Perle di separazione e celle a multi-canale dispositivi Microfluidic Utilizzando dielettroforesi e flusso laminare

Riepilogo

Dielettroforesi (DEP) è un metodo efficace per manipolare le cellule. Circuiti stampati (PCB) in grado di fornire elettrodi economico, riutilizzabile ed efficace per il contatto senza manipolazione cellulare all'interno di dispositivi microfluidici. Grazie alla combinazione di canali microfluidica PDMS-based con coprioggetto sul PCB, dimostriamo la manipolazione tallone e cellulare e di separazione all'interno multicanale dispositivi microfluidici.

Abstract

Dispositivi microfluidici hanno avanzato studi sulle cellule, fornendo un ambiente dinamico fluidico sulla scala della cellula per lo studio, manipolazione, selezione e conteggio delle cellule. Tuttavia, la manipolazione della cella all'interno del dominio fluidico rimane una sfida e richiede protocolli di fabbricazione complicato per le valvole di formazione ed elettrodi, o richieste attrezzature speciali come pinzette ottiche. Qui, abbiamo dimostrato che convenzionali circuiti stampati (PCB) possono essere utilizzati per la non-contatto manipolazione di cellule utilizzando dielettroforesi (DEP) per la manipolazione delle cellule tallone e in campi a flusso laminare per bioactuation, e per la separazione delle cellule e perline in microfluidica multicanale dispositivi. In primo luogo, vi presentiamo il protocollo per il montaggio degli elettrodi DEP e dispositivi microfluidici, e preparare le cellule per DEP. Poi, ci caratterizzano l'operazione DEP con perle di polistirene. Infine, mostriamo i risultati rappresentante della separazione tallone e cellulare in un dispositivo multicanale microfluidica. In sintesi, DEP è un metodo efficace per la manipolazione di particelle (granuli o cellule) all'interno di dispositivi microfluidici.

Protocollo

Uno schema generale della installazione delle attrezzature è mostrato nella Figura 1A. Il PCB-campione di assemblaggio è ulteriormente dettagliato in una sezione trasversale schematica in Figura 1B.

1. Preparazione di elettrodi PCB:

1. PCB Design elettrodi alla geometria desiderata per generare una non uniforme campo elettrico. Personalizzati chip elettrodo PCB possono essere ordinati attraverso impianti di fabbricazione commerciale (Figura 1C).
2. Preparare prefabbricati PCB elettrodi per saldatura 16-gauge filo fino alla fine di ciascun elettrodo metallico stampato (Figura 1D).
   1. Posizionare il filo sull'estremità dell'elettrodo. Tenere il filo in posizione sulla superficie metallica del PCB con il saldatore per scaldare il filo.
   2. Alimentare una piccola quantità di saldatura in filo riscaldato per riempire il filo di saldatura.
   3. Dopo che il filo è pieno di saldatura, rimuovere il saldatore, tenendo il filo in posizione durante la saldatura si raffredda.
3. Ripetere il processo di saldatura per ogni connessione elettrica sul PCB (Figura 1D).

2. Preparare Canali Microfluidic:

1. Polidimetilsilossano canali microfluidica (PDMS)-base sono preparati utilizzando l'elastomero PDMS, Sylgard 184 di Dow Corning. Uno stampo master che definisce i canali di solito è creato attraverso processi di microfabbricazione standard con un wafer di silicio e SU-8 photoresist.
2. Mix composto base e catalizzatore in un rapporto di 10:1 per 5 minuti.
3. Versate il liquido PDMS sul SU-8 prefabbricati stampo master e rimuovere le bolle d'aria esponendo liquido PDMS a vuoto per qualche minuto. Ripetere il processo di vuoto, se necessario, per rimuovere completamente tutte le bolle.
4. Curare il PDMS a 70 ° C per 2 ore.
5. Rimuovere lastra PDMS con canali microfluidica dal wafer con una lametta, attenzione a non rompere wafer.
6. Dei buchi per l'introduzione di liquidi e le cellule nel dispositivo microfluidica. (Nota: Siringa di pompaggio, gravità o di tensione superficiale del flusso base possono essere utilizzati con DEP).
7. Ispezionare il dispositivo a microfluidi per assicurarsi che sia privo di polvere e detriti. Pulizia del PDMS può essere facilmente realizzato utilizzando 3M Scotch Magic Tape.
8. Plasma il legame PDMS canali microfluidica per un ambiente pulito No.0 spessore (80-130 micron) coprioggetto. Riscaldare il coprioggetto-microfluidico montaggio a 100 ° C per un minimo di 15 min.

