Zaten bilinen mutant bitki modeli kullanılarak klorofil floresan analizi ile yaprak yansıtma eşzamanlı ölçüm yeni yansıma parametrelerinin oluşturulmasını kolaylaştırır. Yöntemimiz ile yeni yaprak yansıtma parametrelerinin inşası, doğal çevre koşullarında değişen bitki davranışlarının gerçek zamanlı olarak izlenmesine olanak sağlar. Bir denemeye başlamadan önce bu şemada gösterildiği gibi bir ölçüm sistemi ayarlayın.
Örnek bir sahne, ışık kaynağı, PAM florometresi ve spektral radyometre ile. Sonraki özel yapılmış örnek aşamasına bir cm çapında delik ile 10 cm kare çelik plaka takın. Ve iki ince lif sondalarını birbirine sıkıca sığdırın.
Sondaları plastik bantla sarın. Ardından bantlanmış probları örnek aşamaya kesmek için bir tutucu kullanın. Probları örnek aşamasına dikey olarak yerleştirin.
Ve halojen ışık kaynağına cam elyaftan yapılmış biforked ışık kılavuzu takın. Daha sonra örnek sahneyi her iki yönden de yaklaşık 45 derecelik açıyla ortadan kaldırın. Işık kaynağını, ışık gölgesi dökmeden örnek sahneyi düzgün bir şekilde aydınlatabilecek şekilde ayarlamak.
Sol yansıma ve klorofil floresan analizinin eşzamanlı ölçümü için, yeşil selofan ışıklı karanlık bir odada numune aşamasının yaprak tutucuya bir test tesisi yerleştirin ve sahnedeki çelik plakade ki deliğe değin. Zayıf yeşil ışığı kapattıktan sonra PAM florometresini açın ve yaprak örneğini bir ölçüm ışığıyla yok edin. Ayarlayıcıyı floresan yoğunluğuyaklaşık 100'ü ölçebilsin ve sonda ile yaprak arasındaki mesafeyi ölçebilsin diye hareket ettirin.
Ayarlayıcıyı yerinde sabitle ve mesafenin değerini ayarlayıcıya kaydedin. Daha sonra ölçüm ışığını kapatın ve test tesisini çıkarın. Aktinik ışık yoğunluğu ölçümü için örnek yaprağın yerleştirileceği konuma bir ışık kanteksi yerleştirin.
Ve ışık kaynağının yoğunluğunu ölçmek için halojen ışık kaynağından gelen ışığı ışınla. Işık kaynağı kadranının hangi konumlarının saniyede metre kare başına 30, 60, 120, 240 ve 480 mikromolar proton yoğunluk oluşturduğunu belirleyin. Yaprak numunesinin konumuna yansıtıcı standart olarak beyaz bir plaka yerleştirin.
Ve spektral radyometreyi aç. 350 ve 850 nanometre arasında spektral yansıma ayarlayın. Işınlayıcı ışık olmadığı için şu anda spektral veri yok.
Halojen lambayı açarak saniyede 480 mikromolar foton ile ışınlandırın. Bu testteki en yüksek ışınlama yoğunluğunu ayarlayın ve doygunluğu önlemek için radyometrenin algılama gücünü ayarlayın. Daha sonra saniyede metrekare başına metre başına 30, 60, 120, 240 ve 480 mikromolar fotonile aydınlatma altında spektral yansımayı kaydedin.
Yaprak yansımasının eşzamanlı ölçümü ve klorofil floresan analizi için bitkiyi büyüme odasından aynı sıcaklık ve nemle karanlık odaya aktarın. Bir saat sonra yaprak örnek pozisyonda bir Arabidopsis bitki yerleştirin. Örnek yaprağı da yaprağa sabitleyin, böylece yaprak yüzeyi algılama problarına dik olacak.
PAM florometresini açın ve eğri kaydını başlatın. Bu değere sıfır denir. Ölçüm ışığını açın ve eğrinin yanıt vermesi için yaklaşık 30 saniye bekleyin.
