Iperinsulinemico-euglicemico pinza nei topi

Riepilogo

Il iperinsulinemico-euglicemico pinza è il "gold standard" per la valutazione dell'azione dell'insulina. L'insulina è infusa a velocità costante stimolo del glucosio. La quantità di glucosio esogeno infusa per contrastare questo calo è indice di sensibilità all'insulina. Ecco la procedura viene eseguita su un consapevole, ratto sfrenato.

Abstract

Diabete di tipo 2 (T2D) è in rapido aumento della prevalenza. Caratterizzata da produzione di insulina sia inadeguata o l'impossibilità di utilizzare l'insulina prodotta, i risultati T2D a elevati livelli di glucosio nel sangue. Il "gold-standard" nel valutare la sensibilità all'insulina è un iperinsulinemico-euglicemico morsetto o clamp insulina. In questa procedura, l'insulina è infusa a velocità costante con una conseguente diminuzione del glucosio nel sangue. Per mantenere la glicemia ad un livello costante, glucosio esogeno (D50) viene infusa nella circolazione venosa. La quantità di glucosio infusa per mantenere l'omeostasi è indice di sensibilità all'insulina. Qui vi mostriamo la procedura di base morsetto in cronicamente cateterizzati, sfrenato, ratto cosciente. Questo modello consente al sangue di essere raccolte con lo sforzo minimo per l'animale. Dopo l'induzione dell'anestesia, un'incisione mediana è fatto e l'arteria carotide comune sinistra e destra della vena giugulare sono cateterizzati. Cateteri inseriti sono lavata con soluzione salina eparinizzato, poi esteriorizzato e protetto. Gli animali sono ammessi a recuperare per 4-5 giorni prima di esperimenti, con aumento di peso monitorati giornalmente. Soltanto gli animali che per ritrovare il peso pre-intervento i livelli vengono utilizzati per gli esperimenti. Il giorno dell'esperimento, i ratti sono digiunato e collegati a pompe contenente insulina e D50. Glucosio al basale è valutata dalla linea arteriosa ed utilizzato un punto di riferimento per tutto l'esperimento (euglicemia). In seguito a questo, l'insulina è infusa a velocità costante nella circolazione venosa. Per abbinare il calo di glucosio nel sangue, D50 è infusa. Se il tasso di infusione D50 è superiore al tasso di assorbimento, un aumento del glucosio si verificherà. Allo stesso modo, se il tasso è insufficiente per soddisfare tutta l'assorbimento di glucosio del corpo, una goccia si verificherà. Titolazione di glucosio continua fino a letture del glucosio stabili sono realizzati. I livelli di glucosio e la velocità di infusione del glucosio durante questo periodo stabili sono registrati e riportati. Risultati forniscono un indice di sensibilità all'insulina tutto il corpo. La tecnica può essere raffinato per soddisfare specifiche esigenze sperimentali. E 'ulteriormente migliorata con l'uso di traccianti radioattivi che possono determinare il tessuto specifico di insulina glucosio-stimolata così come tutta fatturato glucosio corpo.

Protocollo

R: cateterizzazione chirurgica di circolazione venosa e arteriosa

Parte 1: catetere arterioso e venoso Preparazione

1. Tagliare 15 cm di PE-50 (diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 ") x un diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038"). Tagliare una sezione di tubo silastic 1 millimetro (0,76 mm (0.030 ") di diametro interno x 1,65 millimetri (0,065 ") di diametro esterno) per l'utilizzo come contenimento tallone. Il contenimento tallone impedisce al ratto di tirare fuori il catetere una volta che è a posto.
2. Inserire la punta delle micro dissettore nel lume del cordone frenare dolcemente e tenere le punte della pinza a parte per allungare l'apertura più ampio. Utilizzando un altro paio di micro dissettore, far scorrere il tubo silastic nel lume del contenimento tallone. Fissarlo con colla adesiva forte (Loctite Super Glue). Il tallone deve essere piatto intorno al catetere. Lasciare catetere a secco (24 ore).
3. Per un ratto 300 grammi, la linea arteria è ~ 2,7 centimetri dal tallone frenare mentre la linea giugulare è ~ 3,2 centimetri. Lunghezze catetere dalla frenanti sono regolati da 0,5 centimetri per ogni aumento di 100g di peso corporeo. Non smusso gli spigoli del catetere come questa puntura può nave nel corso di inserimento.
4. Immediatamente prima dell'intervento, riempire le linee con soluzione fisiologica eparinata (10U/ml), sigillare entrambe le estremità con un tappo di tubi in acciaio inox e il luogo in etanolo (70%) per sterilizzare. Aria secca prima dell'inserimento.

