המדידה בו זמנית של שיקוף עלים עם ניתוח פלואורסצנטיות כלורופיל באמצעות מודל הצמח המוטנטי הידוע כבר מאפשרת הקמת פרמטרים חדשים של רפלקטיביות. בניית פרמטרים חדשים של שיקוף עלים בשיטה שלנו מאפשרת ניטור בזמן אמת של התנהגויות צמחיות משתנות בתנאים סביבתיים טבעיים. לפני תחילת ניסוי הגדר מערכת מדידה כפי שמוצג בשרטוט זה.
עם שלב דגימה, מקור אור, פלואורומטר PAM ורדיומטר ספקטרלי. לאחר מכן צרף צלחת פלדה בריבוע 10 ס"מ עם חור בקוטר ס"מ אחד לשלב המדגם המותאם אישית. ולהתאים שני גשושי סיבים דקים בחוזקה יחד.
לעטוף את הבדיקות עם סרט פלסטיק. לאחר מכן השתמש במחזיק כדי לגזור את הבדיקות המודבקות על במת הדגימה. מקם את הבדיקות אנכית לשלב הדגימה.
ולצרף מדריך אור דו-קוטבי עשוי סיבי זכוכית למקור אור הלוגן. לאחר מכן להפוך את שלב המדגם משני הכיוונים בזוויות של כ 45 מעלות. כוונון מקור האור כך שהאור יאיר את שלב הדגימה באופן אחיד מבלי להטיל צללים.
למדידה בו זמנית של רפלקטיביות שמאלית וניתוח פלורסנס כלורופיל להגדיר, בחדר חשוך עם אור צלופן ירוק למקם צמח בדיקה עלה המחזיק של שלב המדגם ולגעת עלה נגד החור של צלחת פלדה על הבמה. לאחר כיבוי האור הירוק החלש להפעיל את פלואורומטר PAM ולהפוך את דגימת העלה עם אור מדידה. להזיז את המתאם כך עוצמת florescence מודד כ 100 ולמדוד את המרחק בין החללית לבין העלה.
תקן את המכוונן במקומו ורשם את ערך המרחק במכוונן. לאחר מכן לכבות את אור המדידה ולהסיר את צמח הבדיקה. למדידת עוצמת אור אקטין מניחים קוונטמר קל במיקום שבו יוצב עלה המדגם.
ולהקרן אור ממקור אור הלוגן כדי למדוד את עוצמת מקור האור. קבע אילו מיקומים של חוגת מקור האור יוצרים עוצמות של 30, 60, 120, 240 ו- 480 פרוטונים מיקרומולריים למטר בריבוע לשנייה. מניחים צלחת לבנה כסטנדרט רפלקטור במיקום דגימת העלה.
ולהדליק רדיומטר ספקטרלי. התאימו את המשקף הספקטרלי בין 350 ל-850 ננומטר. אין נתונים ספקטרליים בשלב זה מכיוון שאין אור מוקרן.
הפעל את מנורת הלוגן כדי להקרנה עם 480 פוטונים micromolar למטר בריבוע לשנייה. עוצמת הקרינה הגבוהה ביותר במבחן זה ולהתאים את עוצמת הזיהוי של הרדיומטר כדי למנוע רוויה. לאחר מכן להקליט את ההשתקפות הספקטרלית תחת תאורה עם 30, 60, 120, 240 ו 480 פוטונים micromolar למטר בריבוע לשנייה.
למדידה בו זמנית של רפלקטיביות העלה וניתוח פלורנס כלורופיל מעבירים את הצמח מתא צמיחה לחדר חושך עם אותה טמפרטורה ולחות. לאחר שעה מניחים צמח Arabidopsis בעמדת דגימת העלה. ולתקן את עלה הדגימה לעלה כך משטח העלה הוא בניצב לבדיקות הגילוי.
הפעל את פלואורומטר PAM וליזום את הקלטת העקומה. ערך זה נקרא אפס. הפעל את אור המדידה והמתן כ- 30 שניות עד שהעקומה תגיב.