3. Preparare bassa conducibilità Media:

1. Bassa conducibilità media è preparata mescolando 8,5% di saccarosio + glucosio 0,3% (w / v) in acqua deionizzata (DI) ^1.
   Nota:. Abbiamo già dimostrato che le cellule possono essere coltivate per giorni sui media tradizionali di coltura cellulare dopo essere stato esposto a bassa conducibilità per brevi periodi (circa 30 min) ¹¹

4. Montare Canali Microfluidic Onto Elettrodi PCB:

1. Mettete una piccola quantità (circa 10 mL) di olio minerale sul PCB per garantire un contatto stretto tra il PCB e il coprioggetto.
   Nota: Un passo opzionale per ridurre la visualizzazione elettrodo è per rivestire la superficie del circuito stampato con uno strato molto sottile di pennarello indelebile nero o vernice.
2. Posizionare il coprioggetto-microfluidico assemblaggio canale sul PCB oliato, con contatto coprioggetto formando con l'olio (coprioggetto in basso). Premere delicatamente il copri-microfluidica montaggio che garantiscano un buon contatto e di ridurre al minimo le bolle d'aria che possono compromettere la visualizzazione delle cellule e tallone. Un esempio di dispositivo completato è mostrato nella Figura 1D.

5. Ordinare e concentrato Perline e cellule utilizzando DEP:

1. Riempire i canali microfluidica con acqua deionizzata o bassa conducibilità media, il processo di incollaggio plasma facilita il facile caricamento di soluzioni acquose nei canali microfluidici temporaneamente per rendere la superficie idrofoba normalmente PDMS idrofilo.
2. Introdurre cellule e / o perle di polistirene nel serbatoio canale (Figura 1C). Qui usiamo l'adenocarcinoma del colon umano (HT-29) le cellule.
3. Collegare l'uscita di un generatore di funzioni per l'ingresso di un amplificatore di rete e poi collegare l'uscita dell'amplificatore per i fili degli elettrodi. Coprire tutti i fili elettrici e le superfici della configurazione con del nastro isolante per proteggere gli utenti dalla potenziale esposizione agli urti. Un diagramma schematico della configurazione apparecchiatura è mostrato nella Figura 1A.
4. Impostare il generatore di funzioni per produrre un output a onda sinusoidale pari a 1,0-1,5 Mhz. L'ampiezza della produzione deve essere regolata per l'amplificatore di potenza RF di produrre una potenza di 80-100V al PCB. L'amplificatore di potenza RF in questo lavoro richiede una tensione di ingresso intorno 220-330 mV. Di separare le cellule e perline, il tasso di flusso laminare devono essere conformi con la forza DEP per spostare le cellule e perline all'interno del canale principale (larghezza w = 100 micron, altezza h = 27 micron) nei canali di destinazione (larghezza w = 100 micron , altezza h = 27 micron).
   Attenzione: consultare con il produttore di PCB per determinare la mtensioni di funzionamento aximum per evitare problemi come il surriscaldamento PCB o di fusione. Controllare le specifiche dei costruttori di apparecchiature 'per il generatore di funzioni e produttori di amplificatori di potenza per stabilire le impostazioni di funzionamento sicuro.
5. Avviare DEP alle cellule ordinare e perline. Cellule esperienza positiva-DEP mentre perle di polistirene esperienza negativa-DEP in modo non uniforme campo elettrico all'interno delle frequenze specificato. Ciò consente DEP-force-attivati ​​bioactuation e separazione di cellule e di altre particelle all'interno di dispositivi microfluidici utilizzando PCB accessibile e riutilizzabile come elettrodi.

