הפרוטוקול מציע להשתמש בתולעי קרן טבק כמערכת מודל חרקים למחקרים פרה-קליניים קנבינואידים. מערכת זו מאפשרת לחוקרים לחקור תגובות חריפות וארוכות טווח לקנבינואידים בקלות. מערכת מודל החרקים מאפשרת לחוקרים לחקור השפעות טיפוליות קנבינואידיות באוכלוסייה גדולה בתוך שלושה עד ארבעה שבועות עם פחות עבודה ועלויות מאשר מערכות אחרות של בעלי חיים.
להשיג 150 עד 200 ביצי M.sexta קיימא ודיאטות מלאכותיות מבוססות נבט חיטה. מניחים את ביצי תולעי הקרן בצלחת פטרי פוליסטירן עם שכבת תזונה מלאכותית המבוססת על נבט חיטה ומעבירים את הביצים לתא גידול חרקים המתוחזק ב 25 מעלות צלזיוס עם לחות יחסית של 40 עד 60%. אפשר לביצים לבקוע במשך יום עד שלושה ימים בתוך תא גידול החרקים.
כדי להכין פתרון מלאי קנבידיול 200 מילימולרי, להוסיף 1.26 גרם של יותר מ 98% טוהר קנבידיול לבודד ב 20 מיליליטר של אתנול או 100% שמן טריגליצרידים שרשרת בינונית. הוסף חמישה מיליליטר ו 10 מיליליטר של פתרון מלאי קנבידיול 200 מילימולר ל 1, 000 גרם של דיאטה מלאכותית עבור מילימולר אחד ושני מילימולרי של קנבידיול, בהתאמה. חלוקת 20 גרם של רכב בקרה ומדיה המכילה קנבידיול לתחתית צינור 50 מיליליטר.
באופן אקראי להפיץ כשני מילימטר זחלי instar הראשון בנפרד במבחנה 50 מיליליטר לכסות עם מכסה מחורר או מטלית גבינה. לגדל אותם בתוך תא גידול חרקים מתוחזק ב 25 מעלות צלזיוס עם מחזור 12 שעות אור כהה. כדי למדוד את צמיחת הזחלים, רשום את המסה והגודל ההתחלתיים של כל קבוצה עם איזון אנליטי וסרגל, בהתאמה, והצג את הזחלים לתזונה שלהם.
הפחת את המסה של הזחלים בכל מדידה במרווחי זמן של יומיים מהמסה הראשונית כדי לקבוע רווחי מסה בין שלבי התפתחות הזחלים. כמו כן, רשום את מספר הימים בין השלבים ההתפתחותיים של instar כדי להבין את ההבדלים במסגרת הזמן ההתפתחותית עד גור. כדי למדוד את צריכת הדיאטה, להקליט את הגרמים הראשוניים של דיאטה בתחילת הניסוי ולהפחית אותו מן הכמות הנותרת של דיאטה כאשר הזחלים נכנסו לשלב הגור המלא.
למדידת ניידות הזחלים, אפשרו לחרק הנבדק להתאקלם בתא ההתניה של הפחד למשך חמש דקות לפחות ולעקוב אחר המרחקים ששלוש קבוצות החרקים החמישיים נסעו במשך חמש דקות. לאחר מכן, הפעל את התוכנה לזיהוי תנועה כדי לנתח את תגובת הניידות. החרקים שגדלו בתזונה מלאכותית הראו את ביצועי הצמיחה הטובים ביותר.
בקרת הרכב שהשתמשה 0.1% שמן טריגליצרידים שרשרת בינונית כסוכן המסה עבור בידוד CBD גם הראה צמיחה נורמלית ללא כל השפעות מזיקות. עם זאת, מינון גבוה של CBD של ירידה במשקל מושרה שני מילימטרים והוביל לשיעור תמותה גבוה יותר מאשר קבוצות שליטה וכלי רכב. M.sexta זחלים גדלו על AD עם CBD מילימטר אחד נצרך לפחות 3.1 פעמים דיאטה גדולה יותר מאשר אלה גדלו על דיאטה הוסיף אתנול.
עם זאת, צריכת הדיאטה של החרקים גדל על שני מילימולר CBD הוסיף מדיה לא היה שונה באופן משמעותי מן הזחלים גדל על דיאטות אתנול בלבד. המדד הנייד של M.sexta זחל גדל בתנאים שונים מראה כי 1% אתנול וזחל אחד מילימולרי CBD מטופלים לא השפיעו על הניידות. 2% טיפולי האתנול התבררו כקטלניים.
הוספת מינון גבוה של CBD לתוך AD המכיל 2% אתנול משוחזר ניידות נמוכה. לאחר CBD מתווסף דיאטות, הומוגני לחלוטין את תערובת CBD דיאטה ולגדל חרקים בתא גידול חרקים נשמר ב 25 מעלות צלזיוס עם 40 עד 60% לחות כדי למנוע התפרצות פטרייתית. תגובות אלקטרופיזיולוגיות ניתן לפקח גם עם הגרעינים שרשרת הגחון ניתח ממנדוקה סקסטה כדי לקבוע אם CBD משפיע על מערכת העצבים המרכזית של תולעת הטבק.
מערכת מודל החרקים תאפשר לחוקרים לחקור את התפקידים התרופתיים של קנבינואידים מרכזיים וקלים אחרים על ידי בדיקה לאורך דורות רבים, המאפשרת תכנון ניסיוני ביונקים גבוהים יותר.
