עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (No.82074523,82104996).

כל הניסויים בבעלי חיים נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בעלי חיים באוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית (No. BUCM-4-2022010101-1097). בפרוטוקול זה, 24 ארנבים ניו זילנדים זכרים בני 6 שבועות שוכנו בתנאים ספציפיים, כלומר, 20-25 מעלות צלזיוס, 50-60% לחות, ומחזור צירקדי בהיר / 12 שעות כהה, עם גישה חופשית לתזונת צ'או רגילה. הארנבים הורדמו והוקרבו על ידי שילוב של הרדמה עמוקה ותסחיף אוויר. כאב הוא אחד המאפיינים הפתולוגיים האופייניים של KOA והוא גם אחד המדדים המרכזיים המשמשים להערכת מודלים של בעלי חיים של KOA ושיטות התערבות, ולכן משככי כאבים אינם משמשים במהלך הכנת המודל.
1. מודל ארנב KOA
<ol><li>מרדימים ארנבים עם 3% נתרן pentobarbital (30 מ"ג / ק"ג) תוך ורידי בשולי האוזן. כדי לאשר את רמת ההרדמה המתאימה, חפש רפלקס קרנית נחלש או נעדר באופן משמעותי והיעדר כאב בעת הידוק העור עם מלקחיים המוסטטיים. במהלך ההרדמה, הוסיפו 2-3 טיפות של חומר סיכה לעיני הארנבים כל 15 דקות כדי למנוע מעיני הארנבים להתייבש.</li>
	<li>לאחר ההרדמה, לתקן כל ארנב במצב שכיבה, למשוך את הגפה האחורית השמאלית למצב מורחב לחלוטין.</li>
	<li>תקן את הגפה האחורית השמאלית של כל ארנב במצב המורחב.<ol><li>כשכבה הראשונה, השתמש בסרט רפואי כדי לכסות את עור הארנב מהמפשעה למפרק הקרסול.</li>
		<li>כשכבה השנייה, יש לעטוף סרט קצף דו צדדי ברוחב 36 מ"מ מעל הסרט הרפואי ולאחר מכן לעטוף תחבושת פולימרית מהמפשעה למפרק הקרסול. יש לוודא שמפרק הברך ישר ב-180 מעלות ומפרק הקרסול ב-60 מעלות.</li>
		<li>כשכבה השלישית, יש לשתק את המפרקים עם סדים קטנים בחלק הקדמי והאחורי של מפרקי הברך והקרסול, ולכרוך רשת פלדה סביב השכבה החיצונית ביותר כדי להגן מפני נשיכות. חשוף את בהונות הארנבים כדי לבחון אם זרימת הדם תקינה.</li>
	</ol></li>
	<li>השתיקו את החיות למשך 6 שבועות כדי לבסס את מודל KOA (איור 1). הערה: 1) במהלך הכנת הדגם, בדקו את התבניות אחת ליומיים. אם תבניות כלשהן רופפות או מנותקות, הרדימו את הארנבים, ושתקו מחדש את הגפיים האחוריות השמאליות במצב מורחב. 2) הניחו מחצלות מגן על תחתית הכלובים כדי למנוע מגפי הארנבים להיתקע ולגרום לפציעה.</li>
</ol>2. התערבות אקופוטומיה
הערה: לפני תחילת התערבות אקופוטומיה, להרדים את הארנבים עם 3% נתרן pentobarbital (30 מ"ג / ק"ג) על ידי הזרקה תוך ורידית שולי האוזן.
<ol><li>לקבוע את נקודות הטיפול.<ol><li>לגלח את הפרווה של מפרק הברך של הגפה האחורית השמאלית של הארנב.</li>
		<li>מישוש החדרת גיד שריר הירך המדיאלי של מפרק ברך הארנבת, החדרת גיד הירך הרקטוס, החדרת גיד שריר הירך הזרועי ובורסה של גוספוט. סמן חוסר משך פתולוגי של שרירים מקומיים עם סמן עור סטרילי. יש לחטא את מפרק הברך שלוש פעמים בסיבובים מתחלפים של יודופור רפואי ו-75% אלכוהול רפואי.</li>
	</ol></li>
	<li>ניתוח אקופוטומיה<ol><li>שמור על להב האקופוטומיה מקביל לכיוון התנועה במקביל לגיד ולציר האורך של הגפה.</li>
		<li>השתמש באגודל של יד שמאל כדי ללחוץ כלפי מטה על העור הנכנס לנקודת הסמן ולנוע לרוחב כך שכלי הדם והעצבים מופרדים בצד הגחוני של האגודל.</li>
		<li>עם ידית האקופוטומיה ביד ימין, לחץ במהירות כלפי מטה בכוח קטן, כך שלהב האקופוטומיה יעבור מיד דרך העור. מקדמים באיטיות את להב האקופוטומיה לשריר המקומי ומבצעים חתכים אורכיים ותנודות לרוחב.</li>
		<li>לאחר סיום ניתוח האקופוטומיה, יש לחטא שוב את מפרק הברך ולמרוח פלסטר.</li>
	</ol></li>
	<li>בצעו את הפעולה הזו פעם בשבוע במשך 4 שבועות (איור 2). הערה: 1) אם אין רקמה דמוית חוט או רקמה דמוית חוט שנגעו בהחדרת הגיד של ה- vastus medialis, vastus lateralis, rectus femoris, biceps femoris או הבורסה האנסרין, יש להשתמש במחט האקופוטומיה כדי לשחרר את החדרות הגידים שלהם ישירות. 2) במהלך התערבות אקופוטומיה, אין לשתק את הגפיים האחוריות השמאליות של ארנבים בקבוצת האקופוטומיה ובקבוצת המודל במצב הרחבה.</li>
</ol>3. מודולוס אלסטי של שריר הירך הארבע ראשי
