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An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for <em>in vivo</em> Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

University of Pennsylvania-School of Medicine

&#x8DE8;&#x819C;&#x86CB;&#x767D; LAT &#xFF08;&#x94FE;&#x63A5;&#x4E3A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5668;) &#x60C5;&#x4FA3; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53; (TCR) &#x5411;&#x4E0B;&#x6E38;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x7EAF;&#x5408;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684; LAT &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x963B;&#x788D;&#x4E86;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;&#x540E;&#x6765;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7D2F;&#x79EF;&#x957F;&#x671F;&#x4EA7;&#x751F;&#x5927;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50; 2 &#x578B;&#x7684;&#x591A;&#x514B;&#x9686; helper T (TH) &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x8FD9;&#x5938;&#x5F20;&#x7684; TH2 &#x5206;&#x5316;&#x9020;&#x6210;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x55DC;&#x9178;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x591A;&#x548C;&#x5927;&#x91CF;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x8840;&#x6D46;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; E &#x548C; G1 isotypes&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x77DB;&#x76FE;&#x7684;&#x8868;&#x578B;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x4E0E; TH &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x6001;&#x7684; LAT &#x89C4;&#x5B9A;&#x672A;&#x9884;&#x6599;&#x5230;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

T &#x5E2E;&#x52A9;&#x5668; 2 &#x578B;&#x514D;&#x75AB;&#x7684; LAT &#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;

The transmembrane protein LAT (linker for activation of T cells) couples the T cell receptor (TCR) to downstream signaling effectors. Mice homozygous for a mutation of a single LAT tyrosine residue showed impeded T cell development. However, later they accumulated polyclonal helper T (TH) cells that chronically produced type 2 cytokines in large amounts. This exaggerated TH2 differentiation caused tissue eosinophilia and massive maturation of plasma cells secreting to immunoglobulins of the E and G1 isotypes. This paradoxical phenotype establishes an unanticipated inhibitory function for LAT that is critical for the differentiation and homeostasis of TH cells.

Induction of T helper type 2 immunity by a point mutation in the LAT adaptor.

La prot&eacute;ine transmembranaire LAT (&eacute;diteur de liens pour l&#39;activation des cellules T) couple le r&eacute;cepteur des cellules T (TCR) &agrave; des effecteurs de signalisation en aval. Souris homozygotes pour la mutation d&#39;un seul r&eacute;sidu tyrosine LAT a montr&eacute; le d&eacute;veloppement des lymphocytes de T contr&ocirc;l&eacute;e. Cependant, plus tard ils ont accumulent cellules T (TH) helper polyclonal produit chroniquement des cytokines de type 2 en grandes quantit&eacute;s. Cette diff&eacute;renciation TH2 exag&eacute;r&eacute;e caus&eacute;e &eacute;osinophilie tissulaire et la maturation massive des plasmocytes s&eacute;cr&eacute;tant des immunoglobulines d&#39;isotypes d&#39;E et G1. Ce ph&eacute;notype paradoxal &eacute;tablit une fonction inhibitrice impr&eacute;vue pour LAT est critique pour la diff&eacute;renciation et l&#39;hom&eacute;ostasie des lymphocytes TH.

Induction de T helper de type 2 l&#39;immunit&eacute; par une mutation ponctuelle dans l&#39;adaptateur de table des adresses locales.

Die Induktion von T-Helfer-Typ-2-Immunit&#xE4;t durch eine Punktmutation in der LAT-Adapter.

La proteina transmembrana LAT (linker per l&#39;attivazione delle cellule T) coppie il recettore delle cellule T (TCR) a effettori a valle di segnalazione. Topi omozigoti per una mutazione di un singolo residuo di tirosina LAT ha mostrato lo sviluppo delle cellule T impedimento. Tuttavia, pi&ugrave; successivamente hanno accumulato le cellule T (TH) helper policlonali che cronicamente prodotte citochine di tipo 2 in grandi quantit&agrave;. Questa differenziazione TH2 esagerata causato tessuto eosinofilia e maturazione massiccia di plasmacellule secernenti di immunoglobuline degli isotipi E e G1. Questo fenotipo paradossale stabilisce una funzione inibitoria imprevista per LAT che &egrave; fondamentale per la differenziazione e l&#39;omeostasi delle cellule TH.

Induzione di T helper tipo 2 immunit&agrave; da una mutazione puntiforme nell&#39;adattatore LAT.

&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; LAT (&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;) T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TCR&#xFF09; &#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x306B;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x4E00; LAT &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306F;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x80B2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x5F8C;&#x3067;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x6162;&#x6027;&#x7684; 2 &#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x91CF;&#x751F;&#x7523;&#x30DD;&#x30EA;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CA;&#x30EB; &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC; T (TH) &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5927;&#x3052;&#x3055;&#x306A; th2 &#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x597D;&#x9178;&#x7403;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30DE; E &#x3068; G1 &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9006;&#x8AAC;&#x7684;&#x306A;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073; TH &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059; LAT &#x306E;&#x4E88;&#x60F3;&#x5916;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LAT &#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x70B9;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B; T &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC; 2 &#x578B;&#x514D;&#x75AB;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;

&#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC704;&#xB3C4; (T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB9C1;&#xCEE4;) &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xB97C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; (TCR) &#xCEE4;&#xD50C;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC704;&#xB3C4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; homozygous &#xBE44;&#xB2A5;&#xB960;&#xC801;&#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB098;&#xC911; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB9CC;&#xC131; 2 &#xD615; cytokines &#xB2E4;&#xB7C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; polyclonal &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; T (TH) &#xC138;&#xD3EC; &#xCD95;&#xC801;. &#xACFC;&#xC7A5;&#xB41C;&#xC774; TH2 &#xBD84;&#xD654; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC870;&#xC9C1; eosinophilia &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0; E&#xC640; g 1 isotypes&#xC758; &#xC740;&#xB2C9; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xB9C8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC131;&#xC219;. &#xC5ED;&#xC124;&#xC801; &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC0F; TH &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xC704;&#xB3C4; &#xB300; &#xD55C; &#xC608;&#xC0C1;&#xCE58; &#xAE08;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC704;&#xB3C4; &#xC5B4;&#xB311;&#xD130;&#xC5D0; &#xC810; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; 2 &#xD615; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4;.

La prote&iacute;na transmembrana LAT (vinculador para la activaci&oacute;n de c&eacute;lulas T) acopla el receptor T (TCR) a efectores de se&ntilde;alizaci&oacute;n aguas abajo. Ratones homocig&oacute;ticos para una mutaci&oacute;n de un solo residuo de tirosina LAT mostraron un desarrollo obstaculizado T cell. Sin embargo, m&aacute;s tarde acumularon linfocitos policlonales de T (TH) que cr&oacute;nico producen citocinas tipo 2 en grandes cantidades. Esta diferenciaci&oacute;n de TH2 exagerada caus&oacute; eosinof&iacute;lia del tejido y maduraci&oacute;n masiva de c&eacute;lulas plasm&aacute;ticas secretoras de inmunoglobulinas de los isotipos E y G1. Este fenotipo parad&oacute;jica establece una funci&oacute;n inhibitoria imprevista para LAT que es cr&iacute;tico para la diferenciaci&oacute;n y la homeostasis de TH.

