תפוקה גבוהה המתיחה כוח מיקרוסקופ באמצעות PDMS מגלה השפעות תלויי מינון של שינוי מקדם הצמיחה-β על המעבר אפיתל-to-מעבר משנה

המעבדה שלי מתעניינת במכנוביולוגיה, הבוחנת כיצד תאים מופעלים ומושפעים על ידי כוחות מכניים. דרך אחת לכמת מכנוביולוגיה היא מדידת התכווצות התאים. בתאים חסידיים, התכווצות מתבטאת בכוחות המתיחה המופעלים על מצע התא. אנו מכמתים כוחות אלה באמצעות מתודולוגיה המכונה בדרך כלל מיקרוסקופ כוח המתיחה או TFM. ו TFM מיושם במגוון רחב של שיטות שונות, אבל היבט נפוץ הוא שזה טכניקת מעבדה סדרתית ואיטית למדי נעשה בדרך כלל בצלחת אחת כמו זו כאן. זה מגביל אותנו להערכת אוכלוסייה או מצב אחד בכל פעם. לאורך כל תרבות התאים שופרה לפני זמן מה אבל יצירת מנות multiwell וחשבנו, זה לא יהיה נהדר זה יכול להיות TFM עם תפוקה מוגברת זהה ואת אותה יעילות של זמן reagents? וזה היה הפתרון שלנו. אז יצרנו צלחת כוח מתיחה 96 היטב. וזה נראה דומה מאוד לצלחת קונבנציונלית 96 גם רקמות תרבות, אולם עם המנה הזאת אנחנו יכולים לא רק לבחון 96 תנאים שונים של תרבות התא, אלא גם לכמת את התכווצות התא שלהם. זה מציג פתרון תפוקה הרבה יותר גבוה מאשר גישות מנה אחת, המאפשר לנו לבחון תנאי תאים מגוונים ותגובות מתכווץ. במהלך גרורות סרטן, תאים סרטניים לנסוע מהאתר העיקרי שלהם לאתרים משניים, הפצת המחלה בגוף שלנו. התנהגות גרורתית זו של תאים סרטניים מהווה 90% מהמוות הקשור לסרטן. אחד המנגנונים המוצעים עבור תאים סרטניים אפיתל לרכוש פנוטיפ נודד פולשני יותר הוא מעבר אפיתל-mesenchymal, EMT. במהלך EMT, הם הופכים נודדים יותר פולשני, שינוי ההתנהגות הפיזית שלהם. כדי להבין טוב יותר את השינויים האלה בהתנהגות הפיזית, אנו משתמשים במצע הסיליקון הרך שלנו כדי למדוד שינויים בהתכווצות של תאי בלוטת החלב של העכבר עם אינדוקציה EMT על ידי TGF-In במחקר זה, חקרנו כיצד ריכוזים שונים וזמן הדגירה של התנהגות פיזית של תאים משפיעים TGF. Polydimethylsiloxane הוא גומי תואם מאוד עם מודולוס הצעיר הנמוך ביותר של כ 0.6 קילופסקל. הנוקשות של חומר זה גם יכול להיות tunable באמצעות ריכוזים שונים של סוכן crosslink כולל SYLGARD 184.To למדוד תכונות מכניות של PDMS אנו משתמשים rheometer. לאחר ערבוב חלק A וחלק B של PDMS, ביחס משקל אחד לאחד והוספת סוכן הריפוי עם אחוז המשקל שצוין, לטעון את האצווה מוכנה על צלחת rheometer. הקפד לטעון מספיק של המדגם כדי לכסות לחלוטין את אזור הציר. חשוב לוודא שהתרד נוגע לחלוטין בדגימה ללא מקום פנוי בקצהו. כל דגימה נוספת צריכה להיות חתוך בקפידה ונמחק מהצלחת. למדוד את מודולוס האחסון הסופי ואת התלות בזמן של צמיגות של כל מדגם על ידי ביצוע מטאטא זמן ותדירות בזן גזירה נדנוד של 0.5%Newsha]גרף זה הוא דוגמה אחת של מבחן seq זמן, לאחר שעשה כדי למדוד התנהגות ריאולוגית של polydimethylsiloxane עם זן גזירה מתנד להחיל של 0.5% וטמפרטורה של 100