ol><li>להשעות את העכבר anesthetized, לתלות אותה על ידי שלה החותכות העליון על חוט חזק, רזה (למשל, חוט דנטלי) מאובטחת על אובייקט קבוע בגובה כ פעמיים העכבר אורך הגוף (למשל, 20 ס מ) מעל פני השטח ההפעלה (למשל ספסל מעבדה).</li>
	<li>משוך בעדינות את הלשון של העכבר מהפה שלו באמצעות מלקחיים סטרילי, הסתיימה בלאנט. להעביר את הלשון אצבע סטרילי, בכפפות כדי למנוע מקרי ריסוק של הלשון של העכבר. החזק את הלשון מחוץ הפה, המאפשר גישה oropharynx ולמנוע בליעה של inoculum לצד.</li>
	<li>בעוד אתה מחזיק את הלשון של העכבר, למקם את inoculum 50-μL (חיידקי השעיה) oropharynx באמצעות micropipette; oropharynx ממוקם בצומת של חלל הפה, הלוע לכיוון החלק האחורי של הפה. הערה: חשוב מאוד להעביר רק נוזל על-ידי pipetting לעצור את הראשון ב- micropipette. העכבר יפסיק לנשום לכמה שניות כאשר inoculum ממוקם ב oropharynx; בסופו של דבר, השאיפה רפלקסיבי יגרום בעכבר כדי לשאוף את המתלים חיידקי, המצוין על-ידי רעש פצפוץ הייחודי של נוזל נכנס אל הריאות, כשהתוצאה היא דלקת ריאות.</li>
	<li>אם inoculum ממוקם לא רחוק בחזרה מספיק כדי לחסום את הנשימה נורמלית, קמצוץ של נארס עם מלקחיים כדי לאלץ את השאיפה רפלקסיבי דרך הפה שאיפת עוקבות inoculum.</li>
	<li>לאחר חיסון, לשחרר את הלשון, להסיר את העכבר מן המחרוזת ההשעיה, למקם אותו בתוך כלוב, ונטר עד שהוא מתעורר מן ההרדמה, כמו שלב 2.1.</li>
</ol>4. פיקוח על התקדמות המחלה
הערה: בשל סבלם של בעלי החיים, אינדיקטורים שונים יש להשתמש כדי לציין כאשר עכברים הופכים אדעך; המתת חסד צריכה להתבצע בעקבות קביעה זו, על פי פרוטוקול IACUC שאושרו בעבר; סמנים שונים של moribundity כוללים את טמפרטורת הגוף, ירידה במשקל, מראה, הילוך סמנים ביולוגיים אחרים שניתן להשיג דם (למשל, באמצעות iSTAT)9,10,11,12, 13,14,15,16.
<ol><li>המתת חסד העכברים על פי פרוטוקול IACUC שאושרו בעבר (למשל, CO2 ואחריו נקע בצוואר הרחם).</li>
	<li>הסר את הריאות העכבר לאללה על ידי חיתוך קנה הנשימה, עורק הריאה, וריד ריאתי קרוב הריאות.<ol>
<li>מיקרוסקופ<ol>
<li>מקם את הריאות (או חלק) תבנית הדגימה.</li>
			<li>למלא את התבנית הדגימה המתחם טמפרטורה אופטימלית חיתוך (O.C.T.), לגמרי השוקע הרקמה.</li>
			<li>להקפיא את הדגימה ב-80 מעלות צלזיוס.</li>
			<li>לשלוח את דגימת מעבדה פתולוגיה. סעיף והר על שקופיות מיקרוסקופ.</li>
		</ol>
</li>
		<li>נטל חיידקי<ol>
<li>שוקלים רקמת הריאה על איזון האנליטי.</li>
			<li>העברה רקמת הריאה 50-mL חרוט בקבוקון המכיל 2-5 מ של PBS סטרילי (בהתאם לגודל של הרקמה).</li>
			<li>Homogenize רקמת הריאה עם מהמגן רקמות.</li>
			<li>ביצוע דילולים טורי של homogenate PBS סטרילי כדי להשיג כ 1,000 CFUs/mL, בהתבסס על הצפוי נטל חיידקית בריאות.<ol>
<li>לדוגמה, אם צפוי 1 × 109 CFUs/mg, לבצע שלושה דילולים בטחונות: העברת 100 μL של homogenate 9.9 מ של PBS ו מערבולת; זה דילול מטריים הראשון. העברת μL 100 של דילול מטריים הראשונה 9.9 מ של PBS ו מערבולת; זה דילול מטריים השני. העברת μL 100 של דילול מטריים השני 9.9 מ של PBS ו מערבולת; זה דילול מטריים השלישי והאחרון.</li>
				<li>אם נטל חיידקית בריאות אינו ידוע, לבצע מגוון של דילולים ללכוד לטווח הצפוי.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Dilution(s) צלחת על אגר סטרילי.<ol>
<li>להכין סטרילי Tryptic סויה מרק (TSB) עם פלטות אגר (TSA): לשלב 30 גר' TSB 15 גרם של אגר, 1 ליטר של מים, לערבב עם פגים, מחממים עד רתיחה ב ~ 100 מעלות צלזיוס במשך 5 דק אפשר מגניב ולאחר מכן אוטוקלב במחזור נוזלי במשך 15 דקות אפשר להצטנן עד ~ 55 ° צלזיוס, העברת טרי בלוק 10 מ"ל TSA כדי עקר פטרי, ולאפשר להתקרר לטמפרטורת החדר. תן יבש על benchtop במשך 2-5 d או חשפו תחת אבטחה הקבינט למשך 10 דקות.</li>
				<li>להעביר μL 100 של הדילול צלחת פטרי המכילות TSA סטרילי, המפוזרים על פני TSA באמצעות חרוזים מפזר או זכוכית.</li>
				<li>לאחסן הפטרי בן לילה ב 37 מעלות צלזיוס חממה humidified (קרי, חממה 37 ° C המכיל של גביע 1-L חשפו מלא במים)</li>
			</ol>
</li>