Inducci&oacute;n de la inmunidad de tipo 2 T ayudante por una mutaci&oacute;n de punto en el adaptador LAT.

LAT (&#x94FE;&#x63A5;&#x5668;&#x4E3A;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09; &#x5BF9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D7;&#x4F53;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x7EAF;&#x5408;&#x4E09; C &#x7EC8;&#x7AEF; LAT &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x5C0F;&#x9F20;&#x663E;&#x793A;&#x5757; alphabeta T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x90E8;&#x5206;&#x53D7;&#x635F;&#x7684; gammadelta T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x65E0;&#x6545;&#x610F;&#x514D;&#x75AB;&#x63A5;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x79EF;&#x7D2F; gammadelta T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x813E;&#x810F;&#x548C;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#xFF0C;&#x957F;&#x671F;&#x5236;&#x4F5C;&#x91CF;&#x5F88;&#x5927;&#xFF0C;T &#x5E2E;&#x52A9;&#x5668; 2 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x9020;&#x6210;&#x8840;&#x6D46;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x514D;&#x75AB;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6210;&#x719F; E (IgE) &#x548C; IgG1&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; alphabeta &#x6CBF;&#x88AD;&#x4E2D;&#x6D89;&#x53CA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; LAT &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x7A81;&#x53D8;&#x6240;&#x89E6;&#x53D1;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;LAT &#x662F;&#x57FA;&#x672C;&#x8C03;&#x8282; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x6001;&#x548C;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

LAT &#x89C4;&#x7BA1; gammadelta T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x6001;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

LAT (linker for activation of T cells) is essential for T cell receptor signaling. Mice homozygous for a mutation of the three C-terminal LAT tyrosine residues showed a block in alphabeta T cell development and a partially impaired gammadelta T cell development. Without intentional immunization, they accumulated gammadelta T cells in the spleen and lymph nodes that chronically produced T helper type 2 cytokines in large amounts, and caused the maturation of plasma cells secreting immunoglobulin E (IgE) and IgG1. These effects are very similar to that triggered in the alphabeta lineage by a mutation involving a distinct LAT tyrosine. Thus, LAT is an essential regulator of T cell homeostasis and terminal differentiation.

LAT regulates gammadelta T cell homeostasis and differentiation.

LAT (&eacute;diteur de liens pour l&#39;activation des cellules T) est essentiel pour la signalisation de r&eacute;cepteur de cellules T. Souris homozygotes pour une mutation des trois r&eacute;sidus tyrosine C-terminal LAT a montr&eacute; un bloc dans le d&eacute;veloppement des lymphocytes T alphabeta et un d&eacute;veloppement des lymphocytes T gammadelta partiellement alt&eacute;r&eacute;e. Sans vaccination volontaire, ils ont accumulent gammadelta T des cellules de la rate et les ganglions lymphatiques qui chroniquement produit T helper des cytokines de type 2 en grandes quantit&eacute;s et provoqu&eacute; la maturation des plasmocytes s&eacute;cr&eacute;tant des immunoglobulines E (IgE) et IgG1. Ces effets sont tr&egrave;s semblables &agrave; celle d&eacute;clench&eacute;e dans la lign&eacute;e d&#39;alphabeta par une mutation impliquant une tyrosine LAT distincte. Ainsi, LAT est un r&eacute;gulateur essentiel de l&#39;hom&eacute;ostasie des lymphocytes T et de la diff&eacute;renciation terminale.

LAT r&eacute;glemente la diff&eacute;renciation et l&#39;hom&eacute;ostasie des lymphocytes T gammadelta.

LAT regelt gammadelta T-Zell-Hom&#xF6;ostase und Differenzierung.

LAT (linker per l&#39;attivazione delle cellule T) &egrave; essenziale per T cell receptor signaling. Topi omozigoti per una mutazione dei tre residui di tirosina LAT C-terminale ha mostrato un blocco nello sviluppo di cellule T Alfabeta e uno sviluppo di cellule T gammadelta parzialmente compromessa. Senza immunizzazione intenzionale, hanno accumulato gammadelta T cellule nella milza e linfonodi cronicamente T helper tipo 2 citochine in grandi quantit&agrave; di prodotto, che ha causato la maturazione di plasmacellule secernenti immunoglobuline E (IgE) e IgG1. Questi effetti sono molto simili a quello innescato nel lignaggio alphabeta da una mutazione che coinvolge una tirosina LAT distinto. Cos&igrave;, LAT &egrave; un regolatore essenziale dell&#39;omeostasi delle cellule T e la differenziazione terminale.

LAT regola la differenziazione e l&#39;omeostasi delle cellule T gammadelta.

LAT (&#x30EA;&#x30F3;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;) &#x306F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3059;&#x3002;3 LAT C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x30DB;&#x30E2;&#x63A5;&#x5408;&#x4F53;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; alphabeta T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x8005;&#x306E; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x8A8D;&#x3081;&#x305F;.&#x610F;&#x56F3;&#x7684;&#x306A;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x306A;&#x3057;&#x5F7C;&#x3089; &gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x813E;&#x81D3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306F;&#x6162;&#x6027;&#x7684; T &#x30D8;&#x30EB;&#x30D1;&#x30FC; 2 &#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x91CF;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x8840;&#x6F3F;&#x514D;&#x75AB;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x84C4;&#x7A4D; E &#xFF08;ige &#x6297;&#x4F53;&#xFF09; &#x3068; IgG1&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B; alphabeta &#x8840;&#x7D71;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308B; LAT &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;LAT T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

LAT &#x306B;&#x306F;&#x3001;&gamma;&delta; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B7;&#x30B9;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC704;&#xB3C4; (T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB9C1;&#xCEE4;) T &#xC138;&#xD3EC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950; homozygous 3 &#xB2E8;&#xC790; &#xC704;&#xB3C4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; alphabeta T &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC7A5;&#xC560; gammadelta T &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC758;&#xB3C4;&#xC801;&#xC778; &#xC608;&#xBC29;&#xC811;&#xC885; &#xC5C6;&#xC774; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xCD95;&#xC801; &#xB41C; &#xBE44;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; &#xB9CC;&#xC131; &#xB2E4;&#xB7C9;, T &#xB3C4;&#xC6B0;&#xBBF8; 2 &#xD615; cytokines&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE00;&#xB85C;&#xBD88;&#xB9B0;&#xC744; &#xBD84; &#xBE44; &#xD50C;&#xB77C;&#xC988;&#xB9C8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC219; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; gammadelta T &#xC138;&#xD3EC; (IgE)&#xAC00;&#xC640; IgG1. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC704;&#xB3C4; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC758;&#xD574; alphabeta &#xD608;&#xD1B5;&#xC5D0; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB418;&#xB294; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC704;&#xB3C4; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBC0F; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD544;&#xC218; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;.

