JSV נתמך על ידי מענק שיתופי MM על ידי הנציבות האירופית (גן 603,191-PAINCAGE).

הנהלים הקשורים בנושאים בעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה בבית בקינגס קולג &#39;בלונדון והם בהתאם לתקנות משרד הפנים בבריטניה (הליכים מדעיים בעלי חיים נפעל 1986). 1. הזרקה תוך-מפרקית של Monoiodoacetate בברך <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בית 8 -. 10 עכברים בן שבוע בקבוצות של 5 תחת מחזור 12 שעות אור / חושך (אורות בשעה 7:00 בבוקר) עם מזון כרצונך מים נותנים העכברים להתאקלם במשך שבוע 1 לפני תחילת הניסוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר באקראי ועכברי כלוב בקבוצות של 5. מספרי חיה השתמש בקודים לעוור הנסיין לטיפולים. השתמש משקולות גוף כפרמטרים עבור אקראיות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום הזרקה, טרי להכין את הפתרון של monoiodoacetate מלוח סטרילית (0.9% NaCl) על הריכוז הרצוי. השתמש תמיסת מלח סטרילית זריקות בקבוצה נפרדת של עכברים שליטים. הגבוה ביותר ממליץ המינון של MIA הוא 1 מ&quot;ג ב 10 μl. זהירות: Monoiodoacetate הוא Very רעיל. לכן, מומלץ כי כפפות ומסכת שחוקות בעת טיפול האבקה והכנת הפתרון. הפתרון צריך להיות מסונן סטרילי עם מסנן 0.22 מיקרומטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים עכברים באמצעות עגלה הרדמה ידי הצבתם הראשון בתא ומספק isoflurane 2% בתערובת O 2 (לזרום 1.5 L / min שיעור) ולאחר מכן להעביר עכברים לקטע חרטומו, אשר גם מספק את תערובת 2% isoflurane-O 2 , וככזה, שומרת הרדמה במהלך ההזרקה. מניחים משחה הווטרינר על העיניים כדי למנוע התייבשות שלהם החוצה לאחר הרדמה. תלבש שמלת כירורגי, כפפות, ומסיכת בעת ביצוע הליך ההזרקה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אשר הרדמה על ידי סימון החוסר של החיה של בתגובה לגירוי קמצוץ על רגליו האחוריות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר שהחיה היא בהרדמה, למקם אותו על גבו. חתוך ולנגב את האזור שסביב מפרק הברך עם אלכוהול. יוד או כלורהקסידין Povidone יכול לשמש גם fאו חיטוי. גיד הפיקה (הקו הלבן לשאוג פיקת הברך) יהיה גלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> על מנת לייצב את הזריקה, לשמור על הברך עדיין, בעמדה כפופה, על ידי נחת אצבע המורה מתחת למפרק הברך ואת האגודל מעל פני השטח הקדמיים של מפרק הקרסול. העדפה משותפת אינה נדרשת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי למצוא את האתר של הזרקה המדויק, לרוץ מחט 26 G מצורפת מזרק אופקי לאורך הברך (כדי לא לנקב את העור עם הקצה) עד שהיא מוצאת את הפער מתחת פיקת הברך. להפעיל לחץ עדין וסמן את השטח ולאחר מכן הרם את מחט מזרק אנכי עבור הזריקה. הכנס את המחט באזור המסומן, דרך גיד הפיקה, בניצב השוקה. אין התנגדות צריכה להיות מורגשת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> השתמש באגודל כמדריך ולהזריק שטחי לאתר כניסה. לאחר ההזרקה, לעסות את הברך כדי להבטיח חלוקה שווה של הפתרון. מחק את המחט מיד חדהבן של. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניח עכברים בחזרה לכלוב בית נקי על מחצלת מחוממת ולאפשר להם להתאושש. שמור על ערנות מתמדת על החיות עד שהם להכרתו המתאימה, אשר נמדדה על ידי אותם שהשיבו שכיבה sternal. לאחר החיות הם התאוששו, לחזור לכלוב שלהם. הערה: מומלץ למטרות תרגול ואימון הכי טובות לצבוע משמשת לנתיחה שלאחר מוות מיידי לבצע כדי לאשר לוקליזציה נכונה של הזרקה. </li></ol></li></ol> 2. מדידה של מכני רגישות יתר (Allodynia) הערה: ספי נסיגה מכאניים סטטי מוערכים על ידי החלת שערות פון פריי אל פני השטח הפלנטרי של כף הרגל האחורית. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תביאו עכברים לחדר התנהגותיות ולתת חיות רסן להתאקלם קובות אקריליק (8 ס&quot;מ x 5 ס&quot;מ x 10 ס&quot;מ) על גבי רשת התיל. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים ברכבת לפי טיפול הרגלת 2 hr לכוכים יומיים לפני יישום שיער פון פריי כדילהגביל מתח ambulation במהלך היישום של שערות פון פריי. בימי בדיקה, להרגיל חיות התאים לתקופה של עד 60 דקות לפני הבדיקה. תלבש שמלות, כפפות, מסכות במהלך כל הניסויים התנהגותיות. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל שערות פון פריי מכוילות (סיבי ניילון גמישים בקוטר הגדלה כי להפעיל מוגדר רמות של כוח כמו מכויל על ידי החברה לייצור כפי שבאו לידי ביטוי גרם (g)) אל פני השטח הפלנטרי של הכף האחורית עד עיקולי סיבים. השתמש 0.008, 0.02, 0.04, 0.07, 0.16, 0.4, 0.6, ו -1.0 גרם סיבים במהלך הבדיקה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חזק כל שערה במקום במשך 3 שניות או עד הכפה היא נסוגה, שהאחרון הגדרת תשובה חיובית. החל עם כוח גירוי של 0.07 גרם, להחיל שערות על פי &quot;השיטה למעלה-למטה&quot; 21: מארק כמו X תגובת גמילת O העדר התגובה. החל בסדר עולה בכוח, עד 1 גרם (חתוך כוח), עד תגובה מזוהית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Re-לבדוק את כפה על ידי חזרהצעד 2.2.1, החל הנימה כי מפעילה כוח מתחת לזו שהניבה נסיגה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר מכן, החל החוטים הנותרים ברצף, ברדתו כוח, עד שלא נסיגה מתרחשת. להירשם מחדש חוטים בסדר עולה עד תגובה הוא ציין. המשך עד רצף של שש תגובות מתקבל (למשל, OXOXOX), על מנת לקבל את ערך &#39;k&#39; על ידי פנייה טבלאית ערכי 21. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבטא ערכי נסיגה כפה כמו ספי נסיגת 50% כפה בגרמים. השתמש בנוסחה (10 [XR + K δ]) / 10,000 שם XR = ערך של נימה האחרון פון פריי המשמש ברצף (ביחידות יומן), k = ערך טבלאי, ו δ = הבדל ממוצע בכוחות בין הסיבים. איפה אין תגובה מזוהית, השתמש התגובה המקסימלי של 21,22 1 גרם. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעקבות ההליך המתואר לעיל (2.2.1-2.2.4), להעריך ספים מכאניים של שני כפותיו האחוריות לפני MIA Injection כמו ערכי הבסיס. לאחר הזרקה, להעריך סף של כפות ipsilateral ו הנגדי במרווחי יום קבועים במשך כמה שבועות לאחר MIA לברר את התפתחות Allodynia המכאני. הערה: לדוגמה, אנו מדווחים ספים נמדדו 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, ו -28 ימים לאחר הזרקת MIA. בעלי חיים נחשבים allodynic כשהם מציגים בתגובה 0.1 גרם ומטה. תגובות נורמליות ליפול בתוך 0.6 - טווח 1 גרם. </li></ol> מדידת 3. גירעון נושאת משקל הערה: שינויי נושאת משקל נמדדים באמצעות בודק המשקל incapacitance. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאמן כל עכבר ללכת לתוך תא פרספקס על המנגנון ולשבת בתיבת ההחזקה. מניחים את העכבר מול הקופסה שהכילה, להרים את הכניסה עד 45 °, ולאפשר את העכבר ללכת ולסגור את תיבת הדו. אפשר החיות לנוע בחופשיות עד שהם לאמץ תנוחת ישיבה. אימון זה לוקח לפחות ימים ומבטיח כי בעל החיים הוא עדיין ולא leaning משני צדי האולם. כייל את המכשיר לפני שימוש עם משקל סימון 100 גרם (או על פי הוראת ציוד). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ודא שכל כפה אחורית מושמת על כרית ההקלטה המתאימה 11. משך כל מדידה לוקח 1 שניות, על פי הוראות היצרן. </li></ol></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אסוף שלוש מדידות של המשקל הנישא על כל כף אחורית מפנקס ההקלטה עבור כל הקלטות ולהשתמש הערך הממוצע לחשב את ההבדל במשקל מובל על ידי כפות ipsilateral ו נגדי. ערכים אקספרסים כהפרש בין כפותיו הנגדיות ואת ipsilateral בגרמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להעריך שינויי נושאת משקל לפני זריקת MIA כמו ערכי בסיס. ואז, הערכות חוזרות במרווחי זמן קבועים על פני כמה שבועות כדי לוודא את הפיתוח של שינויים בשער. לדוגמא, אנו מדווחים ספים נמדדו על 0, 3, 5, 7, 10, 14, 21, ו -28 ימים לאחר הזרקת MIA. הערה: b משקל תקיןערך של 50% חָרִישׁ מייצג חלוקת משקל שווה על פני hindlimb ipsilateral ו הנגדי. בעלי חיים נחשבים תצוגה רגישה יתר משקל נושאות שינוי בסך של כ 45%. מדידות של ספים מכאניים וגירעונות נושאת משקל יכולות להתבצע באותו העכברים, כשגם נקודת הסיום משפיעה על השני. לקבלת הערכה תרופתית, כל קבוצה של בעלי חיים צריכה להיבדק במועדים קבועים לאחר המינון עולה בקנה אחד עם פרופיל pharmacokinetic של המתחם המשמש. </li></ol>