6. Rappresentante dei risultati:

Quando DEP è efficace a cellule di azionamento o di particelle, un allineamento robusto all'interno dei campi elettrici non uniformi si osserva per i bagni statici o velocità del fluido lento. In condizioni di velocità del fluido superiore, il comportamento delle cellule o di particelle dipende dall'orientamento relativo del flusso assiale al campo elettrico e la velocità del flusso. Inoltre, i comportamenti delle cellule e particelle dipendono anche l'intensità di campo elettrico e il grado di non uniformità all'interno del campo elettrico. Comportamenti tipici di cellule o particelle includono 'catene di perla,' bicicletta, stallo o di svolta.

Condizioni che compromettono o abolire DEP comprendono la presenza di sali o di altre molecole nel liquido ionico, debole intensità del campo elettrico, velocità di flusso eccessivo, coprioggetto che sono troppo spesse, o soluzioni conduttivo tra il coprioggetti e gli elettrodi PCB (ad esempio un coprioggetto incrinato può indurre la miscelazione di acqua e olio minerale).

Qui, quando si usa No.0 coprioggetto spessore (80-130 micron) e un elettrodo di distanza (231 micron), la pendenza del quadrato dell'intensità del campo elettrico applicato alle cellule HT-29 e perline è stimata essere tra 2 ^-8 a 6 ^-8 V ² / ³ micron ^1.

La forza DEP può essere stimata misurando la velocità della particella, manipolato da DEP in un fluido statico (Figura 2A-B). A causa della bassa inerzia della particella e l'ambiente altamente viscosi del canale microfluidica, la forza di resistenza idrodinamica sarà uguale a, ma in direzione opposta con la forza DEP. La velocità media tallone nella bassa conducibilità media è 34,5 micron / s con una tensione di 93 Vpp DEP e 1,5 Mhz. La forza di resistenza idrodinamica può essere calcolato con la seguente formula ^1.

F = _trascinare 6πηRv

La media viscosità η della bassa conducibilità media a 20 ° C è 1,27 mPa • s e il raggio R tallone è di 7,5 micron. La forza di resistenza idrodinamica per la microbead polistirolo è stimato in 6,19 pN. Per dimostrare la capacità di azionare perline all'interno dei canali microfluidica (Figura 2C-F), abbiamo iniziato il flusso dei mezzi di comunicazione a bassa conducibilità con l'impiego della tensione superficiale del flusso mediata. La velocità media tallone nel canale d'ingresso singolo è stato 1.540 micron / sec, mentre la velocità media all'interno dei singoli canali è stata ridotta a 565 micron / sec (Figura 2C). Avviando DEP, le perle sono state mantenute all'interno del canale centrale invece di essere rilasciato nel canale laterale. Così, in queste condizioni, le forze DEP sono stati sufficienti per superare la forza di resistenza del fluido nei due canali laterali.

Lo stesso principio è stato utilizzato anche per deviare le perle dal cannel centrale di un canale laterale singolo semplicemente cambiando l'orientamento dei canali e il flusso tallone a quella degli elettrodi DEP (Figura 2E-F). Da pesca l'elettrodo metallico sul lato del canale di ingresso singolo, quando DEP è stato avviato, le perle sono stati guidati a lato del canale, come le perline avvicinato ad un punto triforcazione. Qui, le forze DEP sono stati sufficienti per tirare le palline in uno dei canali laterali dove il flusso laminare continuato a spingere giù il canale (Figura 2F).