Parte 2: Preparazione Chirurgica

1. Procedure sono state approvate dalla University of Animal Care Calgary e Usa Comitato e rispettare theCanadian Association for Animal Science Laboratory linee guida per la sperimentazione. Le procedure descritte di seguito sono stati eseguiti su adulti, maschi Sprague-Dawley (~ 300g). Tutte le procedure vengono eseguite sotto isoflurano, anche se è possibile utilizzare anestetici iniettabili. Tutte le procedure chirurgiche vengono eseguite garantendo tecniche asettiche. Attrezzature chirurgiche, bicchieri e soluzione salina eparinata sono sterilizzati in autoclave. Guanti chirurgici, siringhe e applicatori di cotone sterilizzati punta vengono acquistati dal fornitore.
2. Pesare il ratto e registrare il risultato. Il peso sarà importante nel periodo post-chirurgico di monitoraggio degli animali. Solo gli animali che per ritrovare il peso pre-intervento i livelli dovrebbero essere utilizzati per la sperimentazione. Anestetizzare ratto (3% isoflurano) in una scatola di anestetico. Tenere il ratto a ~ 2% isoflurano durante l'intervento chirurgico utilizzando un cono. La chirurgia deve essere condotta in una zona disinfettata che promuove asepsi.
3. Preparare l'animale dalla depilazione del sito chirurgico (collo e scapole). Un tagliatore di capelli di piccole dimensioni o depilatori chimici possono essere utilizzati. Eseguire questa procedura in una zona separata dalla quale l'intervento deve essere effettuata.
4. Sicuro animale tavolo operatorio. Garantire animale è completamente anestetizzato controllando la presenza di piede / occhi riflessi. Preparare i siti chirurgici con un disinfettante appropriato pelle (70% etanolo seguita da betadine scrub seguito da 70% etanolo).

Parte 3: Chirurgia

1. Fai la piccola incisione verticale 1 centimetro linea mediana superiore allo sterno (Pick up della pelle longitudinalmente lungo l'asse mediano con una pinza e taglio con forbici o bisturi).
2. Blunt sezionare con micro dissettore per esporre il muscolo sternocleidomastoideo sinistro. Riflettere questo muscolo per esporre circa 1 cm della arteria carotide sinistra. Usa micro dissettore sotto carotide per tenere l'arteria in posizione. Delicatamente stuzzicare fuori del tessuto connettivo dalla carotide. E 'importante isolare il nervo vago dalla arteria senza danneggiare l'arteria e il nervo. Isolare l'arteria poi legare la fine cefalica con sutura in seta 4-0 (questo sarà usato per manipolare l'arteria carotide durante l'intervento chirurgico). Nota: 4-0 punti di sutura devono essere sterilizzati con etanolo al 70% prima dell'uso.
3. Bloccare il vaso con seghettato, micro dissezione pinze. Puntura alla fine legatura con un calibro 21 VENOJECT Multi-Sample adattatore Luer. Togliere il tappo tubi in acciaio inox e inserire con cautela catetere con l'ausilio di un introduttore catetere sterile ammetterlo nell'arteria. Assicurare il catetere è sicuro con le pinze, parzialmente rilascio micro dissettore bloccaggio l'arteria e continuare a inserire il catetere per il tallone. A questo punto, la punta del catetere deve essere in aortico. Fare attenzione a non rilasciare catetere, la pressione del vaso lo costringerà ad uscire.
4. Legare due punti di sutura 4-0 saldamente sotto tallone e uno sopra e confermare che il catetere campione. Lavare il catetere con soluzione fisiologica eparinata 10U/ml. Re-inserire l'estremità esterna del catetere con un tappo in acciaio tubi di acciaio.
5. Utilizzando la stessa incisione, smussato sezionare per esporre destra vena giugulare esterna. Isolare accuratamente e legare la fine cefalica con sutura di seta. Puntura della vena con un calibro 21 VENOJECT Multi-Sample adattatore Luer. Togliere il tappo tubi in acciaio inox e inserire catetere con una soluzione sterile catheter introduttore al tallone e cravatta due punti di sutura sotto il tallone. Tie una sutura terza sopra tallone e confermare che i campioni. A filo con la linea venosa 10U/mL eparinizzato salina. Re-inserire l'estremità del catetere esterno con spina in acciaio tubi di acciaio.
6. Tunnel 14-gauge ottuso sotto la pelle e fare incisione nella parte posteriore tra le scapole. Infilare il catetere attraverso l'ago di esteriorizzare loro nella parte posteriore del ratto. Circa 4cm di linea è visibile. 0,5 centimetri di taglio Tygon S-50-HL Tubazione medica, si svolge intorno entrambi i cateteri esteriorizzato e fissare con un nastro come richiesto (per la vena blu, rosso per le arterie). Retest cateteri per garantire la pervietà, lavare e riempire con soluzione fisiologica eparinata 150U/ml per prevenire la coagulazione.
7. Chiudere tutte le incisioni con 3-0 sutura seta. Luogo ratto prona, in pre-riscaldato, gabbia pulita con il cibo sul fondo della gabbia.

