הערך הייחודי של פרוטוקול זה הוא ששני אנשי צוות המשתמשים בציוד זמין בחללי מעבדה קטנים יכולים לייצר מספיק יתושי מאל סטריליים כדי לתמוך בתוכנית SIT מבצעית של 50 דונם. היעילות והעלות הנמוכה של טכניקה זו הופכת אותה לנגישה, בלתי ניתנת לתיקון אפילו עבור מחוזות הדברת יתושים קטנים כדי להגדיל את תוכנית ההדברה הווקטורית המשולבת שלהם. מדגימים את הנוהל יהיו אני וברברה באייר, טכנאי מעבדה למדעי הביולוגיה מיחידת המחקר.
כדי לגדל Aedes aegypti בוגרים מגלמים, הכינו כלובי גידול אלומיניום מתקפלים בגודל 60 על 60 על 60 ס"מ עם הקרנת רשת פיברגלס בגודל 0.84 על 0.84 מ"מ, ושרוול סטוקינט על קיר אנכי אחד של כל כלוב. מניחים פלסטיק של 1, 900 מיליליטר עם גלמים Aedes aegypti ביחס של אחד לאחד לכל כלוב גידול וקושרים את השרוול סגור, ומשאירים את הכוסות בכלובים לאקלוזיה למשך כארבעה ימים בטמפרטורה של 28 עד 30 מעלות צלזיוס יותר מ-50% לחות יחסית במחזור אור של 12:12 או 14:10 עד שלא יוצאים עוד בוגרים. 24 שעות לאחר הנחת הגלמים בכלובי הגידול, הכניסו לכל כלוב מיכל של תמיסת 10% סוכרוז עם פתיל ספוג ותלו ספוג בגודל 10 על 2 ס"מ ספוג בדבש מתוך וו תיל כדי לספק לחות ותזונה בהתאמה ליתושים הבוגרים.
48 עד 72 שעות לאחר שרוב המבוגרים הגיחו בכל יומיים עד שלושה במשך שלושת עד ארבעת השבועות הבאים, מלאו את הקונדום מעור כבש אחד ב-50 עד 100 מיליליטר של דם בקר דהוי לכל כלוב, וחממו את הקונדומים לכ-37 מעלות צלזיוס באמבט מים חמים. לאחר טפיחה קפדנית על הקונדומים עם המגבת, הניחו את הקונדומים המיובשים חלקית בכלי פטרי מרופדים בנייר בתוך הכלובים למשך 30 עד 60 דקות. 48 עד 72 שעות לאחר כל האכלה בדם, יש להניח אובפוזיציה של 1, 900 מיליליטר המכילה 800 מיליליטר של מי פופל מסוננים ומרוהטת עם יריעה בגודל 8 עד 10 על 30 ס"מ של נייר נביטת זרעים המותאם להדחה לאורך ההיקף הפנימי של הכוס לתוך כל כלוב.
כדי לגדל את זחלי Aedes aegypti מביצים, השתמש בנייר oviposition עם 5, 000 עד 10, 000 ביצים נוכחים לחתוך קטע של שלושה עד שבעה סנטימטרים בניצב לקו oviposition. הכניסו את החתיכה למיכל חדש של 460 מיליליטר, מלא למחצה במי ברז וקמצוץ של פתיתי מזון דגים. מכסים ומתסיסים את המיכל במרץ במשך דקה אחת לפחות לפני ששופכים את כל התכולה למחבת גידול זחלים המכילה שלושה ליטרים של מי ברז ו -50 מיליליטר של תבשיל חום.
סמנו את המחבת עם תאריך ההתחלה, פרטי הזן ולוח הזמנים להאכלה. לאחר שהגיע לשיעור הסף המשוער של הזחלים במחבתות הזחלים, שפכו את תכולת כל מחבת דרך מסננת בגודל 20 עד 40 והשתמשו בבקבוק לחיץ של מי ברז כדי לשטוף את הגלמים והזחלים מהמסננת לתוך פלסטיק מדורגת של שלושה ליטר. כדי להפריד בין הגלמים הזכרים לבין הזחלים והגלמים הנקביים, חלקו את תכולת כל בין מספר מכלי פלסטיק בנפח 1.9 ליטר והניחו מיכל איסוף קשיח של ארבעה ליטרים מתחת לגלמים בבסיס מפריד הפופלים.
ממלאים שתי כוסות פלסטיק בעלות שלושה ליטרים כשלושת רבעי מי ברז ושופכים את המים דרך החלל שבין לוחות הזכוכית של המפריד תוך התאמת הידיות העליונות והתחתונות כדי לאפשר למים לזרום ברציפות דרך המפריד. לאחר שהמים העומדים נאספים באופן שווה בגובה של כ-1.25 ס"מ מבסיס הלוחות, מסמנים את מיקומי ההתחלה בידיות התחתונות של המפריד בנייר דבק, ומתחילים לשפוך את מיכלי הגלמים והזחלים לתוך המפריד תוך סיבוב רציף של הידיות התחתונות נגד כיוון השעון במרחק של סנטימטר עד שני סנטימטרים מעמדות ההתחלה. כאשר רוב הזחלים או כולם שטפו את הזחל לתוך מיכל האיסוף, השהו את זרימת המים והשתמשו במסננת מספר 30 כדי לפנות את מיכל האיסוף של הזחלים.
