מודל המעיים הוא דרך מסתגלת ופיזיולוגית נרחבת למדוד עד כמה דולף המעיים וכיצד לויקוציטים נודדים במעי בעכברים, ב- vivo. שיטה זו מסייעת להבין טוב יותר מנגנונים שבבסיס חלחול מעיים מוגבר ודלקת מעיים פתולוגית. ניתן להשתמש בטכניקה כדי לסייע במנגנוני ההבנה שלנו שבבית תפקוד מחסום המעיים, ודלקת פתולוגית, כפי שניתן לראות קוליטיס כיבית ומחלת קרוהן.
מודל זה משתמש במגזר מעיים חיצוני בעל כלי דם, או של האיליום או המעי הגס הפרוקסימלי, לבדיקת תפקוד מחסום המעי או גיוס תאי החיסון בעכבר. עם יישום רחב זה, מודל לולאת המעי יכול לספק תובנה במחלות הנובעות ממחסום מעיים דולף, כמו גם את התגובה הדלקתית. מאבקים ניתן להתגבר על ידי תרגול הצעדים הכירורגיים.
חשוב מאוד להפוך את מקטע המעי בעל כלי הדם במלואם ולבחור מיקומים מתאימים עבור הקשירות כדי למנוע דימום. מודל לולאת המעיים הוא טכניקה מיקרו-כירורגית, ולכן, כמו עם הליכים כירורגיים אחרים, הוא נהנה מאוד מהדגמה חזותית והצגה צעד אחר צעד של השיטה. לאחר השגת מישור כירורגי של הרדמה, להתחיל על ידי קרצוף הפרווה של קו האמצע הבטן עם ספוגיות אלכוהול או ספוג גזה ספוג עם 70%אתנול.
אין להרטיב אזור רחב של פרווה עם אלכוהול כדי למנוע היפותרמיה. באמצעות מספריים, לבצע לפרוסטומיה בקו האמצע. לעשות חתיכה אופקית באמצע הבטן, ולחשוף את צפק, דואג לא לפגוע באיברים תוך בטן.
מניחים גזת כותנה רטובה חתוכות מראש על חלל הבטן החשוף. השתמש צמר גפן רטוב כדי לגייס חיצוני cecum ולהניח אותו בזהירות על גזה כותנה רטובה. לאחר מכן, גייסו וחצנו בעדינות את האיליום.
לפרוס לפחות שישה סנטימטרים של איליאום סופני על גזת כותנה רטובה מבלי לשבש את כלי mesenteric ואת אספקת הדם. שמור על הרקמות החשופות לחות בכל עת עם HBSS חם. זהה את העורק הראשי המספק את האיליום במזנטריה, קרוב ל cecum.
לאחר מכן, אתר שני אתרי קשירה במזנטריה נטולי כלי דם קריטיים. תפס בחוזקה את ileum מסוף עם מלקחיים רקמה קהה ולהשתמש מלקחיים קצה עדין כדי להדוף את mesentery, הימנעות מכלי הדם. מניחים תספורת משי על פני הניחור, וקושרים קשר כירורגי כדי ליצור את הקשירה הראשונה.
השתמש בסרגל כדי למדוד ארבעה סנטימטרים מהקשירה הראשונה, וליצור את הקשירה השנייה. חותכים בזהירות ליד כל קשירה עם מספריים עדינים כדי לבודד את לולאת ileal ארבעה סנטימטרים, שמירה על אספקת הדם ואת הממברנה mesenteric ללא פגע. שטף בעדינות את התוכן של קטע לולאת ileal עם HBSS חם באמצעות צינור הזנה צהוב גמיש המחובר מזרק 10 מיליליטר.
הקפד לשטוף את התוכן הזוהר מתוך חלל הבטן כדי לשמור על האתר הכירורגי נקי. ליגט את שני קצות החתכים של לולאת האילול הסמוקה עם תפר משי. השתמש מזרק מיליליטר אחד עם מחט 30 מד לאט להזריק 250 microliters של ריאגנט, כגון FITC-dextrans או chemokine, לתוך לומן המעי.
לולאת האילול תתנפח, ותגרום להתנפחות מתונה של הרירית. סגור את דופן הבטן באמצעות מחזיק מחט, מלקחיים אנטומיים, 3.0 תפרי משי שאינם נספגים עם מחט חיתוך הפוכה. לאחר ייבוש החיה כדי למנוע היפותרמיה, למקם אותו בתא הרדמה מוסדר טמפרטורה לתקופת הדגירה.
