פרוטוקול זה משתמש בשיטת דגימת CSF CSF של בור מים סדרתי כדי לחקור את ההשפעות של rTMS על רמות אלפא-בטא וטאו בקוף רזוס. טכניקה זו משתמשת בשיטת דגימה חדשנית של CSF המאפשרת דגימת CSF חוזרת בתנאים ערים לחלוטין עם סיכונים נמוכים לאירועים שליליים. מי שידגימו את ההליך יהיו יינג-צ'יאן ג'אנג, עוזרת מחקר מהמחלקה לפיזיולוגיה באוניברסיטה הרפואית של סאות'ווסט, והוי-שין טאן, סטודנטית לתואר שני מאוניברסיטת סצ'ואן.
לאחר מתן משככי כאבים ואישור הרדמה מוצלחת, מניחים את קוף הרזוס הזכר בן החמש על שולחן הניתוחים בתנוחת דקוביטוס לרוחב ומחטאים את האזור סביב הגב התחתון. כופף את גבו והבא את ברכיו לכיוון החזה. הכנס מחט עמוד שדרה בין החוליות המותניות L4 ל- L5 ולדחוף אותה פנימה עד שיש פופ המציין כניסה לבור המותני בו שוכן פלבום הרצועה.
המשך לדחוף את המחט עוד יותר עד שיש פופ שני המציין כניסה לתוך דורה מאטר, ולאחר מכן למשוך את stylet ממחט עמוד השדרה ולאסוף טיפות של CSF. לאחר מכן, בצע החדרת קטטר תחת הדרכה פלואורוסקופית על ידי החדרת צנתר אפידורל דרך מחט הנקב לתוך החלל subarachnoid עד שהוא ציפה במגנה הבור. לאחר מכן להשתלת יציאה, בצע חתך של חמישה סנטימטרים מאתר הדקירה לכיוון הראש ולבודד את העור מהרקמה התת עורית כדי למקם את יציאת הדגימה.
חברו את הנמל לסוף צנתר האפידורל, שתלו את היציאה מתחת לעור ותפרו את החתך. עבור אוסף CSF, השתמש בסורגי הכלוב כדי לרסן את הקוף ולשמור על גבו כפוף. לאחר מכן לנגב עם ספוגית אלכוהול ולהכניס את המזרק למרכז נמל הדגימה כדי לחלץ CSF מן המגנה בור דרך הצנתר.
השלך את 200 המיקרוליטרים הראשונים של CSF, ולאחר מכן אסוף מיליליטר אחד של CSF לניתוח. תקן את הקוף על כיסא הקוף לפני הניסוי כדי למנוע הפרעה במהלך התערבות rTMS, ולאחר מכן לאסוף CSF לניתוח סמנים ביולוגיים כאשר הקוף ער כדי למנוע את ההשפעה של תרופות הרדמה. ביום השלישי לאחר הצנתור התת-עכבישי ושבועיים לפני תחילת הניסוי, הכפיף את הקוף לאימון אדפטיבי עם כיסא הקוף פעמיים ביום במשך 30 דקות בכל פעם.
בצע את האימון האדפטיבי rTMS או גירוי מזויף שבוע לאחר האימון האדפטיבי עם כיסא הקוף ושבוע לפני תחילת הניסוי הרשמי, כדי למנוע הפרעה להתקדמות הניסוי על ידי תנודות וצלילים במהלך תהליך הגירוי. לגירוי מזויף, השתמש בסליל מזויף המייצר רטט וקול אך אינו יוצר שדה מגנטי. לאחר גירוי, להציע מזון לקוף כדי לעזור לו להסתגל לתהליך.
לוקליזציה של קליפת המוח הקדם-מצחית הדו-צדדית הגב-טרליתית על פי המערכת הבינלאומית 10 עד 20 וביצוע שלושה מפגשים שונים של rTMS באמצעות שלושה תדרים שונים ללא תקופת שטיפה העולה על 24 שעות. בצע את המפגש הראשון, השני והשלישי פעמיים ביום במשך שלושה ימים רצופים. כדי לנתח את ארבעת סמנים ביולוגיים CSF, השתמש בשיטת צנתור זעיר פולשנית כדי לאסוף את ה- CSF.
לאסוף CSF בחמש נקודות זמן עם ארבע דוגמאות בכל נקודת זמן במרווחי זמן של שלוש דקות. לאחר איסוף סך של 60 דגימות עבור שלושה תדרים, מספר ולאחסן אותם במקרר מינוס 80 מעלות צלזיוס עד חודש. לאחר הניסוי, לחשוף את כל הדגימות לזיהוי שבב נוזלי על פי הוראות היצרן.
לאחר גירוי rTMS הרץ אחד, רמות Abeta42 גדל בהדרגה מעל 24 שעות. באופן דומה עם rTMS ב 20 הרץ, רמות Abeta42 עלה עם הזמן והגיע לשיא בשש שעות לאחר גירוי. לעומת זאת, לאחר גירוי 40 הרץ, רמות Abeta42 גדל באופן משמעותי מיד בנקודת הזמן שלאחר rTMS, ולאחר מכן ירד לאט.
היחס בין Abeta42 ל- Abeta40 הראה מגמת עלייה לאחר גירוי עם rTMS אחד ו 20 הרץ גדל באופן משמעותי שעתיים לאחר גירוי. עם זאת, לא היה הבדל משמעותי ביחס של 40 הרץ. רמות tTau ב- CSF מיד עלה לאחר 20 ו 40 גירוי rTMS הרץ וירד בהדרגה.
עם זאת, לא היה הבדל משמעותי לאחר גירוי הרץ אחד. רמת pTau מיד עלתה לאחר גירוי 40 הרץ וירדה אל מתחת לרמה הבסיסית לאחר 24 שעות. לעומת זאת, עבור גירוי אחד ו 20 הרץ, רמת pTau הראתה מגמת ירידה.
חוקרים הדורשים דגימות מרובות של קופים CSF יכולים לשקול את שיטת הדגימה הסדרתית CSF של CSF.