<ol>
	<li>Farrell, M., Gibson, S., McMeeken, J., Helme, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+and+hyperalgesia+in+osteoarthritis+of+the+hands.">Pain and hyperalgesia in osteoarthritis of the hands.</a> J. Rheumatol. 27 (2), 441-447 (2000).</li><li>Kuni, B., Wang, H., Rickert, M., Ewerbeck, V., Schiltenwolf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+threshold+correlates+with+functional+scores+in+osteoarthritis+patients.">Pain threshold correlates with functional scores in osteoarthritis patients.</a> Acta. Orthop. 86 (2), 215-219 (2015).</li><li>Wylde, V., Hewlett, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+pain+after+joint+replacement:+prevalence,+sensory+qualities,+and+postoperative+determinants.">Persistent pain after joint replacement: prevalence, sensory qualities, and postoperative determinants.</a> Pain. 152 (3), 566-572 (2011).</li><li>Wylde, V., Palmer, S., Learmonth, I. D., Dieppe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Test-retest+reliability+of+Quantitative+Sensory+Testing+in+knee+osteoarthritis+and+healthy+participants.">Test-retest reliability of Quantitative Sensory Testing in knee osteoarthritis and healthy participants.</a> Osteoarthr. Cartil. 19 (6), 655-658 (2011).</li><li>Hunter, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologic+therapy+for+osteoarthritis--the+era+of+disease+modification.">Pharmacologic therapy for osteoarthritis--the era of disease modification.</a> Nat. Rev. Rheumatol. 7 (1), 13-22 (2011).</li><li>Lampropoulou-Adamidou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Useful+animal+models+for+the+research+of+osteoarthritis.">Useful animal models for the research of osteoarthritis.</a> Eur. J. Orthop. Surg. Traumatol. 24 (3), 263-271 (2014).</li><li>Yamamoto, K., Shishido, T., Masaoka, T., Imakiire, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+studies+on+the+ageing+and+osteoarthritis+of+the+articular+cartilage+in+C57+black+mice.">Morphological studies on the ageing and osteoarthritis of the articular cartilage in C57 black mice.</a> J. Orthop. Surg. (Hong Kong). 13 (1), 8-18 (2005).</li><li>Huebner, J. L., Hanes, M. A., Beekman, B., TeKoppele, J. M., Kraus, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+analysis+of+bone+and+cartilage+metabolism+in+two+strains+of+guinea-pig+with+varying+degrees+of+naturally+occurring+osteoarthritis.">A comparative analysis of bone and cartilage metabolism in two strains of guinea-pig with varying degrees of naturally occurring osteoarthritis.</a> Osteoarthr. Cartil. 10 (10), 758-767 (2002).</li><li>Thysen, S., Luyten, F. P., Lories, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targets,+models+and+challenges+in+osteoarthritis+research.">Targets, models and challenges in osteoarthritis research.</a> Dis Model Mech. 8 (1), 17-30 (2015).</li><li>Longo, U. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteoarthritis:+new+insights+in+animal+models.">Osteoarthritis: new insights in animal models.</a> Open. Orthop. J. 6, 558-563 (2012).</li><li>Bove, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Weight+bearing+as+a+measure+of+disease+progression+and+efficacy+of+anti-inflammatory+compounds+in+a+model+of+monosodium+iodoacetate-induced+osteoarthritis.">Weight bearing as a measure of disease progression and efficacy of anti-inflammatory compounds in a model of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis.</a> Osteoarthr. Cartil. 11 (11), 821-830 (2003).</li><li>Pomonis, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+pharmacological+characterization+of+a+rat+model+of+osteoarthritis+pain.">Development and pharmacological characterization of a rat model of osteoarthritis pain.</a> Pain. 114 (3), 339-346 (2005).</li><li>Schuelert, N., McDougall, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Grading+of+monosodium+iodoacetate-induced+osteoarthritis+reveals+a+concentration-dependent+sensitization+of+nociceptors+in+the+knee+joint+of+the+rat.">Grading of monosodium iodoacetate-induced osteoarthritis reveals a concentration-dependent sensitization of nociceptors in the knee joint of the rat.</a> Neurosci. Lett. 465 (2), 184-188 (2009).</li><li>Vonsy, J. L., Ghandehari, J., Dickenson, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+analgesic+effects+of+morphine+and+gabapentin+on+behavioural+measures+of+pain+and+disability+in+a+model+of+osteoarthritis+pain+in+rats.">Differential analgesic effects of morphine and gabapentin on behavioural measures of pain and disability in a model of osteoarthritis pain in rats.</a> Eur. J. Pain. 13 (8), 786-793 (2009).</li><li>Im, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+sensory+neurons+and+spinal+response+to+an+experimental+osteoarthritis+pain+model.">Alteration of sensory neurons and spinal response to an experimental osteoarthritis pain model.</a> Arthritis Rheum. 62 (10), 2995-3005 (2010).</li><li>Sabri, M. I., Ochs, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+glyceraldehyde-3-phosphate+dehydrogenase+in+mammalian+nerve+by+iodoacetic+acid.">Inhibition of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase in mammalian nerve by iodoacetic acid.</a> J. Neurochem. 18 (8), 1509-1514 (1971).</li><li>van der Kraan, P. M., Vitters, E. L., van de Putte, L. B., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+osteoarthritic+lesions+in+mice+by+'metabolic'+and+'mechanical'+alterations+in+the+knee+joints.">Development of osteoarthritic lesions in mice by 'metabolic' and 'mechanical' alterations in the knee joints.</a> Am. J. Pathol. 135 (6), 1001-1014 (1989).</li><li>Guingamp, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mono-iodoacetate-induced+experimental+osteoarthritis:+a+dose-response+study+of+loss+of+mobility,+morphology,+and+biochemistry.">Mono-iodoacetate-induced experimental osteoarthritis: a dose-response study of loss of mobility, morphology, and biochemistry.</a> Arthritis Rheum. 40 (9), 1670-1679 (1997).</li><li>Janusz, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderation+of+iodoacetate-induced+experimental+osteoarthritis+in+rats+by+matrix+metalloproteinase+inhibitors.">Moderation of iodoacetate-induced experimental osteoarthritis in rats by matrix metalloproteinase inhibitors.</a> Osteoarthr. Cartil. 9 (8), 751-760 (2001).</li><li>Marker, C. L., Pomonis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+monosodium+iodoacetate+model+of+osteoarthritis+pain+in+the+rat.">The monosodium iodoacetate model of osteoarthritis pain in the rat.</a> Methods Mol. Biol. 851, 239-248 (2012).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J. Neurosci. Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li><li>Dixon, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+analysis+of+experimental+observations.">Efficient analysis of experimental observations.</a> Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 20, 441-462 (1980).</li><li>Ogbonna, A. C., Clark, A. K., Gentry, C., Hobbs, C., Malcangio, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain-like+behaviour+and+spinal+changes+in+the+monosodium+iodoacetate+model+of+osteoarthritis+in+C57Bl/6+mice.">Pain-like behaviour and spinal changes in the monosodium iodoacetate model of osteoarthritis in C57Bl/6 mice.</a> Eur. J. Pain. 17 (4), 514-526 (2013).</li><li>Fernihough, J., Gentry, C., Malcangio, M., Fox, A., Rediske, J., Pellas, T., Kidd, B., Bevan, S., Winter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pain+related+behaviour+in+two+models+of+osteoarthritis+in+the+rat.">Pain related behaviour in two models of osteoarthritis in the rat.</a> Pain. 112 (1-2), 83-93 (2004).</li></ol>