			<li>לקבוע CFUs/mL ריאות homogenate מבוסס על ציפוי אגר (למשל, 100 CFUs בצלחת TSA עם 100 μL של דילול השלישי והאחרון שתוארו לעיל יהיה 100 CFUs/100 μL × 100דיל #1 × 100דיל #2 × 100דיל #3 = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>לחשב את רקמת הריאה CFUs/mg מבוסס על-ידי חלוקת CFUs/mL homogenate הריאה על ידי mg ריאות רקמות/mL homogenate (למשל, אם לדוגמה המתוארים לעיל נעשה שימוש 100 מ ג של רקמת הריאה הומוגני ב 5 מ של PBS, אז 1 × 109 CFUs/mL ÷ 100 מ"ג / 5 מ"ל = 5 × 107 CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Spellberg, B., Talbot, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recommended+Design+Features+of+Future+Clinical+Trials+of+Antibacterial+Agents+for+Hospital-Acquired+Bacterial+Pneumonia+and+Ventilator-Associated+Bacterial+Pneumonia.">Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia.</a> Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).</li><li>Kalil, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+Adults+With+Hospital-acquired+and+Ventilator-associated+Pneumonia:+2016+Clinical+Practice+Guidelines+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America+and+the+American+Thoracic+Society.">Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society.</a> Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).</li><li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia.">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).</li><li>Azoulay-Dupuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+efficacy+of+a+new+fluoroquinolone,+sparfloxacin,+against+penicillin-susceptible+and+-resistant+and+multiresistant+strains+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+mouse+model+of+pneumonia.">In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).</li><li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+human+pneumonia.">Animal models of human pneumonia.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).</li><li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry.">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).</li><li>Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryopreservation+of+virulent+Acinetobacter+baumannii+to+reduce+variability+of+in+vivo+studies.">Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies.</a> BMC Microbiology. 15, 252 (2015).</li><li>Trammell, R. A., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+for+predicting+death+as+an+outcome+for+mice+used+in+infectious+disease+research.">Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research.</a> Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).</li><li>Bast, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia:+use+of+temperature+as+a+measure+of+disease+severity+to+compare+the+efficacies+of+moxifloxacin+and+levofloxacin.">Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).</li><li>Hankenson, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+loss+and+reduced+body+temperature+determine+humane+endpoints+in+a+mouse+model+of+ocular+herpesvirus+infection.">Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).</li><li>Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+endpoint+for+an+intranasal+invasive+pulmonary+aspergillosis+mouse+model.">Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model.</a> Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).</li><li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diabetes+Exacerbates+Infection+via+Hyperinflammation+by+Signaling+through+TLR4+and+RAGE.">Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li><li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoclonal+Antibody+Protects+Against+Acinetobacter+baumannii+Infection+by+Enhancing+Bacterial+Clearance+and+Evading+Sepsis.">Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).</li><li>Cheng, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+serotypes+5+and+8+capsular+polysaccharides+in+protection+against+Staphylococcus+aureus+in+murine+models+of+infection.">Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection.</a> Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).</li><li>Wong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+and+Pathophysiological+Overview+of+Acinetobacter+Infections:+a+Century+of+Challenges.">Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges.</a> Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).</li></ol>