Poiché le cellule e di perle di polistirene sono notevoli differenze nella loro capacità di essere polarizzata e azionato in campi elettrici non uniformi, si usa DEP per dimostrare la capacità di eseguire on-chip di separazione delle cellule e perline, contemporaneamente. Abbiamo utilizzato la stessa struttura del canale microfluidica ed elettrodi PCB come configurato nella Figura 2E-F, ma ha introdotto una sospensione di cellule HT-29 e perline in condizioni di scarsa conduttività dei media nel canale d'ingresso singolo (Figura 3). Quando DEP è introdotto, e in queste condizioni, l'HT-29 cellule sono state conservate nei due canali di uscita a sinistra, mentre le perle sono state mantenute nel canale di uscita individuale sulla destra. Qui le cellule mostrano il comportamento di un caratteristico 'perla-chaining' come sono raccolti nel canale di uscita a sinistra. Occasionalmente un cordolo e la cella si attaccano insieme in cui sono raccolti insieme, spesso in canali di uscita della cellula. Da questo esperimentoAl dati, determinare il tasso di smistamento da 713 particelle (cellule e perline) al minuto, o l'equivalente di 14.260 cellule e perline in 20 minuti. Il numero di cellule e perline recuperate è rilevante e utile per la biologia molecolare, imaging, biochimici e lab-on-a-chip.

Figura 1. PCB a base di DEP di cellule e particelle nei canali microfluidica. (A) L'impostazione attrezzature per Protezione esecuzione programmi a base di actuation inizia con un generatore di funzioni per definire la frequenza e l'ampiezza del segnale elettrico, poi un amplificatore di potenza per aumentare la potenza del segnale della campo elettrico generato sul PCB. (B) L'assemblea dispositivo a microfluidi per l'azionamento del campione è costituito da PDMS canali microfluidica irreversibilmente legato a un no. 0 spessore coprioggetto (80-130 micron) attraverso plasma di ossigeno, non conduttivi per fare il bagno delle cellule e / o perline. (C) Gli elettrodi PCB usati qui sono composti da due regioni in cui sono interdigitati gli elettrodi per generare una forte non uniforme campo elettrico. (D) Il dispositivo completato: un PCB con un dispositivo suddivise ancora microfluidi su un unico vetrino, inserto mostra tutto il dispositivo con i fili degli elettrodi. (CD) Per le dimensioni, le misure PCB sono 8.4 cm (l), 2.1 cm (w), con 5 mm di larghezza elettrodi.

Figura 2. Immagini rappresentative delle cellule e perline nei canali prima e durante la DEP attuazione. (A) 15 perle di polistirene micron fluorescente in una soluzione a bassa conducibilità-media all'interno di un canale microfluidica PDMS, senza flusso laminare (tempo trascorso, 1.23 sec). (B) Al momento della DEP iniziazione, le perle migrare verso modelli di elettrodi del PCB (strisce nere), piuttosto che tra gli elettrodi (tempo trascorso, 8,18 sec). (C) Perle nei canali stessi sotto flusso laminare sono divisi tra i tre canali separati (tempo trascorso, 5.3 sec), quando il DEP è iniziato (D), le perle vengono azionati a fluire solo nel canale centrale (tempo trascorso, 4.3 sec). (E) Cambiando l'orientamento dei canali agli elettrodi PCB, sfere possono essere dirette in modo differenziale nei canali laterali (F) con DEP, piuttosto che il canale centrale come mostrato in (D). (EF) Tempo trascorso è 8.23 ​​sec e 5.16 sec, rispettivamente. Tutte le barre di scala = 100 micron.

Figura 3. Immagini rappresentative delle cellule e perline nei canali prima e durante la DEP attuazione. (AB) Prima di iniziare il DEP, una soluzione mista di adenocarcinoma del colon umano (HT-29) le cellule e il flusso di perle da un canale a 3 canali di uscita separati. La freccia aperta indica la direzione del flusso laminare e canali sono delineati con linee tratteggiate per l'orientamento e chiarimenti. (CD) Con DEP inducendo, perline e selettivamente le cellule sono azionati in canali separati individuate. HT-29 cellule uscire dal canale centrale e di sinistra, mentre perle di uscire dal canale destro. Concatenamento perla caratteristica di perline e cellule si osserva durante la Protezione esecuzione programmi di attuazione. (A, C) Interferenza di imaging differenziale di contrasto di cellule e perline in microcanali rende le perle facilmente visibile. Glow immagini intensità di scala (B, D) delle immagini stesse DIC (A, C) migliorare la visualizzazione delle cellule nei canali. Gli elettrodi di metallo riflettente ((A, C) striscia di luce e (B, D), giallo e verde) forniscono un punto di riferimento importante per l'allineamento microcanali agli elettrodi per una efficace funzionalità Protezione esecuzione programmi a base di attuazione. Barre di scala = 100 micron.