הערה: 1) ניסוי זה השתמש במכשיר אבחון אולטרסאונד גל גזירה בזמן אמת (SWE) כדי למדוד את המודולוס האלסטי של שריר הירך הארבע ראשי in vivo בכל קבוצת ארנבים. 2) הבודק צריך להיות סונוגרף מנוסה בזיהוי אולטרסאונד. בעת המדידה, בדיקת האולטרסאונד צריכה להיות ממוקמת בעדינות על פני העור של הארבע ראשי כדי למנוע מתח שרירים מקומי. יש לבצע מדידות כאשר בעל החיים נמצא במצב שקט, ללא מאבק או פעילות. אם בעל החיים פעיל, המתן עד שיהיה רגוע לפני ביצוע הבדיקה.
<ol><li>יש לגלח את הפרווה כדי לחשוף את העור באזור הארבע ראשי של הגפה האחורית השמאלית.</li>
	<li>השתמש באולטרסאונד דו-ממדי קונבנציונלי כדי לאתר את שרירי הבטן הארבע ראשיים ולקבוע את אזור העניין (ROI), המוגדר לעומק של 1-2 ס"מ.</li>
	<li>הפעל את מצב SWE לבדיקה.<ol><li>הגדר את אזור העניין באופן אחיד לאזור עגול בקוטר של 2 מ"מ ואת אזור העניין לעומק ~ 0.5-1 ס"מ מפני העור.</li>
		<li>השתמש במכשיר האבחון העל-קולי כדי ליצור דחף כוח קרינה אקוסטי כדי לעורר את רקמת השריר ולקבל אלסטוגרפיה של רקמות.</li>
		<li>המתן 2-3 שניות עד שהתמונה תתייצב ולאחר מכן הקפיא את התמונה. הפעל את פונקציית Q-BOX של המכשיר כדי למדוד את המודולוס של יאנג של שריר הארבע ראשי.</li>
		<li>המתן עד שהמערכת תחשב באופן אוטומטי את הערכים המרביים, המינימליים והממוצעים (יחידה: KPa) של מודולוס החזר ההשקעה של יאנג. בחר שלושה ROI באותו עומק עבור שלוש מדידות וקח את הערך הממוצע לניתוח סטטיסטי. הערה: הבודק צריך להיות סונוגרף מנוסה בזיהוי אולטרסאונד. בעת המדידה, בדיקת האולטרסאונד צריכה להיות ממוקמת בעדינות על פני העור של הארבע ראשי כדי למנוע מתח שרירים מקומי. יש לבצע מדידות כאשר בעל החיים נמצא במצב שקט, ללא מאבק או פעילות. אם בעל החיים פעיל, המתן עד שיהיה רגוע לפני ביצוע הבדיקה.</li>
	</ol></li>
</ol>4. מדידת כוח ההתכווצות של שריר הירך הארבע ראשי
הערה: לאחר מדידת כוח ההתכווצות של שריר הירך הארבע ראשי, הארנבים הומתו על ידי תסחיף אוויר בהרדמה.
<ol><li>מרדימים את הארנבים עם 3% נתרן pentobarbital (30 מ"ג / ק"ג) תוך ורידי בשולי האוזן. כדי לאשר כי רמת ההרדמה המתאימה הושגה, לחפש רפלקס הקרנית נחלש באופן משמעותי או נעדר ואת היעדר הכאב על הידוק העור עם מלקחיים המוסטטיים. במהלך ההרדמה, הוסיפו 2-3 טיפות של חומר סיכה לעיני הארנבים כל 15 דקות כדי למנוע מעיני הארנבים להתייבש.</li>
	<li>חושפים את שרירי הארבע ראשי ומחברים את מתמר המתח.<ol><li>חותכים את העור מתחת לפטלה, לאורך ציר האורך של האיבר כלפי מעלה לבסיס הירך, וממשיכים לחתוך את העור כלפי מעלה ב 3-4 ס"מ. מקלפים בזהירות את העור ואת הפאשיה, וחושפים את השריר. חותכים את הרצועה הפטלרית ומפרידים בזהירות את הארבע ראשי מצומת האיליאק, תוך שמירה על הארבע ראשי בקשר עם האיליאציום.</li>
		<li>לקשור את התפרים הכירורגיים בצומת הגידים בין הפטלה לשריר הארבע ראשי. מתחו את השריר לכל אורכו במצבו הטבעי ולאחר מכן חברו אותו למתמר המתח. שמור על קו הקשירה על השריר בקו ישר עם קו הקשירה על מתמר הכוח.</li>
		<li>הצמידו את מתמר המתח לתושבת. חבר את קו קליטת האות במתמר המתח למעבד מערכת רכישת האותות הביולוגיים.</li>
	</ol></li>
	<li>למדוד את הביצועים התכווצות של שריר הארבע ראשי.<ol><li>הכנס את האלקטרודות במקביל לבטן הארבע ראשי והימנע מכל מגע בין האלקטרודות.</li>
		<li>לחץ על לחצן האוסילוסקופ. התאם את מיקום מתמר הכוח על התושבת כדי לשמור על קו הבסיס באפס. בחר את פרמטרי הגירוי של הממריץ עם רוחב גל של 5 אלפיות השנייה והשהיה של 10 אלפיות השנייה.</li>
		<li>השתמש תחילה בגירוי יחיד והתאם בהדרגה את עוצמת הגירוי מאפס עם תוספת של 0.1 V בכל פעם. שימו לב לשינויים בעקומת התכווצות השרירים ובמשרעת ההתכווצות עד לקביעת משרעת הכיווץ היחידה המקסימלית (Pt) של הארבע ראשי. רשום אותו לסטטיסטיקה הבאה.</li>
		<li>השתמש בגירוי אשכול, והשתמש באמפליטודת הגירוי המשרה את משרעת הכיווץ היחידה המקסימלית כקו הבסיס כדי לגרות ברציפות את השריר ולהגדיל בהדרגה את תדירות הגירוי. שימו לב לשינויים בעקומת התכווצות השרירים עד לקביעת משרעת ההתכווצות המרבית (Pt) של הארבע ראשי. רשום אותו לסטטיסטיקה הבאה. הערה: 1) לאחר כל כיווץ שריר, יש לתת לשריר 30 שניות להרפיה כאשר תמיסת חיץ השרירים מטפטפת ברציפות על השריר. 2) במהלך הניתוח, יש לשפוט את מצב ההרדמה על ידי ניטור רפלקס העפעפיים של הארנבים, קצב הנשימה, הרפיית השרירים ותגובת צביטת העור.</li>