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

כדי להיות בטוח, עכברים אינם בני אדם מיניאטורי. התוצאות המתקבלות מן העכבר מודלים חייב להיות נחשב בהקשר, ולאחר מכן לפרש עבור הישימות לבני אדם, המבוסס על השונה והדומה בין שני מינים6. חשוב גם לבחור המתח העכבר המתאים כמו מסוימים רגישים יותר לזיהומים מסוימים יותר מאחרים; אותו הדבר חל...

זיהום בדרכי הנשימה התחתונה היא מחלה מדבקת הקטלני ביותר בעולם הגורם השכיח ביותר למוות במדינות מתפתחות1. ברחבי העולם, זיהומים אלה מהווים יותר מ- 3.2 מיליון מקרי מוות1. בנוסף, דלקת ריאות nosocomial הוא בין הצורות קטלני ביותר של שירותי בריאות רכשה זיהומים, והיא נגרמת על ידי הכי עמידים לאנטיביוטיקה פתוגנים2,3. התוואי טיפוסי של רכישה של דלקת ריאות חיידקית לשניהם רכשה הקהילה ואף דלקת ריאות nosocomial היא השאיפה של תוכן הלוע התחתון אל alveoli. מודלים מאתר חקר מחלות אלה לעתים קרובות להשתמש חיסון תוך-אפי4, הפקדת הרבה של החיידקים מחוץ הריאות, גורם לסיבוכים את המטרה ואת סימפטומים כמו סינוסיטיס, טראומה פיזית, אשר incongruent עם המחלה התקדמות האדם שהיו הדגמים שנועדו לחקות. דגמים אחרים עשויים להשתמש באינהלציה צ'יימברס והתקנים micromisting, אשר באופן מדויק יותר לחקות ריאות נגיפית, tuberculous ופטרייתי, אבל לא מדויק מסכם את הדברים בדרך הרגילה של רכישה עבור טיפוסי ריאות חיידקית.
המודל דלקת ריאות השאיפה הלוע התחתון מאתר עשוי להיות מנוצל כדי לדמות את המסלול הטבעי ואת בפתוגנזה של דלקת ריאות חיידקית. על ידי µL 50 לחסן של ההשעיה חיידקיים לתוך oropharynx של עכברים ומורדמת באמצעות פיפטה של, השאיפה רפלקסיבי מתפתח, שתוצאתה דלקת ריאות זיהומית. בעזרת המודל ניתן לבחון בפתוגנזה של פתוגנים הגורמים לדלקת ריאות וטיפולים חדשים כדי להילחם מחלות אלו עם דגם נאמנות גבוהה יותר, יותר לאופרטור דלקות ריאות השאיפה שנצפתה האדם. בנוסף, בניגוד דגמים דומים להדביק דרך חלל הפה5,6, מודל זה מבטיח inoculum מלא מגיע לריאות במקום הבטן, איפה זה יכול לגרום מחוץ לאתר דלקות וזיהומים, כגון דלקת רפידת הקיבה דלקת מעיים. לבסוף, בניגוד אחר מודל שפורסמו אשר דורש laryngoscope, inoculates דרך קנה הנשימה7, מודל זה לא לחסום את דרכי הנשימה עם מחט gavage, לא מצריכה הזרקת למסירה inoculum. במקום זאת, חיסון מסתמך על רפלקס השאיפה הטבעית של העכבר.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>BD</td>
			<td>214530</td>
			<td>Combine with TSB to make TSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beads, Borosilicate Glass</td>
			<td>Kimble</td>
			<td>135003</td>
			<td>Sterilize by baking or autoclaving before each use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker, 250 mL</td>
			<td>Pyrex</td>
			<td>1003</td>
			<td>Used during precise aliquoting of concentrated bacterial inocula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Sorvall</td>
			<td>ST 40R</td>
			<td>Capable of 4,000&#215;g at 4&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber for Anesthesia</td>
			<td>Kent Scientific Corporation</td>
			<td>VetFlo-0720</td>
			<td>Accommodates up to 5 mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomold, Intermediate Size</td>
			<td>Sakura Tissue-Tek</td>
			<td>4566</td>
			<td>Disposable vinyl specimen molds, 15&#215;15&#215;5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental Floss</td>
			<td>Oral-B</td>
			<td>37000469537</td>
			<td>Tie to stable post approx. 6&#34; above table height</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-440</td>
			<td>Used to gently pull tongue out of mouse&#39;s mouth</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer for Lung Tissue</td>