None of the authors have competing interests or conflicting interests.

עם מתודולוגיה זו, אנו מתארים שיטה מועדפת גרימת כאב OA הדמוי העכבר ידי הזרקה תוך-מפרקית של MIA בתוך מפרק ברך והערכה רגישה לגירויים שאינם רעילים רעילים בגפיים האחוריים. הזרקת MIA קשורה להתנהגות כאב מתמשכת, משקל גפיים אחוריים שינה כלומר נושאות ופיתוח של רגישות יתר מכני מכונה (Allodynia). ניתן כהשלמה כזה מדידות סטטי באמצעות ניתוח הליכה על הליכון או על ידי ניתוח מסלול בחיות נעו בחופשיות. מודלי MIA מגיבים לטיפולים קונבנציונליים לשיכוך כאבים 24, המעיד על כך שהם עשויים להיות שימושיים עבור אניני טעם גישות טיפוליות. בעוד הזרקה של MIA הוא לא קשה מבחינה טכנית, קופסית המפרק יכול להיות פירסינג במהלך ההזרקה, וכתוצאה מכך דליפה של MIA מחוץ הקפסולה, ואת הכישלון כדי לגרום לרעילות של כונדרוציטים. ואכן, הזרקה מערכתית של MIA עלולה להיות קטלנית בתוך מכרסמיםnd השפעות אפשריות של MIA על רקמות ותאים אחרים מאשר chondrocytes עלולות לבלבל תוצאות, מלבד היותו בלתי רצוי. ככזה, הוא חייב להיות הדגיש כי בזהירות רבה צריכה להינתן הזריקה של MIA, כפי שהוא הוא מרכיב קריטי של המודל, וביטחון צריך להיות נתון כי ההזרקה מתרחשת לחלל המפרק. פרוטוקול זה עוזר כדי להשיג את זה. הפרוטוקולים המתוארים כאן שואפים להבטיח החיות לספק תגובות לכאב דמוי עקביות לאורך כל תקופת הבדיקה. כמו כן, הם מאפשרים התאמה של חומרת מחלה על ידי שינוי המינון של MIA המשמש כדי לעודד את הפתולוגיה 15,23. האינדוקציה המהירה של מצב המחלה והתנהגות כמו כאבים לאפשר הערכה בזמן של תרכובות שינוי-כאב. זה יש יתרון על פני הקיים כירורגית ספונטני פיתוח מודלים של OA, תהליך שיכול להימשך פרק זמן ארוך יותר כדי לפתח רגישות יתר. כמו כן, במיוחד עבור הדגמים הספונטניים, המחלה pathology אינו בא לידי בכל בעלי-החיים (כ 20 - 80% 7), ואילו המודל MIA קשורה בשכיחות משמעותית של המגיבים. יתר על כן, מודלים ספונטניים אינם מתאימים מדידות של שינויי נושאת משקל, כמו OA המפתחת בשתי הברכיים. כאשר שוקלים מדידות התנהגותי, החיות צריכות להישמר רגוע ונינוח במהלך הערכות. זו מושגת, כמפורט בפרוטוקול, בהכשרתו מוקדם לפני מדידות הקלטה ידי טיפול חוזר ונשנה, האפשר חיות כדי ולהכיר את הנסיין. נקודת מפתח כדי להפחית את הלחץ היא להשתמש באותו הנסיין עבור המבחן התנהגותי לאורך כל דרך, כמו שינוי מתמיד יניע את הבעיות שהוזכרו לעיל. כמו כל מודל, מודל MIA של OA נושא מגבלות, כגון המהירות של הפרעה משותפת, אשר אינו דומה ההתפתחות האיטית של פתולוגיה OA בחולים. אחת הדרכים להתגבר על בעיה זו יהיה להשלים את המודל הזה עם suמודל rgical של OA. השימוש במודל הכימי MIA בפיתוח מתחם מאפשר השימוש של פרוטוקולים מונעים וטיפוליים על הפיתוח והתחזוקה של כאב OA הדמוי. לבסוף, המודל MIA ישלים מחקרים של תכונות phenotypical של עכברים נוק-אאוט, עוזר נוסף כדי להבין את המחלה OA.

מבחינה קלינית, דלקת מפרקים ניוונית (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב כואב מחלישה המאופיינת אובדן הדרגתי של הסחוס במפרק, דלקת קלה של הרקמות בתוך ומסביב המפרקים, ולפעמים היווצרות osteophytes וציסטות העצם. חולים עם OA לדווח כאב מתמשך 1 ולהציג רגישות מוגברת ללחץ גירוי מזיק בתוך 2-4 משותף שיגרון. נכון לעכשיו, אין תרופה עבור OA עם גישות טיפוליות זמינות ומשככי כאבים ניתנים על מנת להקל על הכאב הקשורים במחלה זו, במידה מסוימת של הצלחה 5. עם זאת, כאב OA נשאר מודלי נושא ובעלי החיים קליניים של OA מפותח כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני כאב הקשורות OA ולחשוף מטרות רומן לטיפול. ישנם מספר דגמים בעלי חיים של OA זמינים עם מאפיינים שונים 6. שיטות כירורגיות, כגון קדמיחיתוך רוחב רצועה צולבת, יכול להיות מנוצל. עם זאת, הם כרוכים בהתערבות כירורגית מיומנת מבוצעים בעיקר בחולדה, תוך יציבות של המניסקוס המדיאלי (DMM) משמשת העכבר. התפתחות ספונטנית של OA מתרחשת שרקן וניוון משותף ספונטני דווחו עכברים שחורים C57 מן 3 עד 16 חודשים של גיל 7,8. מודלי OA ספונטניים אינם כרוכים כל התערבות לנצל את השפעתה על מצבו, אבל יש להם את שוני פנימי, וככזה, נגרם מספרים גדולים ועלות 9,10. מבחינה כימית מושרה מודלים, מצד השני, דורשים הליכים הרבה פחות פולשני לעומת דגמים כירורגית, וככזה, קלים יותר ליישם ולאפשר המחקר של נגעי OA בשלבים שונים. מודלים אלה כוללים זריקות אחת בברך של סוכנים דלקתיים, אימונוטוקסין, collagenase, פפאין, או monoiodoacetate, אשר יכולים להיות רעילים אם הם להימלט המרווח המפרקי. של כל הדגמים הכימיים של OA, MIA הוא משמש לעתים קרובות ביותר אחת, PArticularly כדי לבחון את היעילות של סוכנים תרופתיים לטיפול בכאב, כמו מודל זה יוצר פנוטיפ לשחזור, חזקים, מהיר כאב דמוי שיכול להיות מדורג על ידי שינוי MIA מינון 11-15. הזרקה תוך-מפרקית של MIA במכרסמים מתרבה נגעי OA דמויים במוגבלות כי ניתן לנתח לכמת. MIA הוא מעכב של glyceraldehyde-3-phosphatase, שיבוש הגליקוליזה הסלולר ולבסוף וכתוצאה מכך מוות של תאים 16,17. הזרקה תוך-מפרקית של MIA גורמת מוות של תאים הכונדרוציטים, המובילה להתנוונות סחוס ושינויי העצם subchondral עוקבים כגון הופעת העצם osteophytes 18,19. כמו השירות של MIA בחולדה תואר לפני 20, במאמר זה נתמקד על המתודולוגיה של MIA-induced OA בעכברים כמודל זה נמצא בשימוש יותר ויותר עם ​​הזמינות של עכברים נוק-אאוט. אנו מתארים הליך עבור injection של כרכים קטנים מאוד לתוך הברך ושיטות למדידת רגישות לגירויים מזיקים ובלתי רעילים בגפיים האחוריים. הפירוט של המתודולוגיה יעזור להפחית השתנות, וככזה, לחדד את המודל ולהקטין את מספר בעלי החיים הנדרשים למחקר.