הכן את העכבר לניתוח וחוץ את cecum כפי שהוכח בעבר. בעזרת צמר גפן רטוב, יש להפוך את האילול כולו לחוץ ומניחים אותו על גבי גזת כותנה רטובה. זהה את המעי הגס הפרוקסימלי ואת אספקת הדם הממוקמת במזוקולון.
גייסו את המעי הגס הפרוקסימלי ויצרו את הקשירה הראשונה באזור נטול כלי שיט במזוקולון בגובה של כ-0.5 ס"מ מהקקום. למדוד שני סנטימטרים מן הקשירה הראשונה וליצור קשירה שנייה באזור ללא אספקת דם ב mesocolon. באמצעות מספריים עדינים, לחתוך בזהירות ליד כל קשירה כדי לבודד pcLoop באורך שני ס"מ.
יש לשטוף בעדינות את ה-pcLoop עם HBSS חם כדי להסיר צואה באמצעות צינור האכלה צהוב גמיש המחובר למזרק 10 מיליליטר. הקפד לשטוף את התוכן הזוהר מתוך חלל הבטן כדי לשמור על האתר הכירורגי נקי. לאחר מכן, ליט את שני הקצוות החתוכים של pcLoop הסמוק באמצעות תפר משי.
השתמש מזרק מיליליטר אחד עם מחט 30 מד לאט להזריק 200 microliters של ריאגנט, כגון FITC-dextran או chemokine, לתוך לומן המעי. pcLoop יהיה לנפח, גרימת התנערות מתונה של הרירית. השתמשו בצמר גפן רטוב כדי להחזיר בעדינות את המחשב, האילולי והצט'ם.
סגור את דופן הבטן באמצעות מחזיק מחט, מלקחיים אנטומיים, 3.0 תפרי משי שאינם נספגים עם מחט חיתוך הפוכה. לאחר תקופת הדגירה, להרדים את העכבר מורדם ולאסוף רקמות לניתוח. על מנת לאמת את הדיוק של מודל לולאת I להערכת חלחיליות מעיים, FITC-dextran pcLoop assay בוצע כדי להעריך את התפקיד של צומת הדוק הקשור חלבון Jam-a ברגולציה של תפקוד מחסום מעיים ב vivo.
עם דגם pcLoop, עלייה של פי 2.5 ברמות סרום FITC-dextran כותמה בעכברים ריקים בהשוואה לבקרות. תוצאות דומות התקבלו עם עכברים מחסה אובדן סלקטיבי של Jam-a על תאי אפיתל מעיים. מודל pcLoop שימש לחקר נויטרופיל פולימורפונוקלארי, או PMN, גיוס לתוך רירית המעיים ונדידה טרנס-אפיתלית לאחר מכן ב vivo.
מספר PMN בתוכן הזוהר של pcLoop היה לכמת על ידי ניתוח ציטומטריית זרימה. מספר PMN הנוכחי בקטע של המעי הגס הפרוקסימלי היה נמוך בתנאים פיזיולוגיים. טיפול מקדים עם ציטוקינים פרו דלקתיים, TNF אלפא ו- IFN גמא, לפני הניתוח, הביא למספרים מוגברים של PMN שגויסו ב- pcLoop lumen.
ניהול הכימותרפיה PMN מושך LTB4 הוביל לעלייה דרמטית בספירת PMN. כתמים אימונוהיסטוכימיים של PMN ברירית המעי הגס מאששים את הגיוס הגבוה של PMN בעקבות גירוי עם ציטוקינים ו- LTB4. התרומה של Jam-a לנדידה טרנס-אפיתלית PMN נחקרה באמצעות מודל pcLoop על עכברים מחסה אובדן סלקטיבי של Jam-a על תאי אפיתל מעיים.
אובדן ג'אם-a אפיתל הוביל למספר מופחת של PMN transmiged בלומן המעי הגס לעומת פקדי המלטה. היבט קריטי עבור טכניקה זו היא לזכור לשמר את אספקת הדם למקטע המעי החיצוני בעת ביצוע הניתוח. בעקבות פרוטוקול זה, ניתן לבצע שיטות אחרות כגון בדיקת חלחלות מעיים ובבדי הגירה טרנס-אפיתל נויטרופילי כדי לחקור אובדן שלמות המחסום ודלקת מעיים ב vivo.