			<td>Omni International</td>
			<td>TM125-115</td>
			<td>Autoclave before first use; rinse between samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane for Anesthesia</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>10015516</td>
			<td>Alternative drug can be used; modify procedure accordingly</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iSTAT Cartridge</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>03P79-25</td>
			<td>Various cartridges are available to suit your needs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine, 100 mg/mL</td>
			<td>Western Medical Supply</td>
			<td>4165</td>
			<td>Dilute 1:10 in PBS to 1 mg/mL and combine with Xylazine at 1 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ointment for Eyes</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>Tears Renewed</td>
			<td>Avoid touching eye with tip of dispenser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23-730-571</td>
			<td>Used to freeze lung samples at -80 &#176;C to prepare for pathology sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-302</td>
			<td>Polystyrene, disposable, sterilized, 100&#215;15 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CM</td>
			<td>Dulbecco&#39;s PBS without calcium and magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette Tips, 200-&#956;L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10017-044</td>
			<td>Autoclave before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipetter, 200-&#956;L</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>Pipetman P200</td>
			<td>Autoclave and calibrate before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spreader, Bacterial Cell</td>
			<td>Bel-Art</td>
			<td>F377360006</td>
			<td>Sterilize by baking or autoclaving before each use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter &#215; 38.1 mm Length</td>
			<td>VWR</td>
			<td>58948-150</td>
			<td>Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stir Plate, Magnetic</td>
			<td>Corning</td>
			<td>PC-620D</td>
			<td>Used for stiring concentrated bacterial inocula during aliquoting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tryptic Soy Broth (TSB)</td>
			<td>BD</td>
			<td>211822</td>
			<td>Combine with Agar to make TSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, Conical, Sterile, 50 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431720</td>
			<td>Used for preparing bacterial inocula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, Conical, Sterile, 500 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431123</td>
			<td>Used to concentrate inocula for preparing frozen inocula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, Cryogenic, 2.0 mL</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430659</td>
			<td>Used for cryogenic storage of concentrated bacterial inocula</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine, 20 mg/mL</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>AnaSed Injection</td>
			<td>Dilute 1:20 in PBS to 1 mg/mL and combine with Ketamine at 1 mg/mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine oropharyngeal aspiration model of ventilator-associated and hospital-acquired bacterial pneumonia