B: Cura postoperatoria

Parte 1: Immediato cure post-operatorie e di monitoraggio

1. Una volta che il ratto riacquista piena capacità ambulatoriale e la vigilanza restituire il ratto di stabulazione degli animali.
2. Lasciare che il ratto di recuperare per 3-5 giorni.
3. Daily Monitor per le infezioni, dolore e variazioni di peso. L'infezione può essere problematica se scarico da siti incisione, letargia generale e / o dolore si osserva. Il dolore è indicato dalla postura ricurva, pelo arruffato schiena e l'assenza di comportamenti ambulatoriali e / o mangiare. Una perdita di peso può essere vissuto immediatamente dopo l'intervento fino a tre giorni post-intervento chirurgico, tuttavia, il peso dovrebbe stabilizzarsi e / o aumentare entro il 10% del pre-chirurgica peso entro 5 giorni. Grave perdita di peso può indicare una infezione, ictus e / o dolore.
4. Retest cateteri quotidianamente per garantire la pervietà.

Parte 2: Mantenimento pervietà del catetere

1. Ogni giorno, durante il recupero post-operatorio, riempire 1ml Siringhe Suggerimento slip con 150U/ml soluzione salina eparinata e cappuccio con un ago da 22 gauge smussato. L'ago viene inserito nel ottuso 20cm di tubo in PE-50 con 23 tubi di attacco in acciaio inox calibro all'altra estremità.
2. Rimuovere le bolle d'aria, ponendo fine con l'accoppiatore tubo superiore rispetto al resto della siringa da 1 ml e spingendo le bolle fuori dalla linea.
3. Morsetto dalla linea arteriosa esternato dal ratto con hemostats appena sotto il tappo.
4. Togliere il tappo del catetere d'acciaio con la seconda coppia di hemostats.
5. Inserire l'accoppiatore tubo collegato alla siringa nella linea arteriosa e rilasciare il hemostats occludere il catetere arterioso esternalizzati.
6. Aspirare il sangue arterioso del catetere nella siringa. Se il catetere non disegna facilmente può essere necessario spingere molto delicatamente in una piccola quantità di soluzione di flush mediante il catetere per spostare la punta del catetere nel caso sia incastrato contro il muro nave. Il catetere è stato completamente eliminato quando il sangue raggiunge la siringa.
7. Bloccare il vicino PE-50 tubo alla siringa 1 ml e gettare la siringa. Sostituire con una nuova siringa piena di soluzione salina fresca 150U/ml eparinizzato. Sbloccare il tubo e tenendo la siringa nuova in posizione verticale, leggermente la siringa nuovo con un dito per rimuovere eventuali bolle d'aria nuova possibile verso l'alto e lontano dalla linea. Nota: Si deve essere garantita come bolle d'aria possono provocare un ictus.
8. Iniettare la soluzione salina 150U/ml heparinzed finché la linea catetere sia limpida e priva di sangue.
9. Morsetto dalla linea arteriosa esternato dal ratto con hemostats appena sotto l'attacco tubo. Rimuovere il connettore siringa dalla linea di catetere arterioso e sostituirlo con il tappo di tubi di acciaio inox.
10. Rilasciare il hemostats occludere il catetere arterioso esternalizzati.
11. Ripetere l'operazione per linea venosa. Tuttavia, a causa della bassa pressione venosa campionamento spesso non è possibile. Se la soluzione salina 150U/ml heparinzed può essere infusa con una resistenza minima è probabile che il catetere è ben posizionata nella vena.

