פרוטוקול זה מודד את הפעילות הפוטוסינתטית של אצות מחוברות, בעוד הן עדיין מחוברות לפלנקטון, בדיוק כמו בטבע. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי המדידה של פוטופיזיולוגיה ניתן לעשות בזמן אמת ללא הסחת דעת מדגם. כדי לבחון את ההשפעות של אנשים zooplankton על פלואורסצנטיות בסיסית, להכין mucronata scapholeberis מבוגר מהתרבות ללא כל אורגניזמים מחוברים.
עכשיו להרעיב את האנשים ב FLW ב 20 מעלות צלזיוס לפחות 90 דקות, כדי למנוע פלואורסצנטיות מתכולת המעיים. יוצקים 1.5 מיליליטר של FWL לתוך cuvette. לאסוף את המספר הרצוי של s.
אנשי mucronata באמצעות פיפטה תחת מיקרוסקופ אופטי בהגדלה של פי 100 ומעבירים אותם לקובט. הוסף FLW כדי להביא את נפח המדגם עד 2 מיליליטר ולאפשר לו להתאקלם תחת אור נמוך ב 20 מעלות צלזיוס הוא במשך 15 דקות לפני מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה. לאחר מכן לחץ על act כדי לרוץ"כדי להתחיל את המדידה ולחזור על המדידות יותר משלוש פעמים לכל מדגם.
קרא את ערך F0 מהתוויה המתקבלת. לאסוף מינים קולאקיום עם קרפאצ'ה מותך באמצעות פיפטה תחת מיקרוסקופ אופטי בהגדלה של פי 100 ולשטוף אותם עם FLW. מינים של קולקיום מחוסנים באופן אספטי במדיום AF-6 בצינור זכוכית של 10 מיליליטר על ספסל נקי.
לשמור על התרבות בטמפרטורה NC2 בתא צמיחה, רועד צינור הזכוכית בעדינות ביד לפחות פעם ביום כדי למנוע התיישבות התא. כדי לבחון את ההשפעות של אנשים zooplankton על כלורופיל פלואורסצנטיות ממיני קולציום, להשתמש s. mucronata למבוגרים ללא כל אורגניזמים מחוברים.
כדי למנוע פלואורסצנטיות מתכולת המעיים, הרעיבו את האנשים ב- FLW למשך 90 דקות לפחות. הגדירו פלואורומטר קצב חזרה מהיר מסוג קובט. עכשיו לשפוך 1.5 מיליליטר של תת מדגם של מינים מראש תרבית קולציום לתוך cuvette.
לאחר מכן להעביר את המספר הרצוי של s. mucronata אנשים לתוך cuvettes אלה ולהביא את נפח המדגם עד 2 מיליליטר עם המדיום המסונן. התאקלם האנשים תחת אור נמוך ב 20 מעלות צלזיוס במשך 15 דקות לפני נטילת מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה.
לחץ על מעשה כדי לרוץ"כדי להתחיל את המדידה, חוזר על המדידות יותר משלוש פעמים לכל מדגם. קרא את ערכי F0 ו- FM מהתוויה המתקבלת. כדי לתקן את הפלואורסצנטיות הבסיסית, סנן את מדיום התרבות באמצעות מסנן בגודל 0.2 מיקרומטר ומדוד את הפלואורסצנטיות.
הפחת F0 של הדגימה הבסיסית מ- F0 ו- FM של מיני קולציום או שנה את ערך התיקון הריק בהגדרות בכרטיסיית האפשרויות.
לאחר מכן לשטוף s. mucronata באמצעות FLW. העברה s.
mucronata לתוך 100 מיליליטר של FLW ולשמור אותם בתנאים כהים בטמפרטורת NC2 במשך 90 דקות לרעב. יוצקים 1.5 מיליליטר של FLW לתוך cuvette. העברה סביב עשר שניות.
אנשים mucronata עם מינים קולציום לתוך cuvette ולהוסיף FLW להביא את המדגם עד 2 מיליליטר. התאקלמו האנשים תחת אור נמוך בטמפרטורת N2C במשך 15 דקות ולמדוד כלורופיל פלואורסצנטיות, כפי שהוזכר בכתב היד של הטקסט. כדי למנות את מספר התאים המצורפים, לתקן את המדגם עם 2% glutaraldehyde לאחר נטילת מדידת פלואורומטר קצב החזרה המהירה.
לאחר מכן צלם תמונות בכמה עומקים ממוקדים ועמדות של s. mucronata תחת מיקרוסקופ אור. לא הייתה השפעה משמעותית על פלואורסצנטיות בסיסית או כלורופיל פלואורסצנטיות על ידי s.
mucronata עד 5 אנשים למיליליטר. עם זאת, יעילות פוטוכימית מקסימלית ומרווה לא פוטוכימית הושפעו באופן משמעותי כאשר צפיפות s. mucronata היה 7.5 אנשים למיליליטר.
וריאציה עונתית בפיטופיזיאולוגיה של מיני קולציום בשלב ההתקשרות ובשלב הפלנקטוני לשלב הנייח במדיום AF-6 הראתה יעילות פוטוכימית מקסימלית ממוצעת דומה ומרווה לא פוטוכימי. עבור השלב המצורף של מיני קולציום בתנאים כהים, לא היה הבדל משמעותי בפרמטרים פוטופיזיולוגיים, למעט מרווה לא פוטוכימי להיות גבוה יותר עבור מנגן מאשר סידן לאחר שלוש שעות, ובעוצמה נמוכה אור ב 21 שעות. בשלב הפלנקטוני, חתך ספיגת PS2 היה נמוך משמעותית במנגן מאשר טיפול בסידן בשלוש שעות.
יעילות פוטוכימית יעילה הייתה גבוהה משמעותית, אך מרווה לא פוטוכימי היה נמוך יותר בטיפול במנגן מאשר שליטה ב -21 שעות. תחת אור הולך וגובר, מנגן נטה להפחית את חתך ספיגת PS2 בשלוש שעות, במרווה לא פוטוכימי ב 21 שעות, תוך הגדלת היעילות פוטוכימית יעילה בשלוש שעות. סידן השתפר מעט מרווה לא פוטוכימי תחת אור הולך וגובר.
עם זאת, זה הפחית את היעילות פוטוכימית יעילה בשלוש שעות. הדבר החשוב ביותר הוא ההשפעה של אורגניזמים מצע. אם אצות מחוברות למינים או חומרים שונים, ההשפעה יכולה להיות שונה.
בנוסף לפרוטוקול זה, מדידה של קיבוע פחמן או שיעורי ייצור חמצן שימושיים כדי להבהיר את התגובה של פרודוקטיביות הסידן למניפולציות הניסיוניות. פרוטוקול זה מאפשר לנו להבהיר כיצד הפעילות הפוטוסינתטית של אצות מצורפות מגיבה לשינויים סביבתיים.