LAT gammadelta T &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131; &#xBC0F; &#xBD84;&#xD654; &#xC870;&#xC808;.

LAT (vinculador para la activaci&oacute;n de c&eacute;lulas T) es esencial para el receptor de c&eacute;lulas T de se&ntilde;alizaci&oacute;n. Ratones homocig&oacute;ticos para una mutaci&oacute;n de los residuos de tirosina c-terminal LAT tres mostraron un bloque en desarrollo de la c&eacute;lula de T de alphabeta y un desarrollo de c&eacute;lulas T del gammadelta parcialmente deteriorada. Sin inmunizaci&oacute;n intencional, acumularon las c&eacute;lulas de T del gammadelta en el bazo y los ganglios linf&aacute;ticos que cr&oacute;nico producido T helper tipo 2 citoquinas en grandes cantidades y caus&oacute; la maduraci&oacute;n de las c&eacute;lulas plasm&aacute;ticas secretoras de inmunoglobulina E (IgE) y IgG1. Estos efectos son muy similares a las que desencaden&oacute; en el linaje de alphabeta por una mutaci&oacute;n que implica una tirosina LAT distinta. As&iacute;, LAT es un regulador esencial de la homeostasis celular T y diferenciaci&oacute;n terminal.

LAT regula la diferenciaci&oacute;n y la homeostasis de la c&eacute;lula de T gammadelta.

&#x9002;&#x914D;&#x5668;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20; NK T (NKT) &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x671F;&#x95F4; SAP &#xFF08;&#x4FE1;&#x53F7;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;) &#x64AD;&#x653E;&#x7740;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728; CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;SAP &#x4E0E;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6FC0;&#x9176; Fyn&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8BF1;&#x5BFC; TCR Th2 &#x578B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x751F;&#x4EA7;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x662F;&#x5426;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; SAP &#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x63A7;&#x5236; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2A;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x5176;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Fyn&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E; OP9 DL1 &#x7CFB;&#x7EDF;&#x542F;&#x52A8;&#x5C0F;&#x9F20; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x7684; SAP &#x7ED3;&#x6784;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x542B;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (WT) &#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x77AC;&#x6001;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242; &alpha;-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;&#x548C;&#x5176;&#x6A21;&#x62DF; PBS57 &#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;Sap(-/-) &#x7EC6;&#x80DE;&#x672A;&#x80FD;&#x5F15;&#x8D77; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5176;&#x53D1;&#x5C55;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6551;&#x8D77; WT SAP &#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x4E5F;&#x6062;&#x590D;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7248;&#x672C;&#x7684; SAP &#xFF08;SAP R78A&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Fyn&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0E;&#x8F83;&#x5C11;&#x6BD4; WT SAP &#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#x88AB;&#x52A0;&#x5267;&#x4F53;&#x5185; Sap(R78A) &#x4EE5;&#x53CA; Sap(R78A) &#x7ADE;&#x4E89;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x5D4C;&#x5408;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x7559; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x4EBA;&#x6570;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x7206;&#x9707;&#x5C0F;&#x9F20;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7684;&#x63A7;&#x4EF6;&#x3002;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; Sap(R78A) CD4(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-4 &#x4E4B;&#x540E; TCR &#x7ED3;&#x624E;&#x3001; &alpha;-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x795E;&#x7ECF;&#x9170;&#x80FA;&#x523A;&#x6FC0; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECE;&#x809D;&#x810F;&#x548C;&#x813E;&#x810F;&#x4E2D; Sap(R78A) &#x5C0F;&#x9F20;&#x4EA7;&#x751F; Th2 &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x65B9;&#x5F0F;&#x6A21;&#x4EFF; WT &#x7EC6;&#x80DE; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;SAP &#x4F3C;&#x4E4E;&#x5728; NKT &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x5DEE;&#x5206;&#x4FE1;&#x53F7;&#x673A;&#x5236;&#x4E0E;&#x6700;&#x4F18;&#x4E2A;&#x4F53;&#x53D1;&#x80B2;&#x9700;&#x8981; Fyn &#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x8BBA;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4EA4;&#x4E92;&#x529F;&#x80FD;&#x53CD;&#x5E94;&#x53D1;&#x751F;&#x3002;

SAP Fyn &#x4E92;&#x52A8;&#x671F;&#x95F4; NK T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;

The adaptor molecule SAP (signaling lymphocytic activation molecule-associated protein) plays a critical role during NK T (NKT) cell development in humans and mice. In CD4(+) T cells, SAP interacts with the tyrosine kinase Fyn to deliver signals required for TCR-induced Th2-type cytokine production. To determine whether the SAP-dependent signals controlling NKT cell ontogeny rely on its binding to Fyn, we used the OP9-DL1 system to initiate structure function studies of SAP in murine NKT cell development. In cultures containing wild-type (WT) hematopoietic progenitors, we noted the transient emergence of cells that reacted with the NKT cell-specific agonist alpha-galactosyl ceramide and its analog PBS57. Sap(-/-) cells failed to give rise to NKT cells in vitro; however, their development could be rescued by re-expression of WT SAP. Emergence of NKT cells was also restored by a mutant version of SAP (SAP R78A) that cannot bind to Fyn, but with less efficiency than WT SAP. This finding was accentuated in vivo in Sap(R78A) knock-in mice as well as Sap(R78A) competitive bone marrow chimeras, which retained NKT cells but at significantly reduced numbers compared with controls. Unlike Sap(R78A) CD4(+) T cells, which produce reduced levels of IL-4 following TCR ligation, alpha-galactosyl ceramide-stimulated NKT cells from the livers and spleens of Sap(R78A) mice produced Th2 cytokines and activated NK cells in a manner mimicking WT cells. Thus, SAP appears to use differential signaling mechanisms in NKT cells, with optimal ontogeny requiring Fyn binding, while functional responses occur independently of this interaction.

Differential requirement for the SAP-Fyn interaction during NK T cell development and function.