זיהום מאתר הדוגמניות קריטית להבנת הפתוגנזה של המחלה, בדיקת יעילותם של הריפוי אמור להלחם פתוגנים סיבתי. דלקת ריאות זיהומית היא בין הזיהומים הנפוצים ביותר שהוצגו על ידי מטופלים במרפאה ומאשר ובכך מודל המתאים ויוו . דלקת ריאות טיפוסי מודלים להשתמש חיסון תוך-אפי, אשר פיקדונות מופרז אורגניזמים מחוץ הריאות, גורם לסיבוכים את המטרה ואת הסימפטומים, כגון סינוסיטיס, דלקת רפידת הקיבה, דלקת מעיים, טראומה פיזית או microparticle יש ערפל לחקות אירוסול מורחים אופיינית של דלקת ריאות נגיפית, tuberculous או פטרייתי. מודלים אלה אינן משקפות במדויק בפתוגנזה של טיפוסי הקהילה או בריאות-רכשה בדלקת ריאות חיידקית. לעומת זאת, מודל זה מאתר של הלוע התחתון שאיפה דלקת ריאות מחקה את התוואי droplet רכשה בריאות דלקת ריאות. ההשעיה לתוך oropharynx של עכברים ומורדמת מזריקים µL 50 של החיידקים גורמת השאיפה רפלקסיבי, כשהתוצאה היא דלקת ריאות. במודל זה, ניתן לבחון בפתוגנזה של פתוגנים הגורמים לדלקת ריאות וטיפולים חדשים כדי להילחם במחלות אלה.

לפי בקפידה את הפרוטוקול, נתונים חזקים הדירים ניתן להשיג בקלות. . זה קריטי לדבוק בקפדנות inoculum מותאם אישית הכנה פרוטוקול של אחת עבור ניסויים כדי להשוות אחד אחד את השני חשוב גם להתמודד כראוי עם עכברים במהלך ההליך זיהום. הקפד למקם עכברים תא הרדמה ללא איזופלוריין. עכברים יכנסו ...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia at JoVE.com

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

דלקת ריאות זיהומית היא בין הזיהומים הנפוצים ביותר של האדם. מודל המתאים ויוו חיוני להבנת הפתוגנזה של המחלה, בדיקת יעילותם של הריפוי. עם מודל דלקת ריאות השאיפה הלוע התחתון מאתר זה, ניתן לבחון הפתוגנזה של טיפולים חדשים נגד זיהומים קטלניים אלה.

השאיפה הלוע התחתון מאתר מודל של הנשמה-הקשורים ו רכשה החולים בדלקת ריאות חיידקית

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

murine-oropharyngeal-aspiration-model-ventilator-associated-hospital

Research

JoVE Journal

Medicine

11.6K Views.  University of Southern California. דלקת ריאות זיהומית היא בין הזיהומים הנפוצים ביותר של האדם. מודל המתאים ויוו חיוני להבנת הפתוגנזה של המחלה, בדיקת יעילותם של הריפוי. עם מודל דלקת ריאות השאיפה הלוע התחתון מאתר זה, ניתן לבחון הפתוגנזה של טיפולים חדשים נגד זיהומים קטלניים אלה.

Video: Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are administered specifically to the liver to induce a localised liver tumour, via mobilisation of the spleen and splitting into two, leaving intact the vascular pedicle for each half of the spleen. Lewis lung carcinoma cells that constitutively express the firefly luciferase gene (luc1) are inoculated into one hemi-spleen which is then resected 10 minutes later. The other hemi-spleen is left intact and returned to the abdomen. Liver tumour growth can be monitored by bioluminescence imaging using the IVIS whole body imaging system. Quantitative imaging of tumour growth using IVIS provides precise quantitation of viable tumour cells. Tumour cell death and necrosis due to drug treatment is indicated early by a reduction in the bioluminescent signal. This mouse model allows for investigating the mechanisms underlying metastatic tumour-cell survival and growth and can be used for the evaluation of therapeutics of liver metastasis. 

This article describes a procedure for the induction of orthotopic bioluminescent liver tumours in mice, and subsequent analysis of tumour growth confined to the liver using live whole body luminescence imaging.

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

This video describes the establishment of liver metastases in a mouse model that can be subsequently analysed by bioluminescent imaging. Tumour cells are ...