Discussione

Manipolazione cellulare a dispositivi microfluidici è auspicabile per l'ordinamento o il posizionamento selettivo di singole cellule o per studi di popolazione. ² a flusso laminare viene utilizzato in combinazione con valvole e pompe di manipolare le cellule all'interno di dispositivi microfluidici. Tuttavia, questi metodi da soli sono impegnativi e richiedono processi di fabbricazione dettagliato e abilità ³ centrifugazione può semplificare le richieste per il posizionamento delle cellule, ma di immagini simultanee è una sfida;. Inoltre, l'architettura canale per centrifugazione deve essere considerato con attenzione nella progettazione del manipolazioni desiderato e considerando gli effetti di forze centripete. ⁴ pinzette laser può essere utilizzato per il posizionamento delle cellule, ma il metodo è costoso e non suscettibili di high-throughput separazione delle cellule. ⁵ Eppure, la DEP ha dimostrato come un efficace sistema di "pinzette elettriche" per il posizionamento efficace delle cellule, la caratterizzazione e la manipolazione. ^6,7

In particolare, DEP è stato utilizzato per catturare selettivamente le cellule e ordinare on-chip per l'elaborazione di vivere e di cellule morte, ^7-10 e per la raccolta di cellule su sensori di risonanza per la misura della massa cellulare. ¹¹ Abbiamo precedentemente dimostrato che aumentando la DEP vigore batteri o perline di sopra della forza di resistenza fluidico, l'on-chip concentrazione e la cattura di perle di polistirene e Listeria monocytogenes V7 può essere realizzato. ¹² popolazioni miste di E. coli e L. batteri monocytogenes può anche essere diretto e rilasciato attraverso impulsi DEP. Inoltre, le particelle più grandi possono essere catturati in modo differenziato e concentrato sugli elettrodi in base alle dimensioni delle particelle di grandi dimensioni, mentre le particelle più piccole non sono di cattura, ma vengono rimossi con il flusso fluido. ¹³ Quando le forze di Protezione esecuzione programmi non superano le forze fluidico trascinando le particelle, il tallone o cella non viene catturato, ma piuttosto spostato all'interno del flusso fluido. Come mostrato nella Figura 2C, sfere possono essere concentrati nella regione centrale del flusso di liquido sufficiente a mantenere le perline nel canale centrale. Questo potrebbe essere dovuto all'effetto combinato di particelle a particelle influenze all'interno del campo elettrico, velocità del fluido superiore DEP forze trascinamento, la combinazione di questi, o qualche altro effetto indefinito.

Più recenti progressi nella DEP contactless permettono di massimizzare la cattura e la manipolazione delle cellule con il campo minimo richiesto, proteggendo così i tipi di cellule, nella maggior misura, durante la manipolazione DEP. ^1,9 contatto promessa DEP offre alla comunità microfluidica per l'ordinamento, la raccolta e il posizionamento delle cellule all'interno di dispositivi microfluidici. Ci aspettiamo che con l'aumento della domanda per, l'attuazione, il DEP per la manipolazione all'interno di dispositivi microfluidici, ulteriori scoperte e innovazioni espandere la comprensione e l'influenza delle forze DEP.

PCB può essere prodotto attraverso processi ad alto volume ad un prezzo accessibile, con un tempo di risposta rapido di fabbricazione, che li rende buoni piattaforme per la commercializzazione. Inoltre, i PCB sono facili da usare e accessibile per gli scienziati in una vasta gamma di discipline per le on-chip manipolazioni delle cellule e l'ordinamento.