La mol&eacute;cule de l&#39;adaptateur SAP (prot&eacute;ine associ&eacute;e &agrave; la mol&eacute;cule d&#39;activation lymphocytaire de signalisation) fois un r&ocirc;le essentiel au cours du d&eacute;veloppement des cellules NK T (NKT) chez les humains et les souris. Dans les cellules T CD4 +, SAP interagit avec la tyrosine kinase Fyn pour distribuer des signaux requis pour la production de cytokines de type Th2 induite par le TCR. Pour d&eacute;terminer si les signaux de SAP-d&eacute;pendants contr&ocirc;lant l&#39;ontogen&egrave;se des cellules NKT d&eacute;pendent de sa liaison &agrave; Fyn, nous avons utilis&eacute; le syst&egrave;me OP9-DL1 d&#39;entreprendre des &eacute;tudes sur la structure fonction de SAP dans le d&eacute;veloppement des cellules NKT murin. Dans des cultures contenant des prog&eacute;niteurs h&eacute;matopo&iuml;&eacute;tiques de type sauvage (WT), nous avons not&eacute; l&#39;apparition transitoire de cellules qui r&eacute;agissent avec l&#39;agoniste sp&eacute;cifique des cellules NKT alpha-galactosyl c&eacute;ramide et son analogue PBS57. Cellules de SAP(-/-) n&#39;a pas pas donner lieu &agrave; des cellules NKT in vitro ; Cependant, leur d&eacute;veloppement pourrait &ecirc;tre sauv&eacute;e par r&eacute;expression du WT SAP. &Eacute;mergence des cellules NKT fut &eacute;galement restaur&eacute;e par une version mutante de SAP (SAP R78A) qui ne peut pas lier &agrave; Fyn, mais avec moins d&#39;efficacit&eacute; que WT SAP. Cette constatation a &eacute;t&eacute; accentu&eacute;e in vivo chez la souris knock-in ainsi que Sap(R78A) concurrentiel moelle osseuse chim&egrave;res, qui a conserv&eacute; des cellules NKT, mais &agrave; un nombre sensiblement r&eacute;duit par rapport aux t&eacute;moins de Sap(R78A). Contrairement aux cellules T CD4 + Sap(R78A), qui produisent des niveaux r&eacute;duits d&#39;IL-4 apr&egrave;s ligature de TCR, alpha-galactosyl c&eacute;ramide stimul&eacute;e par des cellules NKT depuis le foie et la rate de Sap(R78A) souris produites Th2 cytokines et activ&eacute; de mani&egrave;re imitant les cellules WT, les cellules NK. SAP semble donc d&#39;utiliser les m&eacute;canismes de signalisation diff&eacute;rentielles des cellules NKT, avec optimal ontog&eacute;nie n&eacute;cessitant la liaison de Fyn, tandis que les r&eacute;ponses fonctionnelles se produisent ind&eacute;pendamment de cette interaction.

Exigence de diff&eacute;rentiel pour l&#39;interaction de SAP-Fyn durant le d&eacute;veloppement des cellules NK T et de la fonction.

Das Adapter-Molek&uuml;l SAP (Signalisierung lymphozyt&auml;ren Aktivierung Molek&uuml;l-assoziiertes Protein) spielt eine entscheidende Rolle bei NK T (NKT)-Zell-Entwicklung bei Menschen und M&auml;usen. In CD4(+) T-Zellen interagiert SAP mit der Tyrosin-Kinase-Fyn, Signale f&uuml;r eine TCR-induzierten Th2-Typ Cytokine Produktion zu liefern. Um festzustellen, ob die SAP-abh&auml;ngige Signale Steuern NKT Zelle Ontogenese auf seine Bindung an Fyn verlassen, haben wir OP9-DL1-System verwendet, Studien der Struktur-Funktion von SAP in murinen NKT-Zell-Entwicklung zu initiieren. In Kulturen mit Wildtyp (WT) h&auml;matopoetische Vorl&auml;uferzellen haben wir festgestellt, das vor&uuml;bergehende entstehen Zellen, die mit der NKT zellspezifische Agonist Alpha-Galaktosyltransferase Ceramide und seine analoge PBS57 reagiert. SAP(-/-) Zellen konnte NKT-Zellen in vitro hervorrufen; jedoch konnte ihre Entwicklung durch Re-expression WT SAP gerettet zu werden. Entstehung der NKT-Zellen wurde auch durch eine mutierte Version von SAP (SAP R78A) wiederhergestellt, die Fyn, aber mit weniger Wirkungsgrad als WT SAP binden kann. Diese Erkenntnis wurde in vivo Sap(R78A) akzentuiert, Knock-in-M&auml;use sowie Sap(R78A) wettbewerbsf&auml;hige Knochenmark Chim&auml;ren, NKT Zellen beibehalten aber bei deutlich reduzierten Zahlen mit Kontrollen verglichen. Im Gegensatz zu Sap(R78A) CD4(+) T-Zellen produzieren die reduzierte Ebenen von IL-4 nach TCR Ligaturen, Alpha-Galaktosyltransferase Ceramid-stimuliert NKT Zellen aus der Leber und Milz Sap(R78A) M&auml;use produziert Th2 Zytokine und NK-Zellen in einer Weise, die Nachahmung von WT-Zellen aktiviert. So scheint SAP differenzielle Signalisierungsmechanismen in NKT-Zellen, mit optimalen Ontogenese erfordern Fyn-Bindung, w&auml;hrend funktionelle Reaktionen, unabh&auml;ngig von dieser Interaktion auftreten verwenden.

Differenzielle Basis f&uuml;r SAP-Fyn Interaktion w&auml;hrend NK T-Zell-Entwicklung und Funktion.

La molecola di adattatore SAP (segnalazione molecola-associated protein attivazione linfocitaria) gioca un ruolo fondamentale durante lo sviluppo delle cellule NK T (NKT) nell&#39;uomo e nei topi. Nelle cellule T CD4(+), SAP interagisce con la tirosina chinasi Fyn per fornire segnali necessari per la produzione di citochine di tipo Th2 TCR-indotta. Per determinare se i segnali di SAP-dipendente controllando ontogenesi delle cellule NKT si basano sulla sua associazione a Fyn, abbiamo utilizzato il sistema OP9-DL1 per avviare studi di funzione di struttura di SAP in sviluppo di cellule NKT murino. Colture contenenti progenitrici ematopoietiche wild-type (WT), abbiamo notato la comparsa transitoria di cellule che hanno reagito con il NKT-specifico agonista alfa-galattosil ceramide e sua PBS57 analogico. SAP(-/-) cellule non &egrave; riuscite a dare origine a cellule NKT in vitro; Tuttavia, lo sviluppo potrebbe essere salvato dalla riespressione di SAP WT. Emersione delle cellule NKT fu restaurato anche da una versione mutante del SAP (SAP R78A) che non &egrave; possibile associare a Fyn, ma con minore efficienza rispetto a SAP WT. Questa constatazione &egrave; stata accentuata in vivo in topi knock-in oltre Sap(R78A) competitivo del midollo osseo chimere, che hanno mantenuto le cellule NKT ma a numeri significativamente ridotti rispetto ai controlli Sap(R78A). A differenza delle cellule T CD4(+) Sap(R78A), che producono riduzione dei livelli di IL-4 dopo legatura TCR, alfa-galattosil ceramide-stimolato NKT le cellule dal fegato e milza di Sap(R78A) topi prodotti citochine Th2 e attivazione delle cellule NK in un modo che mimano le cellule WT. Cos&igrave;, SAP sembra utilizzare meccanismi di segnalazione differenziale nelle cellule NKT, con ottimale ontogenesi che richiedono l&#39;associazione di Fyn, mentre le risposte funzionali si verificano indipendentemente da questa interazione.

Differenziale requisito per l&#39;interazione di SAP-Fyn durante lo sviluppo delle cellule NK T e la funzione.