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Osteopathic Manipulative Treatment as a Useful Adjunctive Tool for Pneumonia

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in the hospitalization of 1.1 million patients2. With an average length of in-patient hospital stay of five days2, pneumonia and influenza comprise significant financial burden costing the United States $40.2 billion in 20053. Under the current Infectious Disease Society of America/American Thoracic Society guidelines, standard-of-care recommendations include the rapid administration of an appropriate antibiotic regiment, fluid replacement, and ventilation (if necessary). Non-standard therapies include the use of corticosteroids and statins; however, these therapies lack conclusive supporting evidence4. (Figure 1)

Osteopathic Manipulative Treatment (OMT) is a cost-effective adjunctive treatment of pneumonia that has been shown to reduce patients&#8217; length of hospital stay, duration of intravenous antibiotics, and incidence of respiratory failure or death when compared to subjects who received conventional care alone5. The use of manual manipulation techniques for pneumonia was first recorded as early as the Spanish influenza pandemic of 1918, when patients treated with standard medical care had an estimated mortality rate of 33%, compared to a 10% mortality rate in patients treated by osteopathic physicians6. When applied to the management of pneumonia, manual manipulation techniques bolster lymphatic flow, respiratory function, and immunological defense by targeting anatomical structures involved in the these systems7,8, 9, 10.

The objective of this review video-article is three-fold: a) summarize the findings of randomized controlled studies on the efficacy of OMT in adult patients with diagnosed pneumonia, b) demonstrate established protocols utilized by osteopathic physicians treating pneumonia, c) elucidate the physiological mechanisms behind manual manipulation of the respiratory and lymphatic systems. Specifically, we will discuss and demonstrate four routine techniques that address autonomics, lymph drainage, and rib cage mobility: 1) Rib Raising, 2) Thoracic Pump, 3) Doming of the Thoracic Diaphragm, and 4) Muscle Energy for Rib 1.5,11

Pneumonia is one of the top ten leading causes of death in the U.S. Osteopathic manipulative techniques (OMT) may be utilized as an adjunctive therapy in the treatment of pneumonia to enhance biomechanical and immune function; and ultimately, to reduce hospital stay, duration of antibiotics, incidence of respiratory failure, and mortality. In this video-article, we will review randomized controlled studies on the use of OMT in pneumonia patients, as well as demonstrate specific hands-on techniques that are routinely practiced by osteopathic physicians when treating pulmonary infections.

מניפולטיבי טיפול אוסטיאופתי ככלי משלים שימושי עבור דלקת ריאות

Pneumonia, the inflammatory state of lung tissue primarily due to microbial infection, claimed 52,306 lives in the United States in 20071 and resulted in ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of Willis perforation (CWp) and proven by intracranial pressure (ICP) monitoring. Thereby a homogenous blood distribution in subarachnoid spaces surrounding the arterial circulation and cerebellar fissures is achieved. Animal physiology is maintained by intubation, mechanical ventilation, and continuous on-line monitoring of various physiological and cardiovascular parameters: body temperature, systemic blood pressure, heart rate, and hemoglobin saturation. Thereby the cerebral perfusion pressure can be tightly monitored resulting in a less variable volume of extravasated blood. This allows a better standardization of endovascular filament perforation in mice and makes the whole model highly reproducible. Thus it is readily available for pharmacological and pathophysiological studies in wild type and genetically altered mice.

A standardized mouse model of subarachnoid hemorrhage by intraluminal Circle of Willis perforation is described. Vessel perforation and subarachnoid bleeding are monitored by intracranial pressure monitoring. In addition various vital parameters are recorded and controlled to maintain physiologic conditions.

מודל Murine של תת עכבישי דימום

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed step-by-step technical procedure for an analogous procedure in live mice which allows for serial characterization of cells present in the BM. This procedure facilitates studies aimed to detect the presence of exogenously administered cells within the BM of mice as would be done in xenograft studies for instance. Moreover, this procedure allows for the retrieval and characterization of cells enriched in the BM such as hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) without sacrifice of mice. Given that the cellular composition of peripheral blood is not necessarily reflective of proportions and types of stem and progenitor cells present in the marrow, procedures which provide access to this compartment without requiring termination of the mice are very helpful. The use of femoral bone marrow aspiration is illustrated here for cytological analysis of marrow cells, flow cytometric characterization of the hematopoietic stem/progenitor compartment, and culture of sorted HSPCs obtained by femoral BM aspiration compared with conventional marrow harvest.

