פרוטוקול זה מאפשר להעריך את המנגנון של השתלת איון לתוך רקמת שומן לבן. היתרון העיקרי של שיטת השתלת איון מכוסה שומן זו הוא שקל מבחינה טכנית לשכפל. השיטה יכולה להיות מיושמת על מודלים אחרים של מחלות.
לדוגמה זה יכול לשמש כדי ליצור מודל עכבר של סרטן. מי שידגים את ההליך יהיה נאואקי סאקאטה, פרופסור חבר באוניברסיטת פוקואוקה. תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמש במיקרו-פיפטה P 200 כדי להסיר כל רכיב איון נוסף מעיכול הלבלב, כולל אקסינאר ורקמות סיביות.
לאחר מכן השתמש במסננת תאים כדי לסנן תאי אצנר בודדים. העבירו את האיים המסוננים לצלחת תרבית חדשה המכילה את מדיום התרבית המתאים או תמיסת חיץ בתוספת סרום בקר או אלבומין, וסובבו את המנה כדי למקם את האיים במרכז. באמצעות מיקרו פיפטה P 200, בחר את האיים הבודדים לתוך צינור איסוף מתאים.
הניחו מסננת תאים חדשה בקוטר 40 מיקרומטר על גבי צינור פלסטיק בקוטר 50 מיליליטר. השתמש פיפטה של 1000 מיקרוליטר כדי להוסיף את האיים למסננת כדי להפריד בין האיים לבין תאי האסינאר הבודדים. השתמשו במלקחיים כדי להפוך את המסננת על צלחת תרבית חדשה בגודל 60 או 100 מיליליטר שאינה מטופלת המכילה מדיום תרבית או תמיסת חיץ מתאימה, בתוספת סרום בקר או אלבומין.
השתמשו במדיום טרי, או בופר כדי לשטוף את האיים למנת תרבית חדשה, ולאחר מכן הוסיפו מספיק מדיום או חיץ למנת התרבית כדי להגיע לנפח כולל של כ-20 מיליליטר. סופרים את האיים תחת מיקרוסקופ ומחלקים את מספר האיים באופן שווה בין צינורות צנטריפוגות פלסטיק בודדים של 1.5 מיליליטר בהתאם למספר בעלי החיים התורמים. צנטריפוגה של האיים ב 2, 100 גרם במשך דקה אחת בטמפרטורת החדר ולהשליך את supernatant.
כ-20 עד 30 מיקרוליטרים של תמיסה שיורית יישארו בדרך כלל בצינור. לאחר הסרת השיער מהבטן כדי למנוע זיהום מניחים את העכבר במצב שכיבה. לאחר חיטוי הבטן ואזור המפשעה חותכים את העור באזור החציוני התחתון, ויוצרים חתך בעור שאורכו כשני סנטימטרים.
מהדק את דופן הבטן השמאלית עם מלקחיים או retractors ולמשוך את הרקמה לצד שמאל של העכבר כדי לאבטח את שדה הניתוח. השתמש צמר גפן כדי לגייס את המעי הדק והגס לצד ימין של העכבר. רקמת השומן הלבנה באפידרמיס השמאלי בחלל הבטן ממוקמת באזור המפשעה השמאלי.
גייסו את רקמת השומן הלבנה באפידרמיס ואת האשך השמאלי לחלק החיצוני של הבטן ומתחו את הרקמה. השתמש במיקרו פיפטה P 200 כדי לאסוף את כל נפח האיים מצינור אחד של 1.5 מיליליטר, תוך הקפדה על כך שלא יישארו איונים בצינור בעת האיסוף. אפשרו לאיים שנאספו להתיישב בקצה הפיפטה על ידי כוח הכבידה.
מניחים את קצה המיקרו פיפטה קלות על רקמת השומן המנופחת, תוך הקפדה על מניעת שטיפה מוגזמת של המדיום או החיץ בקצה. בזהירות זרע את האיים על הרקמה. לאחר הזריעה, לאשר את המיקום הנכון של האיים תחת מיקרוסקופ ניתוח.
לכסות את האיים עם רקמת השומן הלבן האפידרמלי, ולאחר מכן למקם את האשך השמאלי מתחת לרקמת השומן הלבן האפיזומלי ולהחזיר את הרקמות לחלל intraperitoneal. סגרו את העור בשתי שכבות בעזרת תפר 4. בסיום, הנח את העכבר מתחת למנורת חום ונטר אותו עד להתאוששות מלאה.
כדי להשוות את יעילות ההשתלה של השתלת איון מכוסה שומן לזו שלאחר השתלת איון תוך-צפקי, אותו מספר של איונים הושתל על הצפק בחלל הפרקולי השמאלי של בעלי חיים סוכרתיים מושתלי בקרה. רמות הגלוקוז בדם של עכברים עם השתלת איון מכוסה שומן נצפו לרדת בהדרגה ובאופן משמעותי בהשוואה לעכברים מושתלים באיון תוך-צפקי. בדיקת סבילות לגלוקוז תוך-צפקית בוצעה חודש לאחר ההשתלה.
רמת הגלוקוז בדם בעכברים עם השתלת איון מכוסה שומן נשמרה ברמות נמוכות יותר מזו שנצפתה בעכברים מושתלים באיון תוך-צפקי. בדיקה היסטולוגית שימשה להערכת השתלת איון ברקמת השומן הלבן באפידרמיס. בבעלי חיים מושתלי איונים מכוסים שומן, כתם hematoxylin eocene חשף את נוכחותם של איים בתוך רקמת השומן הלבנה באפידרמיס.
בנוסף, צביעת נוגדנים מצומדת פלואורסצנטית של איים חיוביים לאינסולין הקלה על זיהוי של כלי מיקרו חיוביים של גורם פון וילברנד בתוך רקמת השומן הלבנה באפידרמיס של כל העכברים המקבלים. כדי להצליח בהליך זה הקפידו לאפשר לאיונים להתיישב בקצה הפיפטה לחלוטין, ולזרוע אותם על רקמת השומן מבלי להישפך.