&#x30A2;&#x30C0;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x5206;&#x5B50; SAP (&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x95A2;&#x9023;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;) &#x6F14;&#x5287;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x4EBA;&#x9593;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; NK T &#xFF08;NKT&#xFF09; &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x3002;CD4(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; SAP TCR &#x8A98;&#x8D77; Th2 &#x578B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; &#x30D5;&#x30E5;&#x30F3;&#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x500B;&#x4F53;&#x767A;&#x751F;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B; SAP &#x4F9D;&#x5B58;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x30D5;&#x30E5;&#x30F3;&#x306B;&#x983C;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x5224;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061; SAP &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B; OP9 DL1 &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;WT&#xFF09; &#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6587;&#x5316;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x904E;&#x6E21; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x7279;&#x7570;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B7;&#x30EB; &#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E; PBS57 &#x3068;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3092;&#x6307;&#x6458;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Sap(-/-) &#x7D30;&#x80DE;&#x306F; in vitro &#x306E; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;WT SAP &#x306E;&#x9006;&#x8EE2;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6551;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x30D5;&#x30E5;&#x30F3;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3088;&#x308A;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x52B9;&#x7387;&#x3088;&#x308A; WT SAP &#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093; SAP (SAP R78A) &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FA9;&#x5143;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F; in vivo Sap(R78A) &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A4;&#x30F3; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301; Sap(R78A) &#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x6570;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3067;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Sap(R78A) CD4(+) T &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;WT &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6A21;&#x5023;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; NK &#x7D30;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x6B21; TCR &#x7D50;&#x7D2E;, &#x30A2;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1; &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30B7;&#x30EB; &#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#x523A;&#x6FC0; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x809D;&#x81D3;&#x3068;&#x813E;&#x81D3; Sap(R78A) &#x751F;&#x7523;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; Th2 &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; IL-4 &#x306E;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;SAP &#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x53CD;&#x5FDC;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3001;&#x30D5;&#x30E5;&#x30F3; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x9069;&#x306E;&#x500B;&#x4F53;&#x767A;&#x751F;&#x3068; NKT &#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5DEE;&#x52D5;&#x4FE1;&#x53F7;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SAP &#x30D5;&#x30E5;&#x30F3;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; NK T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5DEE;&#x5206;&#x8981;&#x4EF6;&#x3002;

&#xC5B4;&#xB311;&#xD130; &#xBD84;&#xC790; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; NK T (NKT) &#xC140; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; (&#xC2E0;&#xD638; &#xB9BC;&#xD504;&#xBAA8;&#xAD6C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xBD84;&#xC790; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) &#xC5F0;&#xADF9; SAP. CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; SAP&#xB294; TCR &#xC720;&#xB3C4; Th2 &#xC720;&#xD615; cytokine &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; Fyn &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. OP9 DL1 &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; SAP &#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638; &#xC81C;&#xC5B4; NKT &#xC138;&#xD3EC; ontogeny Fyn&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC758;&#xC874; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xD655;&#xC778; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; murine NKT &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; SAP&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791; &#xD558;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; (WT) &#xC870; &#xD608; progenitors&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; NKT &#xC138;&#xD3EC; &#xBCC4; &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C; &#xC54C;&#xD30C;-galactosyl &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; PBS57 &#xBC18;&#xC751; &#xC140;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801; &#xCD9C;&#xD604;&#xC744; &#xC9C0;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4;. Sap(-/-) &#xC140; NKT &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678;;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; WT SAP&#xC758; &#xD45C;&#xC815;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xCD9C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. NKT &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xB610;&#xD55C; Fyn, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; WT SAP &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC801;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; (SAP R78A) SAP&#xC758; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xCCB4; &#xBC84;&#xC804;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xCC3E;&#xB294; NKT &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC9C0; Sap(R78A) &#xACBD;&#xC7C1; &#xACE8; &#xD0A4;&#xBA54;&#xB77C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD55C; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0; &#xB178;&#xD06C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; sap(r78a)&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC9C0;&#xAE30;&#xB3C4; &#xD588;&#xB2E4;. Sap(R78A) CD4(+) T &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC;&#xB294; IL-4 TCR &#xACB0; &#xCC30;, &#xC54C;&#xD30C;-galactosyl &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; &#xC774;&#xB4DC; &#xC790;&#xADF9; NKT &#xC138;&#xD3EC; &#xAC04; &#xBC0F; Sap(R78A) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0; Th2 cytokines&#xC758; spleens &#xACE0; WT &#xC140;&#xC744; &#xD749;&#xB0B4; &#xB0B8; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; NK &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, SAP &#xAE30;&#xB2A5; &#xC751;&#xB2F5;&#xC774;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Fyn &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC694;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; ontogeny&#xC640; NKT &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xCC28;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xD638; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

NK T &#xC804;&#xC9C0; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; SAP Fyn &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC28;&#xB4F1; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La mol&eacute;cula de adaptador SAP (se&ntilde;alizaci&oacute;n prote&iacute;na asociada a mol&eacute;cula de activaci&oacute;n linfoc&iacute;tica) juega un papel fundamental durante el desarrollo de las c&eacute;lulas NK T (NKT) en humanos y ratones. En las c&eacute;lulas T CD4, SAP interact&uacute;a con la tirosina kinasa Fyn para entregar se&ntilde;ales necesarias para la producci&oacute;n de citocinas tipo Th2 inducida por el TCR. Para determinar si las se&ntilde;ales basadas en SAP controla la ontogenia de c&eacute;lula NKT dependen de su uni&oacute;n a Fyn, utilizamos el sistema OP9-DL1 para iniciar estudios de funci&oacute;n de la estructura de SAP en el desarrollo de las c&eacute;lulas NKT murino. En las culturas que contiene de progenitores hematopoy&eacute;ticos de wild-type (WT), observamos la aparici&oacute;n transitoria de c&eacute;lulas que reaccion&oacute; con la NKT celular inespec&iacute;fico agonista alfa-galactosil Ceramida y su an&aacute;logo PBS57. Las c&eacute;lulas SAP(-/-) no pudieron dar lugar a c&eacute;lulas NKT in vitro; sin embargo, su desarrollo podr&iacute;a ser rescatado por reexpresi&oacute;n de SAP WT. Aparici&oacute;n de c&eacute;lulas NKT tambi&eacute;n fue restaurada por una versi&oacute;n mutante de SAP (SAP R78A), el cual no se puede enlazar a Fyn, pero con menos eficacia que SAP WT. Este hallazgo se acentu&oacute; en vivo en Sap(R78A) ratones knock-in as&iacute; como Sap(R78A) competitivo m&eacute;dula quimeras, que conservan las c&eacute;lulas NKT pero en n&uacute;meros reducidos significativamente en comparaci&oacute;n con controles. A diferencia de las c&eacute;lulas T CD4 de Sap(R78A), que producen la reducci&oacute;n de los niveles de IL-4 tras ligadura de TCR, c&eacute;lulas alfa-galactosil de ceramida-estimulado NKT de los h&iacute;gados y bazos de Sap(R78A) ratones producidas Th2 citoquinas y activa las c&eacute;lulas NK de manera imitando las c&eacute;lulas WT. As&iacute;, SAP parece utilizar mecanismos de se&ntilde;alizaci&oacute;n diferenciales en c&eacute;lulas NKT, con &oacute;ptima ontogenia que requieren vinculante de Fyn, mientras que las respuestas funcionales se producen independientemente de esta interacci&oacute;n.