This protocol describes a procedure for serial sampling of femoral bone marrow (BM) without requiring the sacrifice of mice. This procedure facilitates longitudinal studies of the BM composition of mice over time and provides serial access to cells within the BM for ex vivo and transplantation studies.

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

Th17 Inflammation Model of Oropharyngeal Candidiasis in Immunodeficient Mice

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of infection-induced immunopathology. Although Th17 cells are implicated in antifungal defense, their role in immunopathology is unclear. This study presents a method for establishing oral Th17 immunopathology associated with oral candidal infection in immunodeficient mice. The method is based on reconstituting lymphopenic mice with in vitro cultured Th17 cells, followed by oral infection with Candida albicans (C. albicans). Results show that unrestrained Th17 cells result in inflammation and pathology, and is associated with several measurable read-outs including weight loss, pro-inflammatory cytokine production, tongue histopathology and mortality, showing that this model may be valuable in studying OPC immunopathology. Adoptive transfer of regulatory cells (Tregs) controls and reduces the inflammatory response, showing that this model can be used to test new strategies to counteract oral inflammation. This model may also be applicable in studying oral Th17 immunopathology in general in the context of other oral diseases.

Although Candida infection models are available to study host immune resistance, a model to study T cell mediated immunopathology in the context of Candida infection is absent. Here we describe a method to establish Th17 immunopathology associated with oral Candida infection in immunodeficient mice.

TH17 דגם דלקת של לוע תחתון פטרת בעכברים immunodeficient

Oropharyngeal Candidiasis (OPC) disease is caused not only due to the lack of host immune resistance, but also the absence of appropriate regulation of ...

A Murine Model of Irreversible and Reversible Unilateral Ureteric Obstruction

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive nephropathy induced by unilateral ureteric obstruction (UUO), which can either be irreversible (UUO) or reversible (R-UUO). In the irreversible UUO model, the ureter may be obstructed for variable periods of time in order to induce increasingly severe renal inflammation and interstitial fibrotic scarring. In the reversible R-UUO model the ureter is obstructed to induce hydronephrosis, tubular dilation and inflammation. After a suitable period of time the ureteric obstruction is then surgically reversed by anastomosis of the severed previously obstructed ureter to the bladder in order to allow complete decompression of the kidney and restoration of urinary flow to the bladder. The irreversible UUO model has been used to investigate various aspects of renal inflammation and scarring including the pathogenesis of disease and the testing of potential anti-inflammatory or anti-fibrotic therapies. The more challenging model of R-UUO has been used by some investigators and does offer significant research potential as it allows the study of inflammatory and immune processes and tissue remodeling in an injured and scarred kidney following the removal of the injurious stimulus. As a result, the R-UUO model offers investigators the opportunity to explore the resolution of kidney inflammation together with key aspects of tissue repair. These experimental models are of relevance to human disease as patients often present with obstruction of the renal tract that requires decompression and are commonly left with significant residual kidney impairment that has no current treatment options and may lead to eventual end stage kidney failure.

The murine model of irreversible unilateral ureteric obstruction (UUO) is presented together with the model of reversible UUO in which the ureteric obstruction is relieved by anastomosis of the severed ureter into the bladder. These models enable the study of renal inflammation and scarring as well as tissue remodeling.

דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

Obstruction of the kidney may affect native or transplanted kidneys and results in kidney injury and scarring. Presented here is a model of obstructive ...