	</ol></li>
</ol>5. הביצועים המכניים של גיד הארבע ראשי
<ol><li>עיבוד מקדים: ביום הבדיקה מדדו את האורך, הרוחב והעובי של גיד הארבע ראשי בעזרת קליפר ורנייר, והתקינו מהדק מיוחד נגד החלקה במכונת בדיקת העייפות. חזור על טעינה ופריקה 15x לעיבוד מראש.</li>
	<li>מבחן הרפיית מתחים: השתמש בחיישן בטווח שבין 0 N ל- 100 N, מתח אותו במהירות של 5 מ"מ/דקה עד שהוא מגיע לאורך הנדרש, ולאחר מכן התחל לאסוף נתונים. הגדר את זמן איסוף נתוני המחשב מ - t (0), איסוף נתונים כל 0.1 שניות, למשך 1,800 שניות. לאחר ההגעה לזמן שנקבע, רשום נתונים ועקומות.</li>
	<li>בדיקת מתיחה: השתמש בחיישן בטווח שבין 0 N ל- 100 N ומתח אותו במהירות של 5 מ"מ/דקה לעומס המרבי עד לפירוק הדגימה. לאחר הבדיקה, חשב את התזוזה המקסימלית, העומס הסופי והקשיחות של הדגימה.</li>
</ol>6. לחץ משטח מגע מפרק ולחץ ליחידת שטח של הסחוס
<ol><li>מקבעים את דגימות עצם הירך והטיביה משני הצדדים במצב ישר על גוף התאורה ומבצעים בדיקת טעינה מראש. מדדו את הטווח המשוער של מפרק הברך, חתכו את הנייר הרגיש ללחץ לאותה צורה ואטמו אותו בניילון נצמד.</li>
	<li>מניחים את הנייר הרגיש ללחץ האטום בין מפרק השוקה למפרק הירך, ומבצעים בדיקת לחץ על מפרק הברך בלחץ של 5 מ"מ לדקה ולחץ מקסימלי של 50 N. שמור על הלחץ במשך 2 דקות עד שהוא מגיע 50 N כאשר הנייר רגיש ללחץ הוא צבע יציב.</li>
	<li>לאחר 2 דקות, הסר את הנייר הרגיש ללחץ, קבע את המשטח הצבעוני על גיליון נייר בגודל A4 וקבל תמונות כשקנה המידה מונח בצד.</li>
	<li>העלה את התמונה למחשב. השתמש בתוכנה המוזכרת למדידת שטח ולמדידה מרובת מקטעים עבור מספרים לא סדירים. למדוד את הלחץ על החלק הפנימי והחיצוני של המפרקים של עצם הירך והשוקה, ולרשום את התוצאות.</li>
</ol>7. ספרנין O/Fast כתמים ירוקים של סחוס מפרק הברך
<ol><li>לאחר סיום ההתערבות באקופוטומיה, קחו את רקמות מורכבות העצם הסחוסית-סובכונדרלית והטמיעו אותן בפרפין. פורסים את קוביות השעווה של הרקמה המוכנה ומכינים שקופיות. נטרל את שקופיות הרקמה המוכנות באמצעות תמיסת שעווה סביבתית (I) ותמיסת שעווה סביבתית (II) למשך 15 דקות כל אחת; לאחר מכן, טבלו אותם ברצף בקסילן ובאתנול נטול מים (1:1), אתנול נטול מים (I), 95% אתנול, 85% אתנול ו-75% אתנול, 2-5 דקות כל צעד; ולבסוף, להשרות אותם במים מזוקקים במשך 15 דקות.</li>
	<li>בצע צביעה.<ol><li>הכתימו את המגלשות בתמיסה ירוקה מהירה למשך דקה. בתהליך זה, הוציאו את המגלשות מהתמיסה והתבוננו בהן תחת המיקרוסקופ עד שהרקמה מוכתמת בירוק כהה.</li>
		<li>הפרדת צבעים: יש לשטוף את עודפי התמיסה Fast Green במים טהורים במיוחד. השרו את המגלשות במהירות בתמיסת חומצה אצטית 1% למשך 5 - 10 שניות.  שוב, שטפו את המגלשה במים טהורים במיוחד.</li>
		<li>מכתימים את המגלשות בתמיסת ספרנין O למשך 10-15 דקות עד שהסחוס מוכתם באדום.</li>
	</ol></li>
	<li>יש לייבש ולהבהיר את הרקמה, לאטום את מגלשות הזכוכית ולהתבונן בהן תחת המיקרוסקופ.<ol><li>השרו את המגלשות ב-75% אתנול, 85% אתנול, 95% אתנול ו-100% אתנול למשך 3-5 שניות ברציפות.</li>
		<li>טבלו את המגלשות בתמיסת שעווה סביבתית (I) ובתמיסת הסרת שעווה סביבתית (II) במשך 10 דקות ברציפות. הוציאו את המגלשות ושחררו את מדיום השרף הניטרלי על חזית המגלשות, תוך הימנעות מהרקמה. הניחו את קצה זכוכית הכיסוי על המגלשה ולאחר מכן, הניחו אותה לאט כדי לכסות את הבלסם הניטרלי. הוציאו את האוויר והימנעו מבועות אוויר. נגבו את הקסילן הנוסף ואת הבלסם הניטרלי, והניחו לו לעמוד למשך הלילה בטמפרטורת החדר.</li>
		<li>התבונן בשקופיות מתחת למיקרוסקופ וקבל תמונות. עבור כל קבוצה, בחר שש דגימות של סחוס ברך ארנב ובחר באופן אקראי ארבעה שדות צפייה שונים עבור כל דגימה לצורך הערכה. ציון היסטולוגיה הסחוסית של כל קבוצה על פי שיטת מנקין (טבלה 1).</li>
	</ol></li>
</ol>8. ניתוח סטטיסטי
<ol><li>נתונים מהירים כממוצע ± סטיית תקן (<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65584/65584eq01.jpg" style="margin: auto;"> ± s).</li>
	<li>ביצוע ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) ומבחן LSD לקביעת המובהקות הסטטיסטית של השוואות קבוצתיות מרובות.</li>
	<li>שקול הבדלים מובהקים סטטיסטית כאשר P < 0.05.</li>
</ol>