<table><tbody><tr><td>Monoiodoacetate</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I-2512-25G</td><td>&amp;#8805; 98% purity</td></tr><tr><td>0.9% Saline</td><td>Mini-Plasco basic</td><td>365 4840</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Merial</td><td>DNI 4090/1</td><td></td></tr><tr><td>26 G Needle</td><td>Fisher Scientific</td><td>12947606</td><td></td></tr><tr><td>50 &amp;#956;l Hamilton Syringe</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>20701</td><td></td></tr><tr><td>Von Frey Hairs</td><td>Linton Instruments</td><td>NC 122775-99</td><td></td></tr><tr><td>Incapacitance tester</td><td>Linton Instruments</td><td></td><td>Delivery on Request</td></tr><tr><td>Testing Cage Rack&amp;nbsp;</td><td>Ugo Basile</td><td>37450</td><td></td></tr><tr><td>Compact Anesthetic system</td><td>Vet-Tech</td><td>AN001B</td><td></td></tr><tr><td>Medical O&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>BOC</td><td>101-F</td><td></td></tr><tr><td>Aldasorbers</td><td></td><td>Vet -Tech</td><td>AN006A</td></tr></tbody></table>

the monoiodoacetate model of osteoarthritis pain in the mouse

סימפטום מרכזי של חולים עם דלקת מפרקים ניוונית (OA) הוא כאב מופעל על ידי פריפריה כמו גם מרכזי שינויים בתוך מסלולי הכאב. הטיפולים הקיימים כיום עבור כאב OA כגון NSAIDS או אופיאטים אינם מספיק יעילים ולא נטולי תופעות לוואי מזיקות. במודלים של בעלי החיים של OA מפותח כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני כאב הקשורות OA ולהגדיר מטרות תרופתיות רומן לטיפול. כרגע זמינים מודלים של OA במכרסמים כוללים התערבויות כירורגיות וכימיות לתוך מפרק ברך אחד. Monoiodoacetate (MIA) מודל הפך להיות סטנדרט למידול שיבוש משותף OA בשני חולדות ועכברים. המודל, שהוא קל יותר לבצע בחולדה, כרוך הזרקה של MIA לתוך מפרק ברך שגורם תגובות לכאב דמוי מהירות איבר ipsilateral, רמה אשר יכול להיות נשלטה על ידי הזרקה של מינונים שונים. הזרקה תוך-מפרקית של MIA משבש הגליקוליזה הכונדרוציטים ידי עיכוב glycerdehydrogenase ותוצאות אלדהיד-3-phosphatase במוות הכונדרוציטים, נאווסקולריזציה, נמק העצם subchondral וקריסה, כמו גם דלקת. השינויים המורפולוגיים של שיבוש סחוס ועצם במפרק הם שיקוף של היבטים מסוימים של פתולוגיה החולה. יחד עם ניזק משותף, גורם הזרקת MIA התייחס רגישות מכאנית בגירעונות נושאות הכפה ומשקל אחוריים ipsilateral כי הם מדידים וכמותיים. שינויי התנהגותיים האלה מזכירים חלק מהתסמינים שדווחו על ידי אוכלוסיית החולים, ובכך אימות הזרקת MIA בברך כמודל טרום קליני שימושי ורלוונטי של כאב OA. מטרת מאמר זה היא לתאר את המתודולוגיה של זריקות תוך-מפרקית של MIA ואת הקלטות התנהגותית של הפיתוח הקשור של רגישות יתר עם מוח כדי להדגיש את הצעדים הדרושים כדי לתת הקלטות עקביות ואמין.