Requisito diferencial para la interacci&oacute;n de SAP-Fyn durante el desarrollo de las c&eacute;lulas NK T y la funci&oacute;n.

Endosialin/TEM1 &#x4E3B;&#x8981;&#x88AB;&#x5BF9;&#x65B0;&#x751F;&#x8840;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x9002;&#x5408;&#x8BCA;&#x65AD;&#x3001; &#x6709;&#x9488;&#x5BF9;&#x6027;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x764C;&#x75C7;&#x3002;&#x8981;&#x9694;&#x79BB; TEM1 &#x7279;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x548C;&#x8BD5;&#x5242;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6240;&#x5F97;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B; &#x8840;&#x6813;&#x6027;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x51CF;&#x5C11;&#x6027;&#x7D2B;&#x765C; (TTP) &#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5DE5;&#x7A0B;&#x6297;&#x4F53; (&#x6297;&#x4F53;) &#x5E93;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x53EF;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x81EA;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x5E93;&#x5EFA;&#x6210;&#x901A;&#x8FC7;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4; M13 &#x566C;&#x83CC;&#x4F53;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x663E;&#x793A;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x8F7D;&#x4F53; pAGA2 &#x6700;&#x521D;&#x8868;&#x793A; TTP &#x75C5;&#x4EBA;&#x6C47;&#x8F91; &#x300B;&#x3002;TTP &#x9175;&#x6BCD;&#x663E;&#x793A;&#x5E93; &#xFF08;10&#x2079; &#x6210;&#x5458;&#xFF09; &#x7531;&#x78C1;&#x5C4F;&#x853D;&#x548C;&#x6D41;&#x52A8;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B; TEM1 &#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8FDB;&#x884C;&#x6392;&#x5E8F;&#x3002;&#x6C60;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x663E;&#x793A;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x80FD;&#x591F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x51FA; 2nM TEM1 &#x662F;&#x83B7;&#x5F97;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x672C;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x9175;&#x6BCD;&#x5206;&#x6CCC;&#x6297;&#x4F53;&#x53D8;&#x6210; p416 BCCP &#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;&#x5206;&#x6CCC;&#x7D20;&#x5355;&#x94FE;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x6297; TEM1 &#x9175;&#x6BCD;&#x5206;&#x6CCC;&#x6297;&#x4F53;&#x72EC;&#x7ACB;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x9176;&#x8054;&#x514D;&#x75AB;&#x5438;&#x9644;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x4F53;&#x5185;&#x7D20;&#x5728; N-&#x603B;&#x7AD9;&#x4EA7;&#x751F; biobodies&#x3002;Biobody-78 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5177;&#x4F53;&#x5230; Endosialin TEM1 &#x8868;&#x793A;&#x5375;&#x5DE2;&#x80BF;&#x7624;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x4E0E;&#x529F;&#x80FD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8D85;&#x8FC7; 48 &#x5C0F;&#x65F6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6211;&#x4EEC;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x663E;&#x793A;&#x5206;&#x6CCC;&#x9175;&#x6BCD;&#x5E93;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8BD5;&#x5242;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x5E73;&#x53F0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD; TEM1 biobody-78 &#x80FD;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5916;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5305;&#x62EC;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x76EE;&#x6807;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;

&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x8840;&#x7BA1;&#x6807;&#x5FD7;&#x4F7F;&#x7528;&#x6210;&#x5BF9;&#x7684;&#x9175;&#x6BCD;-&#x663E;&#x793A;/&#x5206;&#x6CCC;&#x6297;&#x4F53;&#x5E93;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684; Endosialin/TEM1 &#x4EBA;&#x7C7B;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x5206;&#x79BB;&#x3002;

Endosialin/TEM1 is predominantly expressed on neovasculature, thus ideally suited for diagnostic, targeted imaging and therapy of cancer. To isolate TEM1-specific affinity reagents, we thought to screen a recombinant antibody (scFv) library derived from the repertoire of a patient with thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP), as autoimmune disorders may produce self-reactive specificities. The yeast-display scFv library was constructed by homologous recombination of the TTP patient repertoire originally expressed on M13 bacteriophage in the novel vector pAGA2 for yeast-display expression. The TTP yeast-display library (10â¹ members) was screened by magnetic and flow sorting with human TEM1 recombinant protein. A pool of yeast-display scFv able to detect 2nM of TEM1 was obtained and transformed into yeast-secreted scFv by homologous recombination using the novel p416 BCCP vector for yeast secretion of biotinylated scFv. Anti-TEM1 yeast-secreted scFv were independently validated in vitro by flow cytometry analysis and ELISA assays, then in vivo biotinylated in N-termini to produce biobodies. Biobody-78 bound specifically to Endosialin/TEM1-expressing ovarian tumor in vivo, with functional stability over 48 h. Our results suggest that our novel paired display-secretory yeast libraries can serve as an ideal platform for the rapid isolation of high-affinity reagents, and that anti-TEM1 biobody-78 can be used for in vitro assays including flow cytometry analysis, as well as in vivo for targeted imaging and therapy of cancer.

Rapid isolation of high-affinity human antibodies against the tumor vascular marker Endosialin/TEM1, using a paired yeast-display/secretory scFv library platform.