הקמת מודל KOA בארנבים בשיטת וידמן שונה

<ol>
	<li>Roseti, L., Desando, G., Cavallo, C., Petretta, M., Grigolo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Articular+cartilage+regeneration+in+osteoarthritis.">Articular cartilage regeneration in osteoarthritis.</a> Cells. 8 (11), 1305 (2019).</li><li>Cui, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional+prevalence,+incidence+and+risk+factors+of+knee+osteoarthritis+in+population-based+studies.">Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies.</a> EClinicalMedicine. 29-30, 100587 (2020).</li><li>Miyauchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alleviation+of+murine+osteoarthritis+by+deletion+of+the+focal+adhesion+mechanosensitive+adapter,+Hic-5.">Alleviation of murine osteoarthritis by deletion of the focal adhesion mechanosensitive adapter, Hic-5.</a> Sci Rep. 9 (1), 15770 (2019).</li><li>Wright, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomechanical+factors+in+osteoarthritis:+the+effects+of+joint+instability.">Biomechanical factors in osteoarthritis: the effects of joint instability.</a> HSS J. 8 (1), 15-17 (2012).</li><li>Patsika, G., Kellis, E., Kofotolis, N., Salonikidis, K., Amiridis, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergetic+and+antagonist+muscle+strength+and+activity+in+women+with+knee+osteoarthritis.">Synergetic and antagonist muscle strength and activity in women with knee osteoarthritis.</a> J Geriatr Phys Ther. 37 (1), 17-23 (2014).</li><li>Blalock, D., Miller, A., Tilley, M., Wang, J. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Joint+instability+and+osteoarthritis.">Joint instability and osteoarthritis.</a> Clin Med Insights. Arthritis and Musculoskelet Disord. 8, 15-23 (2015).</li><li>Henriksen, M., Christensen, R., Danneskiold-Sams&#248;e, B., Bliddal, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+lower+extremity+muscle+mass+and+muscle+strength+after+weight+loss+in+obese+patients+with+knee+osteoarthritis:+a+prospective+cohort+study.">Changes in lower extremity muscle mass and muscle strength after weight loss in obese patients with knee osteoarthritis: a prospective cohort study.</a> Arthritis Rheum. 64 (2), 438-442 (2012).</li><li>Schwartz, A. G., Lipner, J. H., Pasteris, J. D., Genin, G. M., Thomopoulos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+loading+is+necessary+for+the+formation+of+a+functional+tendon+enthesis.">Muscle loading is necessary for the formation of a functional tendon enthesis.</a> Bone. 55 (1), 44-51 (2013).</li><li>Felson, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis+as+a+disease+of+mechanics.">Osteoarthritis as a disease of mechanics.</a> Osteoarthr Cartil. 21 (1), 10-15 (2013).</li><li>Ma, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+acupotomy+on+FAK-PI3K+signaling+pathways+in+KOA+rabbit+articular+cartilages.">Effect of acupotomy on FAK-PI3K signaling pathways in KOA rabbit articular cartilages.</a> Evid Based Complement Alternat Med. 2017, 4535326 (2017).</li><li>Yu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+experimental+animal+models+of+knee+osteoarthritis.">Research progress of experimental animal models of knee osteoarthritis.</a> China Medical Herald. 16 (27), 41-44 (2019).</li><li>Li, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Research+progress+of+rabbit+knee+osteoarthritis+model.">Research progress of rabbit knee osteoarthritis model.</a> Journal of Jiangxi University of Chinese Medicine. 31 (4), 108-113 (2019).</li><li>Zhang, W., Gao, Y., Guo, C. Q., Khattab, I. Z. A., Mokhtari, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+acupotomy+versus+electroacupuncture+on+ethology+and+morphology+in+a+rabbit+model+of+knee+osteoarthritis.">Effect of acupotomy versus electroacupuncture on ethology and morphology in a rabbit model of knee osteoarthritis.</a> J Tradit Chin Med. 39 (2), 229-236 (2019).</li><li>An, X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chondroprotective+effects+of+combination+therapy+of+acupotomy+and+human+adipose+mesenchymal+stem+cells+in+knee+osteoarthritis+rabbits+via+the+GSK3+beta-cyclin+D1-CDK4/CDK6+signaling+pathway.">Chondroprotective effects of combination therapy of acupotomy and human adipose mesenchymal stem cells in knee osteoarthritis rabbits via the GSK3 beta-cyclin D1-CDK4/CDK6 signaling pathway.</a> Aging Dis. 11 (5), 1116-1132 (2020).</li><li>Guo, C. Q., Liu, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+on+the+distribution+features+of+Ashi+points+in+Jingjin+disorders.">Analysis on the distribution features of Ashi points in Jingjin disorders.</a> Journal of Basic Chinese Medicine. 17 (8), 899-900 (2011).</li><li>Guo, C. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acupotomy+therapy+on+tenderness+point+around+knee+joint+in+patients+with+knee+osteoarthritis:+a+randomized+controlled+clinical+trial.">Effects of acupotomy therapy on tenderness point around knee joint in patients with knee osteoarthritis: a randomized controlled clinical trial.</a> Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 33 (3), 3-5 (2010).</li><li>Zhao, Y., Dong, F. H., Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+soft+tissues+mechanical+changes+and+treatment+of+meridian+tendon+pain.">Analysis of soft tissues mechanical changes and treatment of meridian tendon pain.</a> Beijing Journal of Traditional Chinese Medicine. (9), 705-707 (2008).</li><li>Zhang, L. P., Cheng, F., Liu, D. Y., Zhu, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+progress+of+biomechanics+in+knee+osteoarthritis.">Application progress of biomechanics in knee osteoarthritis.</a> Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 34 (7), 1644-1647 (2016).</li><li>Thomas, A. C., Sowers, M., Karvonen-Gutierrez, C., Palmieri-Smith, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+quadriceps+dysfunction+in+women+with+early+knee+osteoarthritis.">Lack of quadriceps dysfunction in women with early knee osteoarthritis.</a> J Orthop Res. 28 (5), 595-599 (2010).</li><li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+unloaded+muscle+atrophy+on+contractile+characteristics+of+hind-limb+skeletal+muscles+in+mice.">Effects of unloaded muscle atrophy on contractile characteristics of hind-limb skeletal muscles in mice.</a> Space Med Med Eng. 25 (5), 322-325 (2012).</li></ol>

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

מודל מתאים לבעלי חיים הוא אחד הגורמים המרכזיים להשגת מטרות ניסוי ולהבהרת שאלה מדעית ספציפית. מחקר זה התבסס על התיאוריות של "Zongjin שליטה בעצמות ובמפרקים סיכה" ו"חוסר איזון מכני" באקופוטומולוגיה, במטרה להסביר את הקונוטציה המדעית מאחורי הטיפול ב- KOA על ידי "ויסות שרירים וגידים לטיפול בהפרעות עצ...

דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA) היא הצורה השכיחה ביותר של דלקת מפרקים ניוונית, המוכרת לעתים קרובות כמחלת מפרקים שלמים המאופיינת בניוון סחוס מפרקי, המתבטאת קלינית בכאב, נפיחות ותנועה מוגבלת של המפרקים הפגועים1. על פי נתונים אפידמיולוגיים עדכניים, KOA דווח כי השפיע על 654.1 מיליון אנשים ברחבי העולם שהיו בני 40 ומעלה עד 2020. השכיחות והשכיחות של KOA עולות עם הגיל, הן הגבוהות ביותר בקרב מבוגרים בגיל העמידה ומבוגרים, ומשפיעות על יותר נשים מאשר גברים2. השכיחות של KOA צפויה לעלות עקב הזדקנות האוכלוסייה ומגיפת ההשמנה ברחבי העולם, המהווה איום גובר על בריאות הציבור העולמית. גיל, מין, השמנת יתר, טראומה וגורמי סיכון מורכבים אחרים הקשורים ל- KOA משפיעים ישירות על חוסר יציבות הברך, מה שהופך חוסר איזון ביומכני במפרקי הברך לאחד הגורמים העיקריים ל- KOA3.
בתנאים פיזיולוגיים רגילים, מפרק הברך נמצא במצב של איזון מכני, המבטיח כי העומסים המכניים במפרק מפוזרים באופן שווה על הסחוס. כל חוסר איזון מכני במפרק הברך יכול להוביל ללחץ חריג בסחוס, וכתוצאה מכך לניוון סחוס ולהופעת KOA4. מערכת גיד השריר היא המערכת הדינמית העיקרית השומרת על האיזון המכני של מפרק הברך. התנועה המתואמת של מערכת המרחיב והמכופף שריר-גיד יכולה לפזר באופן שווה את העומס שנוצר על ידי התנועה על משטח הסחוס, ולהימנע מחוסר איזון מטבולי של לחצים סחוסיים מקומיים מעבר לעומס הפיזיולוגי שלו שגורם לאובדן סחוס5. ירידה בכוח השרירים היא הגורם העיקרי להפרעת תנועה תוך שרירית ולנזק לסחוס, שעלול להתרחש לפני KOA סימפטומטי. 
KOA יכול גם לגרום לעיכוב שרירים ארתרוגני (AMI), המתבטא בחולשת שרירים וירידה בכוח השרירים סביב הברך6. מבין שרירים אלה, קבוצת שרירי הירך הארבע ראשיים מתפקדת כמרחיב הברך היחיד, מבנה חשוב בשמירה על יציבות מפרקי הברך. מחקרים הראו כי ירידה בשטח החתך הארבע ראשי ובכוח השרירים נמצאת בקורלציה משמעותית וחיובית עם התקדמות KOA7. הירידה בכוח הארבע ראשי משפיעה על דפוס ההליכה, יציבות הברכיים, דפוסי התנועה ותפקודים רבים אחרים. יתר על כן, הירידה בכוח השרירים פוגעת בתפקוד הגידים, המתבטאת בירידה בנוקשות הגידים, במודולוס האלסטי ובתכונות ביומכניות נוספות8. בתיקון מאמץ ארוך טווח, שינויים כגון הידבקות והתכווצות עלולים להתרחש בשרירים ובגידים של מפרק הברך, לפגוע בתכונות המכניות שלהם, לגרום לחוסר יציבות במפרקים, ובסופו של דבר ליצור מעגל קסמים של שינויים פתולוגיים של KOA. לכן, חיוני לטיפול KOA לשפר את התכונות המכניות של מערכת השריר-גיד ולהחזיר את האיזון המכני של המפרק.
בין הגורמים ל-KOA, חוסר איזון ביומכני הוא הגורם העיקרי לכאבי ברכיים, תפקוד לקוי, נגעים דלקתיים וניוון סחוס9. לכן, המפתח לטיפול ב- KOA הוא להחזיר את האיזון הביומכני של מפרק הברך. אקופוטומולוגיה מאמינה כי האטיולוגיה והפתוגנזה של KOA הם "חוסר איזון מכני". כאשר המאפיינים המכניים של הרקמות הרכות סביב הברך משתנים באופן חריג, מפרק הברך מאבד את שיווי המשקל המכני שלו, וסביבת הלחץ המכנית החריגה של המפרק מאיצה את הניוון, מה שגורם לגירוי דלקתי להחמיר עוד יותר את הידבקויות הרקמות הרכות, ההתכווצויות וירידה נוספת ביציבות המפרקים. מעגל קסמים זה מתפתח בסופו של דבר ל-KOA. על ידי שחרור הידבקויות והתכווצויות של רקמות רכות, כמו גם הפחתת ריכוז המאמץ בשרירים ובגידים, אקופוטומיה בשילוב עם התיאוריה של "ויסות שרירים וגידים לטיפול בהפרעות עצם" משפרת את מכניקת הרקמות הרכות ו"מווסתת שרירים וגידים", המאזנת את הלחץ המכני של המפרק, מקלה ביעילות על ניוון הסחוס ו"מטפלת בהפרעות עצם"10. במונחים של בחירת מודלים של בעלי חיים, בהתבסס על מטרת מחקר זה, הכנו את מודל KOA על ידי שיטת וידמן שונה של אימוביליזציה של הרחבת גפיים אחוריות שמאליות.
מאמר זה מפרט את ביסוס מודל KOA תוך שימוש בשיטת וידמן המותאמת של אימוביליזציה של הארכת גפיים אחוריות שמאליות ושיטת הפעולה ואמצעי הזהירות של אקופוטומיה. אנו מדגימים את יעילות האקופוטומיה על ידי בדיקת התכונות המכניות של שריר הירך הארבע ראשי והגיד ואיתור שינויים בסחוס המפרקי, מתח ומורפולוגיה.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acupotomy</td>
			<td>Beijing Zhuoyue Huayou Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td>0.4 x 40 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Connect Cast Orthopedic Casting Tape</td>
			<td>Suzhou Connect Medical Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>KCP06</td>
			<td>15.0 cm x 360 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided Foam Tape</td>
			<td>Deli Group Co.,Ltd.</td>
			<td>NO.30416</td>
			<td>36 mm x 5 yard x 2.5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Environmental Dewaxing Solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolute</td>
			<td>Beijing Hengkangda Medicine Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast Green solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast grenn FCF</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>2353-45-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fatigue testing machine</td>
			<td>BOSE, America</td>
			<td></td>
			<td>Bose Electro Force 3300</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four-channel physiological recorder</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>RM-6420</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-305E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FPD-306E</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical iodophor disinfectant</td>
			<td>Shan Dong Lircon Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Tape</td>
			<td>Shandong Rongjian Sanitary Products Co., Ltd.</td>
			<td>200402</td>
			<td>1.5 x 500 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Muscle tension transducer&#160;</td>
			<td>Chengdu Instrumeny Frctory</td>
			<td></td>
			<td>JH-2204005, 50 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prescale</td>
			<td>Fuji, Japan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Real-time SWE ultrasound diagnostic instrument</td>
			<td>SuperSonic Imagine SA,France</td>
			<td></td>
			<td>SuperSonic Imagine AixPlorer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rhamsan gum</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>WG10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O</td>
			<td>Sigma,America</td>
			<td>477-73-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safranine O solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio Technology Co.,Ltd.</td>
			<td>G1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistical Package for the Social Sciences (SPSS)</td>
			<td>IBM, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of acupotomy in a knee osteoarthritis model in rabbit