דיווחנו לאחרונה כי ההזרקה של 0.5 - 1 מ&quot;ג MIA של גורם מפרק ברך העכבר התייחסה רגישה יתר מכאני (Allodynia) ב הכף האחורית ipsilateral ו נושאת משקל גירעונות עד 4 שבועות, אם כי onsets הם תלויים במינון 23. הנתונים המדווחים באיור 1 מהווים דוגמא של מהלך הזמן של רגישות יתר מכאני-induced MIA ב הכפותה האחורית ipsilateral לאחר שורה של מנות מוזרקות בברך. באופן ספציפי, המינון הנמוך ביותר של MIA (0.5 מ&quot;ג / עכבר) ביאה לירידה של 50% של ספים לעומת ההזרקה של תמיסת מלח ביום 10, ספי ירד ל 70% מאלה של בקרות מלוחות ביום 28 לאחר הזרקה. מינון הביניים של 0.75 מ&quot;ג של MIA הביא לירידה הדרגתית ספים שהיו 80% נמוכים יותר מאשר סף שליטה מלוחה ביום 10 ונשאר נמוך עד יום 28. המינון הגבוה ביותר של 1 מ&quot;ג MIA היה קשור עם שלטירידה ificant ב למפתן ביום 5 וירידה נוספת ביום 10, אשר נשמר עד היום 28. הנתונים המדווחים באיור 2 לספק דוגמאות של שינויים נושאת משקל המשויכים הזרקת MIA במפרקים הברך. קבוצה זו של ניסויים, ואילו מינון 0.5 מ&quot;ג MIA לא לגרום לשינויים משמעותיים נושאת משקל לאורך כל תקופת 28 היום של המחקר, מינון 0.75 מ&quot;ג MIA הביא לירידה משמעותית במשקל מובל על ידי כפת ipsilateral מהיום 10 ואילך. יש לציין, אסימטריה נושאת משקל הקשורים 0.75 מ&quot;ג של MIA עשוי להניב תוצאות משתנות ובלתי עקביות בין המחקרים 23. במקום זאת, במינון של 1 מ&quot;ג MIA בדרך כלל גורם משקל לשחזור נושאות אסימטריה והנתונים באיור 2 להדגים הפחתה משמעותית של משקל נישא על הכף האחורית ipsilateral מיום 3 עד סוף תקופת המעקב. כצפוי, saliחיות שטופלו ne לא הראו נושאת משקל שינויים. <img alt="איור 1" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig1.jpg" /> איור 1. פיתוח Allodynia מכונה ההודעה MIA הזרקה. ספי נסיגת Paw של הכפותה האחורית ipsilateral ו נגדית הוערכו לפני ואחרי הזרקת MIA (0.5, 0.75, ו 1 מ&quot;ג / עכבר) ו מלוח (0.9% NaCl), n = 8 - 10 עכברים / קבוצה. * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01, *** p &lt;0.001 לעומת קבוצה מלוחה שטופל; דו כיוונית ANOVA מדידות חוזרות ואחריו הסטודנטים ניומן-Keuls פוסט הוק הבדיקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a> <img alt="איור 2" src="/files/ftp_upload/53746/53746fig2.jpg" /> פיתוח איור 2. גירעון נושאת משקלs הודעת MIA הזרקה. שינויים במשקל גוף הפצה בין שני הגפיים אחוריים חושבו [(משקל נישא על כף ipsilateral / סכום של המשקל הנישא על כפות ipsilateral ו נגדי) * 100] הוערכו לפני ואחרי הזרקת MIA ( 0.5, 0.75, ו 1 מ&quot;ג / עכבר) ו מלוחים (0.9% NaCl), n = 8 - 10 עכברים / קבוצה. * P &lt;0.05, ** P &lt;0.01, *** p &lt;0.001 לעומת קבוצה מלוחה שטופל. דו כיוונית ANOVA מדידות חוזרות ואחריו הסטודנטים ניומן-Keuls פוסט הוק הבדיקה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53746/53746fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.</a>

Watch this Scientific Journal Video about The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse at JoVE.com

The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

אוסטיאוארתריטיס (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב מתישה הקשורים כאב נשאר רק מבוקרת חלקית משככי כאבים זמינים. במודלים של בעלי חיים מפותחים כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני הכאב הקשורות OA. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה מודל monoiodoacetate כאב OA בתוך העכבר.

A major symptom of patients with osteoarthritis (OA) is pain that&#160;is triggered by peripheral as well as central changes within the pain pathways. The ...

the-monoiodoacetate-model-of-osteoarthritis-pain-in-the-mouse

Research

JoVE Journal

Medicine

35.0K Views.  King's College London.  אוסטיאוארתריטיס (OA), או מחלת מפרקים ניוונית, הוא מצב מתישה הקשורים כאב נשאר רק מבוקרת חלקית משככי כאבים זמינים. במודלים של בעלי חיים מפותחים כדי לשפר את ההבנה שלנו של מנגנוני הכאב הקשורות OA. כאן אנו מתארים את המתודולוגיה מודל monoiodoacetate כאב OA ב...

Video: The Monoiodoacetate Model of Osteoarthritis Pain in the Mouse

Technical Aspects of the Mouse Aortocaval Fistula

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta and inferior vena cava (IVC) are exposed. The proximal infrarenal aorta and the distal aorta are dissected for clamp placement and needle puncture, respectively. Special attention is paid to avoid dissection between the aorta and the IVC. After clamping the aorta, a 25 G needle is used to puncture both walls of the aorta into the IVC. The surrounding connective tissue is used for hemostatic compression. Successful creation of the AVF will show pulsatile arterial blood flow in the IVC. Further confirmation of successful AVF can be achieved by post-operative Doppler ultrasound.

The goal is to produce an arteriovenous fistula that is simple and reproducible. This method does not use sutures or glue adhesive. Therefore the samples can be used with the least amount of foreign materials for analysis.

היבטים טכניים של מורסת Aortocaval מאוס

Technical aspects of creating an arteriovenous fistula in the mouse are discussed. Under general anesthesia, an abdominal incision is made, and the aorta ...

Inflammatory TMJ Pain Mouse Model: Bite Force and Von Frey Filament Assessments

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms driving diseases-related pain are poorly understood, and current treatments fail to provide effective and long-term therapeutic effects. Additionally, pain assessment in research, particularly orofacial pain, poses several challenges that complicate studies in both clinical and basic science settings. Therefore, we have established an inflammatory TMJ pain mouse model via intra-articular injection of CFA (Complete Freund's Adjuvant) and evaluated pain behaviors by bite force measurement and the von Frey filament test. Mice with CFA injection exhibited orofacial pain behaviors compared to PBS injection, including reduced bite force and head withdrawal threshold in the von Frey filament test. These methods are relatively easy to execute to have reproducible results and can be potentially extended to pain studies for other disease models related to TMJ disorders. Together, bite force, and the von Frey filament tests are reliable in measuring orofacial pain, as demonstrated in CFA injection-induced painful TMJOA mouse models.

This protocol describes how measuring bite force and head withdrawal threshold can capture pain behavior in Complete Freund's Adjuvant (CFA)-induced inflammatory temporomandibular joint (TMJ) pain.