Endosialin/TEM1 est principalement exprim&#xE9; sur n&#xE9;ovascularisation, ainsi id&#xE9;alement adapt&#xE9; pour le diagnostic, l&#x26;#39;imagerie cibl&#xE9;e et la th&#xE9;rapie du cancer. Pour isoler r&#xE9;actifs d&#x26;#39;affinit&#xE9; TEM1-sp&#xE9;cifiques, nous avons pens&#xE9; que pour cribler un anticorps recombinant (scFv) banque provenant du r&#xE9;pertoire d&#x26;#39;un patient avec purpura thrombotique thrombocytop&#xE9;nique (PTT), maladies auto-immunes comme peut produire autor&#xE9;actives sp&#xE9;cificit&#xE9;s. La levure-affichage scFv biblioth&#xE8;que a &#xE9;t&#xE9; construite par recombinaison homologue du r&#xE9;pertoire des patients TTP &#xE0; l&#x26;#39;origine exprim&#xE9;s sur bact&#xE9;riophage M13 dans le pAGA2 nouveau vecteur pour la levure-affichage d&#x26;#39;expression. Le TTP levure affichage de la biblioth&#xE8;que (10 &#x2079; membres) a &#xE9;t&#xE9; projet&#xE9; par tri magn&#xE9;tique et le flux avec l&#x26;#39;homme TEM1 prot&#xE9;ine recombinante. Une piscine de levure-affichage scFv capables de d&#xE9;tecter des 2nM TEM1 a &#xE9;t&#xE9; obtenu et transform&#xE9; en levure s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;e scFv par recombinaison homologue en utilisant la nouvelle P416 vecteur BCCP pour la s&#xE9;cr&#xE9;tion de la levure de scFv biotinyl&#xE9;. Anti-TEM1 levure s&#xE9;cr&#xE9;t&#xE9;e scFv ont &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9;s ind&#xE9;pendamment in vitro par cytom&#xE9;trie en flux et des dosages ELISA, puis in vivo biotinyl&#xE9; en N-terminales de produire biobodies. Biobody-78 li&#xE9;e sp&#xE9;cifiquement au Endosialin/TEM1-expressing tumeur ovarienne in vivo, avec la stabilit&#xE9; fonctionnelle de plus de 48 h. Nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que notre roman jumel&#xE9; biblioth&#xE8;ques levure affichage-s&#xE9;cr&#xE9;toires peut servir comme une plate-forme id&#xE9;ale pour l&#x26;#39;isolement rapide de haute affinit&#xE9; des r&#xE9;actifs, et que l&#x26;#39;anti-TEM1 biobody-78 peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour des essais in vitro, y compris l&#x26;#39;analyse par cytom&#xE9;trie en flux, ainsi que pour l&#x26;#39;imagerie in vivo cible et la th&#xE9;rapie du cancer.

Isolement rapide des anticorps de haute affinit&#xE9; de l&#x26;#39;homme contre le marqueur tumoral vasculaire Endosialin/TEM1, l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un Yeast-display/secretory jumel&#xE9;s ScFv Biblioth&#xE8;que plate-forme

Endosialin/TEM1 dr&uuml;ckt sich vorwiegend auf Neovasculature, somit ideal geeignet f&uuml;r Diagnose, gezielte Bildgebung und Therapie von Krebs. Um TEM1-spezifische Affinit&auml;t Reagenzien zu isolieren, dachten wir eine rekombinante (ScFv) Antik&ouml;rperbibliothek, abgeleitet aus dem Repertoire eines Patienten mit Thrombotisch-thrombozytopenische Purpura (TTP), den Bildschirm als Autoimmunst&ouml;rungen Selbstzersetzliche Besonderheiten produzieren k&ouml;nnen. Die Hefe-ScFv-Bibliothek wurde durch homologe Rekombination des Patienten TTP-Repertoires urspr&uuml;nglich auf M13 Bakteriophage in der neuartigen Vektor-pAGA2 f&uuml;r Hefe-Display Ausdruck ausgedr&uuml;ckt errichtet. Die TTP-Hefe-Anzeige-Bibliothek (10&#x2079; Mitglieder) wurde von magnetisch geschirmt und flie&szlig;en mit menschlichen TEM1 rekombinante Protein sortieren. Ein Pool von Hefe-Display ScFv erkennen 2nM von TEM1 abgerufen und durch homologe Rekombination mit dem neuartigen p416 BCCP f&uuml;r Hefe-Sekretion von biotinylierten ScFv in Hefe abgesondert ScFv umgewandelt wurde. Anti-TEM1 Hefe abgesondert ScFv wurden unabh&auml;ngig voneinander von Flow Cytometry Analyse in-vitro-validiert und ELISA-assays, dann in-vivo biotinylierten in N-Termini, Biobodies zu produzieren. Biobody-78 gebunden speziell auf Endosialin/TEM1-Ausdr&uuml;cken Eierstock Tumor in vivo mit funktionellen Stabilit&auml;t &uuml;ber 48 h. Unsere Ergebnisse deuten darauf hin, dass unsere neuartige gepaarten Display-sekretorischen Hefe-Bibliotheken k&ouml;nnen als eine ideale Plattform f&uuml;r die schnelle Isolierung von hoher Affinit&auml;t Reagenzien dienen, und die Anti-TEM1 Biobody-78 kann f&uuml;r in-vitro-Tests, einschlie&szlig;lich Flow Cytometry Analyse, als auch in-vivo f&uuml;r gezielte Bildgebung und Therapie von Krebserkrankungen.

Schnelle Isolierung von hoher Affinit&auml;t Antik&ouml;rper gegen den Tumor vaskul&auml;re Marker Endosialin/TEM1, mit eine gepaarten Hefe-Anzeige/sekretorischen ScFv-Bibliothek-Plattform.

Endosialin/TEM1 &egrave; espressa prevalentemente su neovasculature, quindi ideale per l&#39;imaging diagnostico, mirata e terapia del cancro. Per isolare i reagenti affinit&agrave; TEM1 specifici, abbiamo pensato a schermo una libreria di anticorpo ricombinante (scFv) derivata dal repertorio di un paziente con porpora trombotica trombocitopenica (TTP), come disturbi autoimmuni possono produrre AUTOREATTIVO specificit&agrave;. La biblioteca di scFv lievito-display &egrave; stata costruita da ricombinazione omologa del repertorio paziente TTP originariamente espresso sul batteriofago M13 nel romanzo vector pAGA2 per l&#39;espressione di lievito-display. La biblioteca di lievito-display TTP (10&#x2079; membri) &egrave; stato proiettato dal magnetico e flusso di ordinamento con proteina ricombinante umana TEM1. Un pool di lievito-display scFv in grado di rilevare 2nM di TEM1 fu ottenuto e trasformato in secreto lievito scFv dalla ricombinazione omologa utilizzando il romanzo p416 BCCP vettoriali per secrezione lievito di scFv biotinilato. ScFv anti-TEM1 secreto di lievito sono stati convalidati indipendentemente in vitro da analisi di citometria a flusso e dosaggi ELISA, poi in vivo biotinilato in N-termini per produrre biobodies. Biobody-78 associati in particolare al Endosialin/TEM1-esprimendo tumore ovarico in vivo, con stabilit&agrave; funzionale oltre 48 h. I nostri risultati suggeriscono che nostre biblioteche romanzo accoppiati display-secretiva lievito possono servire come piattaforma ideale per il rapido isolamento dei reagenti ad alta affinit&agrave;, e quello anti-TEM1 biobody-78 pu&ograve; essere usato per saggi in vitro, compresa l&#39;analisi di citometria a flusso, cos&igrave; come in vivo per imaging mirato e terapia del cancro.

Isolamento rapida degli anticorpi umani ad alta affinit&agrave; il marker tumorale vascolare Endosialin/TEM1, utilizzando una piattaforma di libreria scFv lievito-display/secretiva accoppiati.