דלקת מפרקים ניוונית בברך (KOA) היא אחת המחלות הנפוצות ביותר במחלקה האורתופדית, אשר מפחיתה באופן משמעותי את איכות החיים של אנשים עם KOA. בין מספר גורמים פתוגניים, חוסר האיזון הביומכני של מפרק הברך הוא אחד הגורמים העיקריים ל- KOA. אקופוטומולוגיה מאמינה כי החזרת האיזון המכני של מפרק הברך היא המפתח לטיפול ב- KOA. מחקרים קליניים הראו כי אקופוטומיה יכולה להפחית ביעילות את הכאב ולשפר את תנועתיות הברך על ידי הפחתת הידבקות, התכווצות של רקמות רכות ונקודות ריכוז מתח בשרירים ובגידים סביב מפרק הברך. 
בפרוטוקול זה, השתמשנו בשיטת וידמן המתוקנת כדי לבסס מודל KOA על ידי השתקת הגפה האחורית השמאלית במצב ישר. תיארנו בפירוט את שיטת הפעולה ואת אמצעי הזהירות הקשורים לאקופוטומיה והערכנו את יעילות האקופוטומיה בשילוב עם התיאוריה של "אפנון שרירים וגידים לטיפול בהפרעות עצם" באמצעות זיהוי התכונות המכניות של שריר הירך הארבע ראשי והגיד, כמו גם מכניקת סחוס ומורפולוגיה. התוצאות מראות כי לאקופוטומיה יש השפעה מגנה על הסחוס על ידי התאמת התכונות המכניות של הרקמות הרכות סביב מפרק הברך, שיפור סביבת הלחץ של הסחוס ועיכוב ניוון הסחוס.

Knee osteoarthritis (KOA) is the most frequent form of osteoarthritis, often recognized as a whole-joint disease characterized by articular cartilage degeneration, which manifests clinically as pain, swelling, and limited movement of the affected joints1. According to recent epidemiological statistics, KOA is reported to have affected 654.1 million individuals globally who were 40 years of age or older by 2020. The prevalence and incidence of KOA rise with age, are the highest in middle-aged and older adults, and affect more women than men2. The prevalence of KOA is likely to increase due to the aging population and obesity epidemic worldwide, posing a growing threat to global public health. Age, sex, obesity, trauma, and other complicated risk factors associated with KOA all directly impact knee instability, making a biomechanical imbalance in knee joints one of the primary causes of KOA3.
Under normal physiological conditions, the knee joint is in a state of mechanical balance, ensuring that the mechanical loads in the joint are evenly distributed on the cartilage. Any mechanical imbalance in the knee joint can lead to abnormal stress in cartilage, resulting in cartilage degeneration and the onset of KOA4. The muscle-tendon system is the main dynamic system that maintains the mechanical balance of the knee joint. The coordinated movement of the extensor and flexor muscle-tendon system can evenly distribute the load generated by the movement on the cartilage surface, avoiding the metabolic imbalance of local cartilage stresses beyond its physiological load that results in cartilage loss5. Decreased muscle strength is the main cause of intramuscular movement disorder and cartilage damage, which may occur before symptomatic KOA. 
KOA can also induce arthrogenous muscle inhibition (AMI), manifesting as muscle weakness and decreased muscle strength around the knee6. Among these muscles, the quadriceps femoris group functions as the only knee extensor, an important structure in maintaining knee joint stability. Studies have shown that a decrease in quadriceps cross-sectional area and muscle strength is significantly and positively correlated with KOA progression7. The decline in quadriceps strength affects the gait pattern, knee stability, movement patterns, and many other functions. Moreover, the decline in muscle strength impairs tendon function, manifested as a decrease in tendon stiffness, elastic modulus, and other biomechanical properties8. In long-term strain repair, changes such as adhesion and contracture may occur in the muscles and tendons of the knee joint, damaging their mechanical properties, causing joint instability, and ultimately forming a vicious cycle of pathological changes of KOA. It is, therefore, crucial for KOA treatment to improve the mechanical properties of the muscle-tendon system and restore the joint mechanical balance.
Among the causes of KOA, biomechanical imbalance is the main inducing factor for knee pain, dysfunction, inflammatory lesions, and cartilage degeneration9. Therefore, the key to treating KOA is to restore the biomechanical balance of the knee joint. Acupotomology believes that the etiology and pathogenesis of KOA are "mechanical imbalance." When the mechanical characteristics of the soft tissues around the knee change abnormally, the knee joint loses its mechanical balance, and the abnormal mechanical stress environment of the joint accelerates degeneration, causing inflammatory stimulation to further aggravate the soft tissue adhesions, contractures, and further decline in joint stability. This vicious cycle eventually develops into KOA. By loosening soft tissue adhesions and contractures, as well as reducing stress concentration in the muscles and tendons, acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" improves the soft tissue mechanics and "modulates muscles and tendons," which balances the mechanical stress of the joint, effectively alleviating cartilage degeneration and "treating bone disorders"10. In terms of animal model selection, based on the purpose of this study, we prepared the KOA model by the modified Videman method of left hindlimb extension immobilization.
This paper details the establishment of the KOA model using the modified Videman method of left hind limb extension immobilization and the method of operation and precautions of acupotomy. We demonstrate the effectiveness of acupotomy by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and detecting changes in articular cartilage stress and morphology.