C: iperinsulinemici-euglicemico morsetto

Parte 1: Morsetto di set-up e preparazione

1. Pesare il ratto e registrare il peso. Questo sarà necessario per determinare i tassi di infusione di insulina e glucosio. Veloce il ratto per almeno 5 ore prima di sperimentare. In questo modo l'animale è in uno stato post-prandiale e l'apporto di glucosio da fonti alimentari è ridotto al minimo. Posizionare il topo in un piccolo contenitore / gabbia con biancheria da letto, che limita il movimento eccessivo. L'animale deve essere in grado di girarsi e lo sposo liberamente.
2. Impostare le linee e le pompe di infusione come si vede nella figura 1. P50 lunghezze di tubazioni di collegamento sono le seguenti: siringa a Y connettore è da 8 cm, connettore a Y per ratto è 15 cm, linea arteriosa è 20cm, e la linea venosa è 10 cm di lunghezza. Rimuovere le spine in acciaio tubi di acciaio e filo linee giugulare e per assicurare l'infusione arteriosa e di campionamento rispettivamente con 10U/ml soluzione salina eparinata.
3. Determinare l'insulina volume richiesto. Questo può variare a seconda del livello di insulina e il peso del topo. Qui, 4mU/kg/min viene somministrato ad una velocità di 2uL/min. Si tratta di una dose elevata fisiologico. Ove possibile, i tentativi dovrebbe essere fatto per limitare il volume di infusione. Insulina deve essere opportunamente diluita e possono essere somministrati in presenza di plasma. Una soluzione al 3% nel plasma di ratto in soluzione salina viene utilizzato per diluire l'insulina in questo laboratorio. L'insulina è HumulinR 100U/ml (Eli Lily), anche se altri l'insulina ad azione rapida può essere impiegato. Garantire l'insulina diluita è ben miscelati prima di mettere in infusione siringa.
4. Preparare il 50% destrosio. Questo può essere inserito direttamente nella siringa sulla pompa di infusione. Segna pompa con 'glucosio' per evitare confusioni. Ricordatevi di garantire volumi sufficienti di insulina e glucosio per lo studio. Morsetti durano generalmente ~ 2h. Nel presente protocollo, siringhe da 3 ml sono utilizzati.
5. Luogo glucosio e siringhe da insulina sul modello di Harvard Apparatus 11 Plus pompe siringa. Anticipo glucosio connettore a Y e la linea con un morsetto hemostat. Insulina anticipo per animali, morsetto linea con hemostat. Morsetto linee e permettere ratto di rilassarsi per 30 minuti prima di iniziare l'esperimento. NOTA: le guardie punta hemostat sono suggeriti al fine di evitare permanente crimpatura delle linee.
6. Preparare centrifuga e EDTA rivestite tubi per la raccolta del plasma. Nel presente studio, i campioni di sangue supplementari saranno ottenute una volta che l'animale è bloccato.

Parte 2: protocollo sperimentale

1. Un campione di insulina basale e campione dell'ematocrito devono essere acquisite. Campionamento ematocrito assicura il volume del sangue è mantenuto per tutto l'esperimento. In generale, i livelli di ematocrito non deve scendere oltre il 10% del valore iniziale.
2. Ottenere un campione di glucosio al basale (One Touch Ultra, LifeScan, Inc.) e determinare il livello di glucosio nel sangue intero da bloccare. Qui, morsetto a euglicemia, o 5.0-5.5 mm (Figura 2). Dopo ogni campione di sangue, lavare la linea arteriosa con un piccolo volume di soluzione salina 10U/ml eparinato per prevenire la coagulazione. NOTA: Assicurarsi che nessun grumi o bolle d'aria sono in prima linea prima di infondere. Questi possono dare l'animale un colpo.
3. Avviare l'infusione di insulina. Prendere glicemia a 5-10min intervalli, il monitoraggio della glicemia in ogni punto. Regolare la velocità di infusione del glucosio come richiesto fino ad uno stato stazionario è raggiunto. Questo processo è generalmente un processo di tentativi ed errori e può richiedere 30 minuti per> 2 ore. I livelli di glucosio necessario per mantenere la glicemia dipendono dal protocollo di sperimentazione, le specie e le condizioni presenti (Figura 2).
4. Costante dei livelli di glucosio sono stato tre letture consecutive entro un range definito. Qui, tre letture in ~ 1 mM è considerato bloccato (ad esempio 4.8, 5.2, 5.6mm). Una volta allo stato stazionario è raggiunto, registrare la velocità di infusione glucosio tenuti a mantenere la glicemia per un periodo di 30 min. Durante questo periodo i campioni di sangue complementare sono disponibili. Come minimo, un secondo campione di insulina plasmatica e il campione ematocrito dovrebbe essere ottenuto.
5. Una volta pinza è stata completata, gli animali possono essere utilizzati per ulteriori test o di eutanasia e tessuti raccolti per ulteriori analisi. A seconda che l'animale, le linee catetere può rimanere brevetto per 5-7 giorni.

D: iperinsulinemici-euglicemico (insulina) Risultati morsetto

Quando eseguito correttamente, la procedura di clamp valuta la costante sensibilità all'insulina stato del ratto. Nel presentare i dati ottenuti dal morsetto, è fondamentale per documentare i livelli di glucosio e la velocità di infusione glucosio. I livelli di glucosio stabile nel tempo un corso da un minimo di 30 minuti (Figura 3) sono indicativi di uno stato stazionario. Il glucosio è considerato stabile solo se il glucosio nel sangue intero sia mantenuta entro ~ 1 mm. Velocità di infusione glucosio mostrano i livelli di glucosio esogeno tenuti a mantenere la glicemia. Ove possibile, queste cifre devono essere visualizzati come un corso di tempo, piuttosto che singoli, valore medio (Figura 4).

Altre misure raccomandate da segnalare sono l'insulina plasmatica e dell'ematocrito. La determinazione della glicemia sia a digiuno e bloccato i livelli di insulina confermare che l'insulina è stato somministrato con successo e in grado di rilevare eventuali differenze di livello tra i gruppi di trattamento (Figura 5). Misure di ematocrito ottenere al basale e alla conclusione della pinza insulina vengono suggerite (Figura 6). Questo per garantire i livelli di ematocrito non rientrano più del 5% durante l'esperimento e le alterazioni che accompagnano in volume del sangue e il flusso non influenza lo smaltimento del glucosio.

Figura 1. Set-up sperimentale. La figura 1 mostra sfrenato, ratto cosciente durante la procedura di clamp. Cateteri permettere il prelievo di sangue e infusi senza manipolazione l'animale. Le pompe a sinistra contengono insulina e glucosio.

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Figura 2. Attesi dati durante la procedura di clamp. Per ottenere una pinza a livelli basali (euglicemia, 5mm), i livelli di glucosio esogeno (D50) sono manipolati fino a quando la linea di base o 'pinza' è raggiunto.

Figura 3. Attesi risultati di glucosio plasmatico della procedura di clamp. Quando l'animale è 'bloccato', la glicemia è relativamente stabile nel tempo e gruppi sperimentali.

Figura 4. Rappresentante tassi di glucosio infusione della procedura di clamp. La quantità di glucosio esogeno tenuti a mantenere euglicemia diverso. Questo è illustrato con un controllo (chow alimentato) e ricca di grassi nutrito (insulino-resistenti) animali. L'alta grassi animali nutriti richiede meno di glucosio infusa per mantenere la glicemia, soprattutto perché è insensibile all'insulina infusa.

Figura 5. Insulina plasmatica Rappresentante del ratto. L'insulina plasmatica durante il morsetto insulina deve essere superiore al digiuno, l'insulina plasmatica basale. In questo modo l'insulina è stato correttamente somministrato all'animale durante il morsetto insulina.

Figura 6. Segnalazione ematocrito. L'ematocrito basale e ematocrito dopo l'esperimento deve essere ottenuto e segnalati. Questo assicura livelli di ematocrito non rientrano più del 5% dei livelli basali che derivi dalla eccessivo prelievo di sangue arterioso.

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Discussione

Inizialmente sviluppato per l'indagine della sensibilità all'insulina negli esseri umani, la procedura di clamp è stato adattato ad altre specie tra cui ratti e topi di laboratorio. Modelli animali di accertamento della resistenza all'insulina fornisce un aiuto importante nella comprensione della fisiopatologia della sensibilità all'insulina e le patologie associate, nonché l'individuazione di interventi terapeutici che possiedono ^1,2 clinico valore. Diversi metodi per valutare la sens...

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Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente	Azienda	Numero di catalogo	Commenti (opzionale)
Tubi in polietilene Intramedic (PE-50)	Fisher Scientific	14-170-12B	Diametro interno di 0,58 millimetri (0,023 ") x diametro esterno di 0,965 millimetri (0,038")
Dow Corning Silastic Laboratorio Tubi	Fisher Scientific	11-189-15C	Diametro interno di 0,76 millimetri (0.030 ") x diametro esterno di 1,65 millimetri (0.065")
Tygon S-50-HL Medical Tubing	Harvard Apparatus	PY2 72-1251	Diametro interno di 3,2 mm (0.125 ") x diametro esterno di 4,7 millimetri (0,1875")
Loctite Super Glue	Grand & Toy	32237	Gel di controllo
Sterile lama chirurgica	VWR	BD371610
Curve Pinza Micro Dissezione	George Tiemann & Co.	160-20	x 2
Dissettore dritto Micro	George Tiemann & Co.	160-15	x 2
Emostatica curve	George Tiemann & Co.	105-1135	x 2
Emostatica retta	George Tiemann & Co.	105-1130	x 2
Emostatica Suggerimento Guardie	Robbins Instruments, Inc.	15.09-2-004
Forbici Chirurgia dritto	George Tiemann & Co.	105-402
VENOJECT Multi-Sample adattatore Luer	Terumo Medical Products	810127A	21 gauge, 1 pollici
Catetere introduttore sterile	Becton Dickinson	406999
14-gauge Blunt	Becton Dickinson	511310	Calibro 14, 2 in
Sterile sutura chirurgica	Johnson & Johnson Medical Products	1679H	Seta, dimensioni 3-0
Non sterili sutura chirurgica	Angiotech Pharmaceuticals, Inc.	SP116	Seta, dimensioni 4-0
Tamponi di cotone	VWR	10806-005
Garze 4ply	VWR	CA43845-062
Clippers animali piccola batteria	Harvard Apparatus	729063
Isoflurano	Halocarbon Products Corp.	IPN-45
Anestetico carrello	Benson Medical Industries, Inc.
70% di etanolo	Fisher Scientific	HC-1000
Betadine soluzione antisettica	Occidentale Drug Distribution Centre Ltd.	105267
Modello 11 Plus pompa a siringa	Harvard Apparatus	702208
Tubi in acciaio inossidabile Accoppiatori	Harvard Apparatus	72-4434	23 gauge, 0,3 pollici
Tubi acciaio inossidabile Spine	Harvard Apparatus	72-4436	23 gauge, 0,5 pollici
Acciaio Blunt Needles	Instech Laboratories, Inc.	LS22	22 gauge
60 gradi Y-Connettori	Parti piccole	STCY-22-05	22 gauge
CritSpin Micro-ematocrito Centrifuga	Iris Sample Processing	CS12
Centrifuga Mini	Fisher Scientific	05-090-100
Tubi Centrifuga Micro	VWR	53550-778
Centrifuga in polipropilene da 50 ml tubi	VWR	89004-364
1 ml di plastica di slittamento Suggerimento Siringhe	Becton Dickinson	309602
3ml di plastica Luerlok Suggerimento Siringhe	Becton Dickinson	309585
Anticoagulante iniezione di eparina	Occidentale Drug Distribution Centre Ltd.	102824	Produttore: LEO Pharma Inc. Conc. 1000 UI
Soluzione EDTA	Promega Corp.	V4231	0,5 M, pH 8,0
Salino	Occidentale Drug Distribution Centre Ltd.	ABB7983154	Produttore: cloruro di sodio Hospira 0,9%
50% di destrosio	Vétoquinol	8DEX012D
Humulin-R	Eli Lilly	HI-210	100U/ml
Siringhe da insulina da 1 ml	Becton Dickinson	309311
Fisherbrand * emato-Seal Sigillante	Fisher Scientific	02-678
Fisherbrand * microematocrito tubi capillari	Fisher Scientific	22-362-574
Strisce reattive One Touch Ultra	LifeScan, Inc.	AW 085-314H
One Touch Ultra Sangue glucometro	LifeScan, Inc.	AW 085-314 ter
Sodio Pentobarbitol	Ceva Sante Animale	1715 138	Conc. 54.7mg/ml
Laboratorio Etichettatura nastro rosso	VWR	89097-932
Laboratorio nastro blu Etichettatura	VWR	89097-936
Pesare Scala	Fisher Scientific	01-913-88
Vortice	VWR	58815-234
Timer	VWR	62344-641