Endosialin/TEM1&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x306A;&#x764C;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3001;&#x6A19;&#x7684;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x65B0;&#x751F;&#x8840;&#x7BA1;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; TEM1&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x75BE;&#x60A3;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x53CD;&#x5FDC;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x751F;&#x307F;&#x51FA;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x8840;&#x6813;&#x6027;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x6027;&#x7D2B;&#x6591;&#x75C5;&#xFF08;TTP&#xFF09;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x578B;&#x6297;&#x4F53;&#xFF08;scFv&#xFF09;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8003;&#x3048;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;scFv&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;pAGA2&#x3067;M13&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;TTP&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30EC;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TTP&#x9175;&#x6BCD;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#xFF08;10&#x2079;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;TEM1&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x78C1;&#x6C17;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x305F;&#x3002; TEM1&#x306E;2NM&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;scFv&#x306E;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;scFv&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x306A;p416 BCCP&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x9175;&#x6BCD;&#x5206;&#x6CCC;scFv&#x3092;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6297;TEM1&#x9175;&#x6BCD;&#x5206;&#x6CCC;scFv&#x306F;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;biobodies&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;N&#x672B;&#x7AEF;&#x3067;&#x30D3;&#x30AA;&#x30C1;&#x30F3;&#x5316;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x304A;&#x3088;&#x3073;ELISA&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Biobody-78&#x3001;48&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3001;in vivo&#x3067;Endosialin/TEM1-expressing&#x5375;&#x5DE3;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30DA;&#x30A2;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x9175;&#x6BCD;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x8A66;&#x85AC;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7406;&#x60F3;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6297;TEM1 biobody-78&#x3082;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x542B;&#x3080;in vitro&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x764C;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3002;

&#x30DA;&#x30A2;Yeast-display/secretory&#x305F;ScFv&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#xB7;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x816B;&#x760D;&#x8840;&#x7BA1;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;Endosialin/TEM1&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x30D2;&#x30C8;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x5358;&#x96E2;

Endosialin/tem1&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; neovasculature, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xB2E8;, &#xB300;&#xC0C1; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xD569;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. TEM1 &#xAD00;&#xB828; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC9C8;&#xD658; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; self-reactive &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; thrombotic thrombocytopenic &#xD608;&#xAD00; (TTP)&#xC640; &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xB808; &#xD37C; &#xD1A0;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD56D; &#xCCB4; (scFv) &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xD654;&#xBA74; &#xC0DD;&#xAC01;. &#xD6A8; &#xBAA8;-&#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; scFv &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC;&#xB294; &#xC6D0;&#xB798; &#xD6A8; &#xBAA8;-&#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xD45C;&#xD604; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBCA1;&#xD130; Paga2&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; M13 &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC624;&#xD30C;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; TTP &#xD658;&#xC790; &#xB808;&#xD30C;&#xD1A0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC74;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. TTP &#xD6A8; &#xBAA8;-&#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; (10&#x2079; &#xBA85;)&#xB294; &#xC790;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0C1;&#xC601; &#xBC0F; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; TEM1 &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC815;&#xB82C; &#xD750;&#xB984;. &#xD6A8; &#xBAA8;-&#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; scFv TEM1 2nM &#xC5BB;&#xC740; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD6A8; &#xBAA8; biotinylated Scfv&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18C;&#xC124; p416 BCCP &#xBCA1;&#xD130;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xBD84; &#xBE44; scFv &#xBCC0;&#xBAA8; &#xAC10;&#xC9C0;&#xD560; &#xC218; &#xD480;. &#xC548;&#xD2F0;-TEM1 &#xD6A8; &#xBAA8; &#xBD84; &#xBE44; scFv &#xD588;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC80;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0; &#xCCB4; &#xC678; &#xD750;&#xB984; cytometry &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; ELISA &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xC0DD;&#xC0B0; biobodies N-&#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC74C; biotinylated. Biobody-78 Endosialin/TEM1 &#xD45C;&#xD604; &#xB09C;&#xC18C; &#xC885;&#xC591; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC548;&#xC815;&#xC131; 48 h &#xC774;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xC9DD;&#xB41C; &#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774; &#xBD84; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD750;&#xB984; cytometry &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8; &#xC548;&#xD2F0;-TEM1 biobody-78 &#xC218; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC885;&#xC591; &#xD608;&#xAD00; &#xB9C8;&#xCEE4; Endosialin/TEM1, &#xC30D;&#xB41C; &#xD6A8; &#xBAA8;-&#xB514;&#xC2A4;&#xD50C;&#xB808;&#xC774;/&#xBD84; scFv &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC778;&#xAC04; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xACA9;&#xB9AC;.

Endosialin/TEM1 se expresa predominantemente en neovasculatura, por lo tanto ideal para diagn&#xF3;stico por imagen, espec&#xED;fica y la terapia del c&#xE1;ncer. Para aislar TEM1 reactivos espec&#xED;ficos de afinidad, pensamos que para que programen un anticuerpo recombinante (scFv) derivado de la biblioteca del repertorio de un paciente con p&#xFA;rpura trombocitop&#xE9;nica tromb&#xF3;tica (TTP), como trastornos autoinmunes pueden producir reacci&#xF3;n espont&#xE1;nea especificidades. La levadura-pantalla scFv biblioteca fue construido por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga del repertorio paciente TTP originalmente expresado en M13 bacteri&#xF3;fago en el vector de pAGA2 novedoso para la expresi&#xF3;n de levadura-pantalla. El TTP levadura visualizaci&#xF3;n de la biblioteca (10 &#x2079; miembros) se proyect&#xF3; por clasificaci&#xF3;n magn&#xE9;tica y fluir con TEM1 prote&#xED;na recombinante humana. Una piscina de scFv levadura-pantalla capaz de detectar 2 nM de TEM1 se obtuvo y se transform&#xF3; en levadura-secretada scFv por recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga con el nuevo vector p416 BCCP para la secreci&#xF3;n de la levadura de scFv biotinilado. Anti-TEM1 levadura secretada scFv fueron validados de forma independiente in vitro mediante an&#xE1;lisis de citometr&#xED;a de flujo y ELISA, y luego en vivo con biotina en el N-terminal para producir biobodies. Biobody-78 vinculado espec&#xED;ficamente a Endosialin/TEM1-expressing tumor de ovario in vivo, con la estabilidad funcional durante 48 h. Nuestros resultados sugieren que nuestro nuevo emparejado secretoras pantalla-bibliotecas de levadura puede servir como una plataforma ideal para el aislamiento r&#xE1;pido de alta afinidad reactivos, y que el anti-TEM1 biobody-78 puede ser utilizado para los ensayos in vitro, incluyendo el an&#xE1;lisis de citometr&#xED;a de flujo, as&#xED; como in vivo para obtener im&#xE1;genes de blanco y la terapia del c&#xE1;ncer.

Aislamiento r&#xE1;pida de anticuerpos de alta afinidad Humanos contra el marcador de tumor vascular Endosialin/TEM1, uso de un Yeast-display/secretory vinculados ScFv Plataforma Biblioteca

Selene Nunez-Cruz

Penn Ovarian Cancer Research Center,
Center for Research on Reproduction and Womans Health,
Department of Obstetrics and Gynecology,
Penn Ovarian Cancer Research Center, Center for Research on Reproduction and Womans Health, Department of Obstetrics and Gynecology

University of Pennsylvania-School of Medicine

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses