שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח במדעי המוח כגון שינויים בנוירוכימיה במהלך ההיסטוריה הטבעית של מחלות נוירולוגיות. היתרון העיקרי של טכניקת EEG microdialysis המוצע הוא כי גישה משולבת כזו מאפשרת זיווג של שינויים בשחרור הנוירוטרנסמיטר בתוך שלבים ספציפיים של התפתחות המחלה והתקדמות. התחל על ידי מיתוג המגבר ממוקם מחוץ לכלוב פאראדיי.
פתח את תוכנת EEG והתחל את רכישת EEG וצפה באות EEG המיוצר על-ידי כבלים לא מחוברים. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה EEG קשור על ידי החזקת ראשו של החיה בין שתי אצבעות מתוחות של יד אחת לדפוק את המחברים אל מעמד האלקטרודה באמצעות היד החופשית השנייה. הגדר גורם הגברה על כל ערוץ של המגבר על פי אות האלקטרודה של חיה אחת כך אות EEG הוא בקנה מידה.
ואז לתת לחיה לחקור את הכלוב החדש לפחות שעה אחת תחת התבוננות ישירה של החוקר. כווננו את הכבל לפי הסחורה של החיה, והבטיחו שהכבלים לא יפריעו לתנועות החיה ולתנואם השקרים. לבסוף, בדוק אם יש את מסגור התמונה הנכון במצלמות הווידאו ולאחר מכן הפעל את הקלטת הווידאו EEG.
התחל על ידי הכנת בדיקות microdialysis לשימוש הראשון על פי המדריך של המשתמש היצרן ולמלא אותם עם הפתרון של רינגר. לאחר מכן, לחתוך 10 ס"מ חתיכות ארוכות של צינורות FEP ולחבר אותם לתוך ושקע cannulas של החללית באמצעות מתאמי צינורות בצבעים שונים. ודא שצנרת נוגעת במתאמים ללא שטח פנוי בכל החיבורים.
הסר את cannula הבובה מהמדריך שלה באמצעות פינצטה על ידי החזקת ראשו של החיה בחוזקה. הכנס את בדיקה microdialysis לתוך המדריך cannula ולהשתמש חימר דוגמנות כדי לחבר עוד יותר את cannula. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת ההקלטה של EEG.
ואז לשים את החיה לתוך גליל פלקסיגלס ולתת לו לחקור את הסביבה החדשה. עקבו אחר תנועות העכברושים הערים והמזיזות בחופשיות. לאחר מכן, לחבר את התוך של החללית למזרק 2.5 מיליליטר עם מחט קהה 22 מד המכיל פתרון של רינגר באמצעות מתאמי צינורות.
לדחוף מיליליטר אחד של הפתרון של רינגר לתוך החללית ב 10 שניות על ידי דחיפת הבוכנה של מזרק 2.5 מיליליטר ברציפות. בדוק את טיפת הנוזל המופיע בשקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש. לבסוף, מלא את המזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP על ידי צינורות מתאמים עם הפתרון של רינגר ולהעלות אותם על משאבת עירוי.
הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ לילה. לאחר אימות באמצעות הקלטות וידאו EEG היעדר התקפים בשלוש השעות שקדמו לאיסוף הדגימה, לעצור את המשאבה נושאת צינורות FEP מזרקים cannulated מלא עם הפתרון של רינגר. הר קבוצה נוספת של מזרקים 2.5 מיליליטר מחובר צינורות FEP עם מתאמי צינורות מלא עם פתרון צלצול שונה המכיל 100 פתרון אשלגן מילימולר.
הפעל את המשאבה בשני microliters לדקה ולתת לו לרוץ. בדוק את היעדר בועות האוויר במערכת וודא כי הצינור נוגע במתאמים ללא שטח מת בכל החיבורים. לאחר מכן, בדוק את טיפת הנוזל המופיע על השקע כדי לסמן מתי החללית מוכנה לשימוש.
לאחר מכן, חבר את צינורות FEP של מזרקים מלאים עם הפתרון של רינגר לתוך הצינורית של החללית בכל חיה ולחכות להופעת טיפת הנוזל על קצה השקע. חבר את שקע הגשוש לצינור FEP שמוביל לאיסוף במבחנה. הכנס את צינורות FEP לתוך מבחנה סגורה 0.2 מיליליטר עם כובע מחורר ולהבטיח כי הצינור נשאר במקום על ידי תיקון זה עם פיסת חימר דוגמנות.
לאחר הפעלת המשאבה בשני מיקרוליטרים לדקה במשך 60 דקות מבלי לאסוף דגימות כדי לצייד את המערכת, לאסוף חמש דגימות דיאליזה רצופות של 30 דקות בתנאי בסיס, ולאחסן דגימות על קרח. לאחר 10 דקות, לעבור את הצינורות מן המזרקים המכילים 100 מילימולר אשלגן רינג'ר פתרון רגיל של רינגר ולתת את המשאבה לרוץ. לאחר איסוף הדיאליזה החמישית שלאחר שיווי המשקל, אספו 20 שברי דיאליסט מיקרוליטר כל 10 דקות למשך שעה.
לאחר מכן לאסוף שלוש דגימות דיאליזה נוספות 30 דקות ולעצור את המשאבה. לבסוף, לאחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס לאחר הניסוי עד ניתוח HPLC. לאחר השלמת הניסוי, יש לשטוף את בדיקות המיקרו-דיאליזה המשמשות במים מזוקקים ולאחסן אותן בבקבוקון מלא במים מזוקקים נקיים עד לשימוש הבא.
לבסוף, לשטוף את ההתקנה microdialysis כולו עם מים מזוקקים ואחריו 70 אחוז אתנול. החלף אתנול באוויר ואחסן את ההתקנה בסביבה סטרילית. אלה הם עקבות EEG נציג נרשם מן ההיפוקמפוס של שליטה חולדות אפילפטיות במהלך השלב הכרוני של המחלה.
לא נצפתה שינוי EEG בחולדות בקרה, ואילו פעילות אפילפטיפורם פרוקסימלי מסונכרנת נצפתה כ -500 אלפיות שנייה לפני ובמהלך ההתקפים ההתנהגותיים בחולדות אפילפטיות. ריכוז הגלוטמט הבסיסי שנמצא בחולדות אפילפטיות כרוניות היה גבוה משמעותית מאשר בבעלי חיים שולטים. אשלגן גבוה עורר שחרור נוסף של גלוטמט במשך כ -30 דקות בחולדות בקרה ובמשך כ -60 דקות בחולדות אפילפטיות כרוניות.
בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור כי בעלי חיים המושתלים עם המכשיר נוטים לאבד אותו במהלך ניסוי ממושך, ולכן להשתמש סט ראש אור כבלים ארוכים מספיק כדי למנוע הפרעה לניידות בעלי חיים. בהתאם לזמינות של חיבור אנליטי מתאים, השיטה עשויה לשמש עוד יותר כדי לבדוק מולקולות מסיסים שונים במוח בעת שימוש הקלטת EEG באותו זמן. לאחר התפתחותה, טכניקה זו אפשרה לחוקרים בתחום האפילפטולוגיה לספק תובנה לשינויים בנוירוטרנסמיסציה בעירור במקרה של אפילפסיה של האונה הרקתית.
לאחר צפייה בסרטון זה, אנו סומכים עליך תהיה הבנה טובה יותר של איך לבצע microdialysis vivo יחד עם הקלטת EEG אלקטרודה עומק בחולדה אפילפטית נעה בחופשיות.