מחבר זרקור: חקירת מנגנון הפעולה של אקופוטומיה בטיפול בדלקת מפרקים ניוונית בברך

יישום של אקופוטומיה במודל אוסטיאוארתריטיס ברך בארנב

Our research scope is the study of the mechanism of action of acupotomy in the treatment of new osteoarthritis. The question we want to answer, the how acupotomy regulates the mechanical properties of the soft tissues around the knee to protect the cartilage. At present, micro CT, nuclear magnetic resonance, phenetole elemental analysis, and bio mechanical detection techniques can be used to promote research in this field.We found that acupotomy improved the mechanical properties of soft tissue by removing the excisions and pathological contractors around the knee, thereby playing a role in protecting cartilage. To a certain extent, this protocol explains the mechanism and reveals the scientific connotation of acupotomy in the treatment of KOA and fills the gap in the basic research of acupotomy tendon and bone treatment method. In the future, our laboratory will focus on the specific mechanism or action of the acupotomy tendon and bone control method on cartilage protection.

תוצאות ניסוי של תכונות מכניות של שריר הירך הארבע ראשי והגיד כדי להעריך את ההשפעה של אקופוטומולוגיה על התכונות המכניות של שריר הירך הארבע ראשי בארנבים עם KOA, השתמשנו בזמן אמת בהדמיית אולטרסאונד אלסטית של גל גזירה ומתמר מתח שרירים, בהתאמה. בהשוואה לקבוצת הביקורת, המודולוס של יאנג ...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Investigating the Mechanism of Action of Acupotomy in Treating Knee Osteoarthritis at JoVE.com

בפרוטוקול זה הוכן מודל אוסטיאוארתריטיס בברך בשיטת וידמן המתוקנת, ומפורטים נהלי הניתוח ואמצעי הזהירות של אקופוטומיה. יעילות האקופוטומיה הוכחה על ידי בדיקת התכונות המכניות של שריר הירך הארבע ראשי והגיד והתכונות המכניות והמורפולוגיות של הסחוס.

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of ...

היקף המחקר שלנו הוא חקר מנגנון הפעולה של אקופוטומיה בטיפול בדלקת מפרקים ניוונית חדשה. השאלה שאנו רוצים לענות עליה, כיצד אקופוטומיה מווסתת את התכונות המכניות של הרקמות הרכות סביב הברך כדי להגן על הסחוס. כיום, מיקרו CT, תהודה מגנטית גרעינית, ניתוח יסודות phenetole, וטכניקות זיהוי ביו מכני ניתן להשתמש כדי לקדם את המחקר בתחום זה.מצאנו כי אקופוטומיה שיפרה את התכונות המכניות של הרקמה הרכה על ידי הסרת הכריתות והקבלנים הפתולוגיים סביב הברך, ובכך שיחקה תפקיד בהגנה על הסחוס. במידה מסוימת, פרוטוקול זה מסביר את המנגנון וחושף את הקונוטציה המדעית של אקופוטומיה בטיפול ב- KOA וממלא את הפער במחקר הבסיסי של שיטת הטיפול בגיד ובעצם. בעתיד, המעבדה שלנו תתמקד במנגנון או הפעולה הספציפיים של שיטת בקרת הגיד והעצם על הגנת הסחוס.

application-of-acupotomy-in-a-knee-osteoarthritis-model-in-rabbit

Research

JoVE Journal

Medicine

Application of Acupotomy in a Knee Osteoarthritis Model in Rabbit

687 Views.  Beijing University of Chinese Medicine. היקף המחקר שלנו הוא חקר מנגנון הפעולה של אקופוטומיה בטיפול בדלקת מפרקים ניוונית חדשה. השאלה שאנו רוצים לענות עליה, כיצד אקופוטומיה מווסתת את התכונות המכניות של הרקמות הרכות סביב הברך כדי להגן על הסחוס. כיום, מיקרו CT, תהודה מגנטית גרעינית, ניתוח יסודות phenetole, וטכניקות זיהוי ב...