Temporomandibular joint (TMJ) pain and osteoarthritis (OA) are common and debilitating disorders that impair patients' quality of life. The mechanisms ...

Behavior

Spontaneous and Evoked Measures of Pain in Murine Models of Monoarticular Knee Pain

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are necessary and useful for studying the mechanisms of pain and for evaluating efficacy of arthritis therapies. Measuring pain in animal models of arthritis is challenging. We have developed methods for measuring evoked and spontaneous pain in three models of murine arthritis. We quantitate the evoked pain responses of mice subjected to firm palpation of a painful knee. We also evaluate spontaneous pain by the proportion of weight and the amount of time placed on each of their 4 limbs after induction of arthritis pain in one knee. Joint pain in these mouse models produces a significant increase in evoked pain responses and an alteration in weight bearing. Since mice are quadrupeds, they offload the painful limb to the contralateral limb, to the forelimbs, or some combination. These methods are simple, require minimal equipment, and are reproducible and sensitive for detecting pain. They are useful for studying both disease-modifying arthritis treatments and analgesics in mice.

We have developed an evoked measure of arthritis pain and coupled it with a standardized method for measuring spontaneous pain in different murine models of chemically induced arthritis. These measures are sensitive and reproducible for different types of joint pain.

אמצעי ספונטנית עורר הכאב במודלים מאתר של כאבי ברכיים Monoarticular

Pain is the main cause of disability from arthritis. There is currently an unmet need for adequate treatments for arthritis pain. Pre-clinical models are ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the pathophysiological changes of human OA. However, as the main symptom in the late stage of OA, pain affects the patients&#39; daily life, and there are not many available models. The mono-iodoacetate (MIA)-induced model is the most widely used OA pain model, mainly used in rodents. MIA is an inhibitor of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, which causes chondrocyte death, cartilage degeneration, osteophyte, and measurable changes in animal behavior. Besides, expression changes of matrix metalloproteinase (MMP) and pro-inflammatory cytokines (IL1 &#946; and TNF &#945;) can be detected in the MIA-induced model. Those changes are consistent with OA pathophysiological conditions in humans, indicating that MIA can induce a measurable and successful OA pain model. This study aims to describe the methodology of intra-articular injection of MIA in rats and discuss the resulting pain-related behaviors and histopathological changes.

This study describes the method of intra-articular injection of mono-iodoacetate in rats and discusses the resulting pain-related behaviors and histopathological changes, which provide references for future applications.

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Standardized Histomorphometric Evaluation of Osteoarthritis in a Surgical Mouse Model

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, primarily in the hip and knee joints, which results in significant impacts on patient mobility and quality of life. To date, there are no existing curative therapies for OA able to slow down or inhibit cartilage degeneration. Presently, there is an extensive body of ongoing research to understand OA pathology and discover novel therapeutic approaches or agents that can efficiently slow down, stop, or even reverse OA. Thus, it is crucial to have a quantitative and reproducible approach to accurately evaluate OA-associated pathological changes in the joint cartilage, synovium, and subchondral bone. Currently, OA severity and progression are primarily assessed using the Osteoarthritis Research Society International (OARSI) or Mankin scoring systems. In spite of the importance of these scoring systems, they are semiquantitative and can be influenced by user subjectivity. More importantly, they fail to accurately evaluate subtle, yet important, changes in the cartilage during the early disease states or early treatment phases. The protocol we describe here uses a computerized and semiautomated histomorphometric software system to establish a standardized, rigorous, and reproducible quantitative methodology for the evaluation of joint changes in OA. This protocol presents a powerful addition to the existing systems and allows for more efficient detection of pathological changes in the joint.

The current protocol establishes a rigorous and reproducible method for quantification of morphological joint changes that accompany osteoarthritis. Application of this protocol can be valuable in monitoring disease progression and evaluating therapeutic interventions in osteoarthritis.

מתוקננת הערכה היסטראורמטרית של אוסטיאוארתריטיס במודל עכבר כירורגי

One of the most prevalent joint disorders in the United States, osteoarthritis (OA) is characterized by progressive degeneration of articular cartilage, ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent evidence indicates a potential inflammatory component of the disease, with both T-cells and monocytes/macrophages potentially associated with the pathogenesis of OA. Further studies postulated an important role for subsets of both inflammatory cell lineages, such as Th1, Th2, Th17, and T-regulatory lymphocytes, and M1, M2, and synovium-tissue-resident macrophages. However, the interaction between the local synovial and systemic inflammatory cellular response and the structural changes in the joint is unknown. To fully understand how T-cells and monocytes/macrophages contribute towards OA, it is important to be able to quantitively identify these cells and their subsets simultaneously in synovial tissue, secondary lymphatic organs and systemically (the spleen and bone marrow). Nowadays, the different inflammatory cell subsets can be identified by a combination of cell-surface markers making multi-color flow cytometry a powerful technique in investigating these cellular processes. In this protocol, we describe detailed steps regarding the harvest of synovial tissue and secondary lymphatic organs as well as generation of single cell suspensions. Furthermore, we present both an extracellular staining assay to identify monocytes/macrophages and their subsets as well as an extra- and intra-cellular staining assay to identify T-cells and their subsets within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue. Each step of this protocol was optimized and tested, resulting in a highly reproducible assay that can be utilized for other surgical and non-surgical OA mouse models.

Here, we describe a detailed and reproducible flow cytometry protocol to identify monocyte/macrophage and T-cell subsets using both extra- and intracellular staining assays within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue, utilizing an established surgical model of murine osteoarthritis.

ניתוח ציתום זרימה של תת-סטים של תאים חיסוניים בתוך הטחול מורין, מח העצם, בלוטות הלימפה ורקמות Synovial במודל דלקת מפרקים ניוונית

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Software-Assisted Quantitative Measurement of Osteoarthritic Subchondral Bone Thickness

Subchondral bone thickening and sclerosis are the major hallmarks of osteoarthritis (OA), both in animal models and in humans. Currently, the severity of the histologic subchondral bone thickening is mostly determined by visual estimation based semi-quantitative grading systems. This article presents a reproducible and easily executed protocol to quantitatively measure subchondral bone thickness in a mouse model of knee OA induced by destabilization of the medial meniscus (DMM). This protocol utilized ImageJ software to quantify subchondral bone thickness on histologic images after defining a region of interest in the medial femoral condyle and the medical tibial plateau where subchondral bone thickening usually occurs in DMM-induced knee OA. Histologic images from knee joints with a sham procedure were used as controls. Statistical analysis indicated that the newly developed quantitative subchondral bone measurement system was highly reproducible with low intra- and inter-observer variabilities. The results suggest that the new protocol is more sensitive to subtle or mild subchondral bone thickening than the widely used visual grading systems. This protocol is suitable for detecting both early and progressing osteoarthritic subchondral bone changes and for assessing in vivo efficacy of OA treatments in concert with OA cartilage grading.

This methodology article presents a software-assisted quantitative measurement protocol to quantify histologic subchondral bone thickness in murine osteoarthritic knee joints and normal knee joints as controls. This protocol is highly sensitive to subtle thickening and is suitable for detecting early osteoarthritic subchondral bone changes.

מדידה כמותית בסיוע תוכנה של עובי עצם תת-תכונדרית אוסטיאוארתרית

Subchondral bone thickening and sclerosis are the major hallmarks of osteoarthritis (OA), both in animal models and in humans. Currently, the severity of ...

Destabilization of the Medial Meniscus and Cartilage Scratch Murine Model of Accelerated Osteoarthritis

Osteoarthritis is the most prevalent musculoskeletal disease in people over 45, leading to an increasing economic and societal cost. Animal models are used to mimic many aspects of the disease. The present protocol describes the destabilization and cartilage scratch model (DCS) of post-traumatic osteoarthritis. Based on the widely used destabilization of the medial meniscus (DMM) model, DCS introduces three scratches on the cartilage surface. The current article highlights the steps to destabilize the knee by transecting the medial meniscotibial ligament followed by three intentional superficial scratches on the articular cartilage. The possible analysis methods by dynamic weight-bearing, microcomputed tomography, and histology are also demonstrated. While the DCS model is not recommended for studies that focus on the effect of osteoarthritis on the cartilage, it enables the study of osteoarthritis development in a shorter time window, with special focus on (1) osteophyte formation, (2) osteoarthritic and injury pain, and (3) the effect of cartilage damage in the whole joint.

The present protocol describes the controlled microblade scratches on the surface of the articular cartilage after destabilizing the mouse knee by cutting the medial miniscotibial ligament. This animal model presents an accelerated form of osteoarthritis (OA) suitable for studying osteophyte formation, osteosclerosis, and early-stage pain.

ערעור היציבות של המניסקוס המדיאלי ושריטה הסחוס מודל מורין של דלקת מפרקים ניוונית מואצת

Osteoarthritis is the most prevalent musculoskeletal disease in people over 45, leading to an increasing economic and societal cost. Animal models are ...

<meta charset="utf8"></head><body>הזרקת כף אחורית כפולה לבדיקת משככי כאבים משופרת

A Modified Inflammatory Pain Model to Study the Analgesic Effect in Mice

The hot plate test is widely used to evaluate analgesic effects on inflammatory pain in mice. A commonly used model of inflammatory pain was induced with an intraplantar injection of carrageenan in one hind paw. However, the findings from our laboratory showed that mice with a single-hind-paw injection of carrageenan lifted their paws to avoid thermal nociception during the hot plate test. Because of this response,&#160;previous injection method cannot accurately reflect the thermal pain threshold. Thus, we investigated a new method to avoid this issue. In the present study, we modified the previous method by injecting carrageenan into both hind paws to establish the model of inflammatory pain. The results demonstrated that both-hind-paw injection with carrageenan was sensitive and a better method to induce inflammatory pain when using the hot plate test than single-hind-paw injection. On the basis of these findings, we designed further experiments in which mice with either both-hind-paw or single-hind-paw injection of carrageenan were treated intragastrically with celecoxib (30 mg/kg). The results of the hot plate test showed that celecoxib augmented the thermal pain threshold in mice with both-hind-paw injection of carrageenan but not in mice with single-hind-paw injection of carrageenan. In summary, we developed a superior method to induce a model of inflammatory pain to evaluate analgesic effect.

<meta charset="utf8"></head><body>מחבר זרקור: שיטה משופרת להערכת השפעות משככי כאבים - הזרקת קרגינן כף אחורית כפולה בעכברים

Here, we present a modified inflammatory pain model with the both-hind-paw carrageenan injection to evaluate the analgesic effect.

מודל כאב דלקתי שונה כדי ללמוד את אפקט משכך כאבים בעכברים

The hot plate test is widely used to evaluate analgesic effects on inflammatory pain in mice. A commonly used model of inflammatory pain was induced with ...

מודל Monoiodoacetate של אוסטיאוארתריטיס כאב העכבר

Summary

Explore More Videos

Chapters in this video

היבטים טכניים של מורסת Aortocaval מאוס

Temporomandibular Joint Pain Measurement by Bite Force and Von Frey Filament Assays in Mice

אמצעי ספונטנית עורר הכאב במודלים מאתר של כאבי ברכיים Monoarticular

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

מתוקננת הערכה היסטראורמטרית של אוסטיאוארתריטיס במודל עכבר כירורגי

ניתוח ציתום זרימה של תת-סטים של תאים חיסוניים בתוך הטחול מורין, מח העצם, בלוטות הלימפה ורקמות Synovial במודל דלקת מפרקים ניוונית

מדידה כמותית בסיוע תוכנה של עובי עצם תת-תכונדרית אוסטיאוארתרית

ערעור היציבות של המניסקוס המדיאלי ושריטה הסחוס מודל מורין של דלקת מפרקים ניוונית מואצת

מודל כאב דלקתי שונה כדי ללמוד את אפקט משכך כאבים בעכברים

מודל כאב דלקתי שונה כדי ללמוד את אפקט משכך כאבים בעכברים