Bu değere F sıfır denirdi. PAM'den saniyede 0,8 saniye boyunca metre kare başına 4,000 mikromolar foton doymuş darbe verin ve daha yüksek floresan yoğunluğuyla eğrideki ani sıçramanın en yüksek değerini elde edin. Bu değer fm.Then karanlıkta fotoğraf sisteminin iki maksimum kuantum verimi hesaplamak için formülü kullanın denir.
Sabit durumda fotosentetik davranışları ölçmek için, Fm kaydettikten sonra saniyede metre kare başına 30 mikromolar foton ile yaprak örneği ışınlamak. Yaprak yansımasını izlemek için spektral radyometreyi açarak. Fotosentetik reaksiyonun sabit bir duruma ulaşması için en az 20 dakika bekleyin.
Bu reaksiyon döneminde doygunluk darbesi bir dakika aralıklarla verilir. Sabit durumun floresan yoğunluğuna Fs denir.20 dakikalık darbeli ışıktan sonra elde edilen maksimum floresan değerine Fm asal denir. Bu noktada spektral yansımayı kaydedin.
Sabit durumda fotosentez aktivitesini hesaplamak için aktinik ışık altında doymuş darbeler ile ışınlanması ile tahmin edilebilir fotoğraf sistemi iki kuantum verimleri hesaplamak. Fotoğraf sisteminden gelen doğrusal elektron akısı iki reaksiyon merkezini tahmin edin. Daha sonra fotokimyasal olmayan söndürme yi hesaplayın ve 531 ve 570 nanometreden fotokimyasal yansıma indeksi hesaplayın.
Fs ve yaprak yansıması elde ettikten sonra aktinik ışık kapatın ve karanlık gevşeme sırasında bir dakika aralıklarla doyunur darbe sağlar. Karanlığın altındaki doygunluk darbesitarafından indüklenen maksimum floresan değerine Fm çift asal denir. Ve aktinik ışığı kapattıktan sonra Fm çift asal verilerini 2 ve 10 dakika içinde kaydedin.
Gevşeme bağlayıcılarından fotokimyasal olmayan söndürme parametrelerini hesaplamak için, iki dakikalık karanlık adaptasyon Fm çift asal veri ile qE tahmin edin. 10 dakikalık koyu adaptasyon Fm çift asal veri ile zanthoxylum bağımlı söndürme, qZ, hesaplayın. Sonra fotoğraf inhibitör durumunu hesaplayın.
Bir sonraki ölçüm olarak saniyenin karesi başına 60 mikromolar fotonlarda aktinik ışığı açın ve aynı ölçümü tekrarlayın. Bu temsili deneyde yabani tip ve mutant Arabidopsis bitkileri karşılaştırıldı. Yaprak yansımasından hesaplanan fotokimyasal yansıma indeksi PRI'deki değişim, PAM florometresi tarafından tahmin edildiği gibi foto-fotosistem ikiden gelen ışığa bağlı doğrusal elektron akışına karşı çizilmiştir.
Bu deneyde PRI'deki değişim, yabani tip bitkilerdeki doğrusal elektron akışıyla negatif olarak ilişkiliydi, ancak mutant bitkilerde değil. xanthophyll döngüsünü temsil eden qZ, fotokimyasal olmayan söndürmenin karanlık gevşeme bağlarından kesirlendi ve PRI'deki değişikliğe karşı çizildi. Bu analizde qZ da kuvvetle pri her iki bitki suşları için değişiklik ile ilişkili olduğunu, PRI xanthophyll döngüsünü yansıttığını ima.
Aynı ışık kaynağı veya yoğunluğu kullanarak aynı yaprak alanının eşzamanlı ölçümü için, yaprağı dikey olarak konumlandırmak için sabitleme cihazındaki aynı algılama lifini kullanın. Yansıma spektroskopisi, bitki moleküler mekanizmalarını açıklamak için yabani tip ve mutant bitkilerde çeşitli fenotiplerin analizinde kullanılma potansiyeline sahiptir.