Use of Electromagnetic Navigational Transthoracic Needle Aspiration (E-TTNA) for Sampling of Lung Nodules

Lung nodule evaluation represents a clinical challenge especially in patients with intermediate risk for malignancy. Multiple technologies are presently available to sample nodules for pathological diagnosis. Those technologies can be divided into bronchoscopic and non-bronchoscopic interventions. Electromagnetic navigational bronchoscopy is being extensively used for the endobronchial approach to peripheral lung nodules but has been hindered by anatomic challenges resulting in a 70% diagnostic yield. Electromagnetic navigational guided transthoracic needle lung biopsy is novel non-bronchoscopic method that uses a percutaneous electromagnetic tip tracked needle to obtain core biopsy specimens. Electromagnetic navigational transthoracic needle aspiration complements bronchoscopic techniques potentially allowing the provider to maximize the diagnostic yield during one single procedure. This article describes a novel integrated diagnostic approach to pulmonary lung nodules. We propose the use of endobronchial ultrasound transbronchial needle aspiration (EBUS-TBNA) for mediastinal staging; radial EBUS, navigational bronchoscopy and E-TTNA during one single procedure to maximize diagnostic yield and minimize the number of invasive procedures needed to obtain a diagnosis. This manuscript describes in detail how the navigation transthoracic procedure is performed. Additional clinical studies are needed to determine the clinical utility of this novel technology.

Use of Electromagnetic Navigational Transthoracic Needle Aspiration E-TTNA for Sampling of Lung Nodules

We describe the novel use of electromagnetic navigational guided transthoracic needle aspiration for the pathologic assessment of human lung nodules.

שימוש באלקטרומגנטית ניווט Transthoracic מחט שאיפה (E-TTNA) לדגימה של גושים ריאות

Lung nodule evaluation represents a clinical challenge especially in patients with intermediate risk for malignancy. Multiple technologies are presently ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, hypotension, necrotizing enterocolitis, bowel transplantation, trauma and chronic inflammation. Intestinal ischemia-reperfusion (IR) injury is a consequence of acute mesenteric ischemia, caused by inadequate blood flow through the mesenteric vessels, resulting in intestinal damage. Reperfusion following ischemia can further exacerbate damage of the intestine. The mechanisms of IR injury are complex and poorly understood. Therefore, experimental small animal models are critical for understanding the pathophysiology of IR injury and the development of novel therapies.
Here we describe a mouse model of acute intestinal IR injury that provides reproducible injury of the small intestine without mortality. This is achieved by inducing ischemia in the region of the distal ileum by temporally occluding the peripheral and terminal collateral branches of the superior mesenteric artery for 60 min using microvascular clips. Reperfusion for 1 hr, or 2 hr after injury results in reproducible injury of the intestine examined by histological analysis. Proper position of the microvascular clips is critical for the procedure. Therefore the video clip provides a detailed visual step-by-step description of this technique. This model of intestinal IR injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

Here we describe the detailed procedure of intestinal ischemia-reperfusion in mice which results in reproducible injury without mortality to encourage the standardization of this technique across the field. This model of intestinal ischemia-reperfusion injury can be utilized to study the cellular and molecular mechanisms of injury and regeneration.

השאיפה הלוע התחתון מאתר מודל של הנשמה-הקשורים ו רכשה החולים בדלקת ריאות חיידקית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine

מודל עכברי של ריפוי פצע

מניפולטיבי טיפול אוסטיאופתי ככלי משלים שימושי עבור דלקת ריאות

מודל Murine של תת עכבישי דימום

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

TH17 דגם דלקת של לוע תחתון פטרת בעכברים immunodeficient

דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

שימוש באלקטרומגנטית ניווט Transthoracic מחט שאיפה (E-TTNA) לדגימה של גושים ריאות

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

השאיפה הלוע התחתון מאתר מודל של הנשמה-הקשורים ו רכשה החולים בדלקת ריאות חיידקית

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

Tumour Murine Bioluminescent כבדית דגם

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית ​​השתן Murine

מודל עכברי של ריפוי פצע

מניפולטיבי טיפול אוסטיאופתי ככלי משלים שימושי עבור דלקת ריאות

מודל Murine של תת עכבישי דימום

הירך מח עצם שאיפה בעכברים חיים

TH17 דגם דלקת של לוע תחתון פטרת בעכברים immunodeficient

דגם Murine של חסימת Ureteric חד-צדדית בלתי הפיכה והפיכה

שימוש באלקטרומגנטית ניווט Transthoracic מחט שאיפה (E-TTNA) לדגימה של גושים ריאות

דגם Murine של פגיעת המעיים איסכמיה reperfusion

דגם orthotopic של סרטן שלפוחית השתן Murine