לאחר שכל הזחלים הוסרו, שפכו את המים והתאימו שוב את הידיות כדי לאפשר את שטיפת הגלמים הזכרים לתוך מיכל האיסוף. לאחר מכן שפכו את הגלמים הזכרים מהמיכל לתוך מסננת מספר 20 והשתמשו בבקבוק לחיץ של ליטר אחד של מי ברז כדי לשטוף את הגלמים מהמסננת למיכל נפרד של 1.9 ליטר. לאחר שכל הגלמים הזכרים נאספו, שפכו את המים והתאימו את הידיות כדי לאפשר את איסוף הגלמים הנקביים.
שימוש במסננת מספר 20 כדי להעביר את הגלמים הנקביים למיכל חדש של 1.9 ליטר כפי שהוכח זה עתה. לאחר מכן שפכו את המים והתאימו שוב את הידיות עד שכל היתושים הלא בוגרים נשטפו מהמפריד. מסננים את הגלמים הזכרים שנאספו במסננת ושוטפים את הקקי לכוס מדורגת של ליטר אחד עם כמה שפחות מים.
מוזגים בזהירות את הגלמים לתוך צלחות פטרי מרופדות בנייר סינון לח בשכבה אחת. הסר מים עומדים מתחתית צלחת פטרי באמצעות פיפטה מרעה טרייה של שלושה מיליליטר כדי למנוע תזוזה של הפופל במהלך העבודה. צרפו צלחות וערימות של פטרי לפני האיטום בתוך שקית 3.8 ליטר הניתנת לסגירה חוזרת כדי להתאים לתא ההקרנה.
כדי לסמן קבוצות מכמתות של יתושים זכרים בוגרים מוקרנים, הסר את כל מקורות ההזנה מכלוב הגידול והנח כלוב אחד לתוך תא פחמן דו חמצני גדול למשך חמש עד שבע דקות, תוך דפיקת דפנות המיכל כדי לעקור את כל היתושים הנצמדים לקירות. בתום תקופת החשיפה, מעבירים את היתושים לבקבוקון שואב והרדימו שוב את היתושים לפני שהם מנענעים את היתושים למשטח עבודה מכוסה נייר לבן. שאפו בזהירות את כל הזכרים משטח העבודה לבקבוקון חדש וחזרו על החשיפות והאיסוף עד שכל הזכרים הבוגרים נאספו מכל כלובי הגידול.
בשלב מסוים במהלך תהליך מיון המין, ליצור בקבוקון המכיל רק 25 יתושים זכרים בוגרים. כאשר כל הזכרים נאספו, שקלו כל יתוש מרושע בסירת שקילה זפת על איזון, ושפכו במהירות את היתושים השקולים לתוך מיכל קרטון של 240 מיליליטר המכיל 50 מיליגרם צבע סימון. הטה וסובב את המיכל בסיבוב אחד מלא בכיוון השעון ונגד כיוון השעון עד שכל היתושים מצופים קלות ושופכים את היתושים לסירת שקילה חדשה, ואז מקפלים את סירת המשקל לשניים כדי לאפשר ליתושים להיות מתועלים דרך שרוול הסטוקינט לתוך מיכל השחרור.
כאשר נוספו למיכל השחרור כשני גרם של יתושים זכרים, קשרו את שרוול הסטוקינט סגור וסמנו את סרט הסימון על מסגרת מיכל השחרור בצבע הצבע, מספר המיכל והמשקל הכולל של היתושים. בניסוי ייצוגי זה של גידול, הקרנה ושיווק יתושים בוגרים Aedes aegypti, ניתן היה לאסוף שני גרם של יתושים בוגרים זכרים משלושה כלובי גידול ויחד עם שני בקבוקונים של 25 זכרים משני כלובים כדי לאפשר חישוב המשקל הממוצע ליתוש. 25 נקבות הושלכו בסך הכל משתיים מהקבוצות.
האכלה בזמן ותצפית במהלך שבוע גידול הזחלים היא קריטית ליצירת גלמים מפותחים היטב להפרדה. זה יוצר הבחנה ברורה בין זכרים לנקבות המובילה להופעה נמוכה של נקבות בשלבי הסימון. מלבד השימוש בהם בתוכניות SIT מבצעיות, זכרים סטריליים אלה יכולים לשמש באופן נרחב גם בניסויים החוקרים תחרות הזדווגות, הישרדות ופיזור של זכרים מוקרנים בהשוואה לזכרים פראיים שאינם מוקרנים.
שינוי הטכניקה כך שתכלול נקבות יתושים מאפשר לנו לחקור את ההשפעה של שחרור לא מכוון של נקבות מוקרנות ביחס ליכולת הנקבה והווקטורית.