Video: מחבר זרקור: חקירת מנגנון הפעולה של אקופוטומיה בטיפול בדלקת מפרקים ניוונית בברך

Knee osteoarthritis (KOA) is one of the most frequently encountered diseases in the orthopedic department, which seriously reduces the quality of life of people with KOA. Among several pathogenic factors, the biomechanical imbalance of the knee joint is one of the main causes of KOA. Acupotomology believes that restoring the mechanical balance of the knee joint is the key to treating KOA. Clinical studies have shown that acupotomy can effectively reduce pain and improve knee mobility by reducing adhesion, contracture of soft tissues, and stress concentration points in muscles and tendons around the knee joint. 
In this protocol, we used the modified Videman method to establish a KOA model by immobilizing the left hindlimb in a straight position. We have outlined the method of operation and the precautions related to acupotomy in detail and evaluated the efficacy of acupotomy in conjunction with the theory of "Modulating Muscles and Tendons to Treat Bone Disorders" through the detection of the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon, as well as cartilage mechanics and morphology. The results show that acupotomy has a protective effect on cartilage by adjusting the mechanical properties of the soft tissues around the knee joint, improving the cartilage stress environment, and delaying cartilage degeneration.

In this protocol, a knee osteoarthritis model was prepared using the modified Videman method, and the operation procedures and precautions of acupotomy are detailed. The effectiveness of acupotomy has been demonstrated by testing the mechanical properties of quadriceps femoris and tendon and the mechanical and morphological properties of cartilage.

Establishing the Knee Osteoarthritis Rabbit Model and Applying Acupotomy for Modulating Muscles and Tendons

To begin, fix the anesthetized rabbit in a supine position. Then, pull and fix the left hind limb in the fully extended position. Using medical tape as the first layer, cover the skin from the groin to the ankle joint.For the second layer, wrap 36 millimeter-wide double-sided foam tape over the medical tape. Then, wrap a polymer bandage from the groin to the ankle joint. Ensure the knee joint is 180 degrees straight, and the ankle joint is dorsiflexed by 60 degrees.For the third layer, immobilize the joints with small splints at the front and back of the knee and ankle joints. Then, wrap steel mesh around the outermost layer to protect against bites. Ensure to keep toes exposed, to observe blood circulation.To determine points of acupotomy treatment, palpate and mark pathological indurations of knee joints with a sterile skin marker. Then, disinfect the knee joint three times with alternating rounds of iodophor and 75%ethanol. Now align an acuoptomy blade parallel to the travel direction of the tendon and the longitudinal axis of the limb.Using the left thumb, press down on the skin at the marker point, then shift laterally to facilitate the separation of blood vessels and nerves on the thumb's ventral side. With the acupotomy handle in the right hand, apply a quick gentle pressure, causing the acupotomy blade to penetrate the skin. Slowly advance the blade to muscle induration, making longitudinal cuts and swinging laterally.After acupotomy, disinfect the knee joint using iodophor and apply a bandaid.

ביסוס מודל ארנב אוסטיאוארתריטיס בברך ויישום אקופוטומיה לוויסות שרירים וגידים

Measuring Mechanical Properties of Quadriceps Femoris Contraction Force in Rabbits

To begin, cut the skin of an anesthetized rabbit below the patella, following the length of the limb upwards to the thigh base, then continue upwards for three to four centimeters. Carefully peel off the skin and fascia, exposing the quadriceps muscle. Cut the patellar ligament and carefully separate the quadriceps from the iliac junction, while maintaining the quadriceps in connection with the ilicium.Now ligate the surgical sutures at the tendon junction between the patella and quadriceps muscle. Stretch the muscle to its full length in its natural state and attach it to the tension transducer, aligning the ligation line on the muscle with that on the transducer. Secure the tension transducer to the bracket.Connect the signal acquisition line on the transducer to the bio signal acquisition system processor. Insert the electrodes parallel to the quadriceps abdomen, avoiding contact between the electrodes. Next, press the oscilloscope button.Adjust the position of the force transducer on the bracket to maintain the baseline at zero. At this stage, set the stimulator stimulation parameters with a single stimulus, a wave width of five milliseconds and a delay of 10 milliseconds. Set the initial value of the stimulus amplitude to zero volt and set the automatic amplitude to increase by 0.1 volt each time, to gradually increase the stimulus intensity.Then start the stimulation while observing the changes in the muscle contractions curve and contraction amplitude, until the maximum signal twitch amplitude of the quadriceps is determined. Next, use a cluster stimulus and set the stimulus amplitude, causing a maximum single twitch as the baseline to continuously stimulate the muscle. Set the initial value of the stimulation frequency to 10 hertz, and set the automatic frequency to increase by one hertz each time to gradually increase the stimulus frequency.Finally, start the stimulation while observing the changes in the muscle contraction curve until the maximum tetanic contraction amplitude of the quadriceps is determined. Young's modulus, single contraction amplitude, and tetanic contraction amplitude of the quadriceps femoris were significantly reduced in knee osteoarthritis group compared to the control and Acupotomy group.

מדידת תכונות מכניות של כוח התכווצות שריר הירך הארבע ראשי בארנבים

Safranin O/Fast Green Staining of Knee Joint Cartilage in Rabbits

After acupotomy intervention, embed the cartilage subchondral bone complex tissues in paraffin. Then, slice the tissue wax blocks and place them on the slides. Deparaffinize the slides with successive environmental dewaxing solutions for 15 minutes each.Then, dip the slides successively in xylene and anhydrous ethanol for two to five minutes each, followed by dehydration in decreasing ethanol concentrations. Stain the slide with fast green solution for one minute. After rinsing the excess fast green solution with ultrapure water, rinse slide quickly with 1%acetic acid solution several times for color separation.Again, rinse the slide with water as demonstrated before staining with safranin O solution for 10 to 15 minutes. Soak the slide in increasing ethanol concentrations for three to five seconds each, then, place the slide in successive xylene solution for 10 minutes each. Add a neutral resonance medium on the front of the slide, avoiding the tissue.Place the edge of the cover glass on the slide and slowly lower it to cover the neutral balsam. Wipe off the extra xylene and neutral balsam. After overnight drying, observe the slide under the microscope for cartilage histology scoring.In the control group, the cartilage surface was smooth and exhibited organized chondrocyte arrangement in all layers. In contrast, the cartilage surface was rough in the KOA group and the chondrocyte arrangement was disordered. Acupotomy improved the smoothness of the cartilage surface and preserved normal chondrocyte structure.The cartilage integrity score was significantly increased in the KOA group compared to the control and acupotomy group.