ערך זה נקרא F אפס. לספק פולס רווי של 4,000 פוטונים micromolar למטר בריבוע לשנייה במשך 0.8 שניות מן PAM ולקבל את הערך הגבוה ביותר של ספייק בעקומה עם עוצמת פלואורסצנטיות מוגברת. ערך זה נקרא Fm.then השתמש בנוסחה כדי לחשב את התשואה הקוונטית המרבית של מערכת צילום 2 בחושך.
כדי למדוד התנהגויות פוטוסינתטיות במצב יציב, לאחר הקלטת Fm הקרין את דגימת העלה עם 30 פוטונים micromolar למטר בריבוע לשנייה. בעת הפעלת הרדיומטר הספקטרלי כדי לפקח על רפלקטיביות העלה. המתן לפחות 20 דקות עד שהתגובה הפוטוסינתטית תגיע למצב יציב.
במהלך תקופת תגובה זו, פעימת הרוויה תסופק במרווחי זמן של דקה אחת. עוצמת florescence של המצב היציב נקרא Fs.The ערך florescence המרבי שהושג לאחר 20 דקות של אור פעמו נקרא Fm prime. רשום את ההשתקפות הספקטרלית בשלב זה.
כדי לחשב את פעילות הפוטוסינתזה במצב יציב לחשב את התשואות הקוונטיות של מערכת צילום 2 אשר ניתן הערכה על ידי הקרנה עם פולסים רוויים תחת אור actinic. להעריך את שטף האלקטרונים ליניאריים ממרכז התגובה של מערכת הצילום 2. לאחר מכן לחשב את מרווה לא פוטוכימיים ולחשב את מדד רפלקטיביות פוטוכימית מ 531 ו 570 ננומטר.
לאחר רכישת Fs ואת רפלקטיביות העלה לכבות את האור actinic ולספק דופק רווי במרווחי דקה אחת במהלך הרפיה כהה. ערך הפלורסנס המרבי המושרה על ידי פעימת הרוויה מתחת לחושך נקרא Fm פריים כפול. ולשמור את הנתונים פריים כפול Fm בשתיים ו -10 דקות לאחר כיבוי האור actinic.
כדי לחשב את הפרמטרים של מרווה לא פוטוכימיים מן חיבורי הרפיה, להעריך את qE עם שני דקות עיבוד כהה Fm נתונים ראשוניים כפולים. חשב את מרווה תלוי zanthoxylum, qZ, עם 10 דקות עיבוד כהה Fm נתונים ראשוניים כפולים. לאחר מכן חשב את מצב עיכוב התמונה.
כאשר המדידה הבאה מפעילה את האור האקטיני ב-60 פוטונים מיקרומולריים למטר בריבוע לשנייה וחוזרת על אותה מדידה. בניסוי מייצג זה הושוו צמחים מסוג פראי וצמחים ערבידופסיים מוטנטים. השינוי במדד ההשתקפות הפפוטוכימית, PRI, שחושב על ידי רפלקטיביות העלה, התווה כנגד זרימת האלקטרונים ליניארית תלוית האור מערכת צילום 2 כפי שהוערך על ידי פלואורומטר PAM.
בניסוי זה השינוי PRI היה בקורלציה שלילית עם זרימת האלקטרונים ליניארי בצמחים מסוג בר, אבל לא בצמחים מוטנטים. qZ המייצג את מחזור xanthophyll היה מופרד מן חיבורי הרפיה כהה של מרווה לא פוטוכימית היה גם התווה נגד השינוי PRI. בניתוח זה qZ היה גם בקורלציה חזקה עם השינוי PRI עבור שני זנים צמחיים, רומז כי PRI משקף את מחזור xanthophyll.
למדידה בו זמנית של אותו אזור עלה באמצעות אותו מקור אור או עוצמה השתמש באותו סיבי זיהוי בהתקן התיקון כדי למקם את העלה אנכית. ספקטרוסקופיית רפלקטיביות יש פוטנציאל לשמש בניתוח של מגוון רחב של פנוטיפים, בסוג הבר וצמחים מוטנטים כדי להאיר מנגנונים מולקולריים של הצמח.