Nel progettare la superficie degli elettrodi PCB, occorre tenere in considerazione nella posizione desiderata particella / cellula traiettoria. I fattori chiave per l'esame includono la dimensione delle particelle e tipo (perline e / o cellulare), tipo di cellula, la dimensione a microcanali, velocità di flusso, distanza tra gli elettrodi (che determina l'intensità di campo elettrico), spessore coprioggetto, e la conduttività dei fluidi. Questi fattori influenzano la forza necessaria e disponibile per manipolare la particella o cellula, e in ultima analisi, l'efficienza di separazione. Il nostro protocollo presentato qui dimostra una configurazione efficace per l'avvio di Protezione esecuzione programmi per microsfere e la separazione delle cellule. Per potenziali applicazioni, gli utenti dovrebbero corrispondere l'architettura del disegno canale microfluidica con i percorsi di flusso desiderato per le cellule e perline, così come i modelli di elettrodi per ottimizzare l'efficienza per ogni applicazione. Distanza tra gli elettrodi e lo spessore coprioggetto può essere utilizzato secondo le linee guida precedentemente riportati durante la progettazione del layout microfluidica canale ^1.

La conducibilità e la permettività della cellula / particella e dei media circostante deve essere abbastanza differenti da facilitare DEP positivo o negativo, pur mantenendo intatte le cellule. La polarità di Protezione esecuzione programmi per una particella sferica può essere determinato dalla parte reale di un valore complesso delle seguenti Clausius-Mosotti fattore alla frequenza ω della tensione DEP.

Equazione 1

In questa equazione ε, è permittività, σ è la conducibilità, e ε * è permettività complessa. Gli indici p e mdenotano la particella e dei media, rispettivamente. Quando una cellula ha una permittività superiore alla media, o la parte reale del Clausius-Mosotti diventa fattore positivo, la particella diventa più polarizzato rispetto ai media circostante. A causa di una non uniforme campo elettrico, la polarizzazione della particella diventa non uniforme e questo crea un DEP positivo (+ DEP) forza che trae la cellula verso la regione con maggiore intensità del campo elettrico. Se una cellula ha una permittività inferiore a quella media circostante, o la parte reale del Clausius-Mosotti fattore diventa negativo, subirà DEP negativo (-DEP), e la cellula è costretta verso la regione di campo minima. Se la cella e dei media hanno circa la permittività stesso complesso, nessuna forza può essere generata per manipolare le cellule. Per questo motivo, l'acqua pura è un supporto preferito per la manipolazione di particelle DEP. Tuttavia, per evitare lo stress osmotico sulla cella da acqua pura, media bassa conducibilità è stato formulato per mantenere inalterata la conducibilità, ma per aumentare osmolarità per diminuire lo stress osmotico alle cellule. Tradizionali terreni di coltura cellulare o tamponi fisiologici, come DMEM o PBS, hanno alta conducibilità, che non è adatto per la manipolazione DEP.

Abbiamo anche precedentemente dimostrato che le cellule possono essere catturati su sensori con DEP con bassa conducibilità media. Dopo un breve periodo per l'attacco delle cellule, i media bassa conducibilità può essere sostituito per il supporto richiesto colture cellulari a supportare la crescita delle cellule per giorni ^11.

Dalla nostra esperienza, perline fluorescenti sono molto luminose rispetto alla fluorescenza delle cellule vive, quindi può essere una sfida per abbinare l'intensità tallone per l'intensità di una cellula vivente e fluorescenti. Per migliorare la visualizzazione di entrambe le celle e le perline, abbiamo usato la microscopia DIC un microscopio verticale per l'imaging entrambi. Per visualizzare le celle e perline, abbiamo presentato i dati in un'immagine intensità luce scala, che conserva i dati in un ampio spettro di colori per facilitare la visione. Così, quando si progetta lo studio di interesse, i parametri di imaging e le risorse devono essere considerati.

In sintesi, abbiamo dimostrato la possibilità di azionare perline e selettivamente le cellule in canali separati con DEP. Con l'utilità sempre maggiore di canali microfluidica per la biologia cellulare, biochimica e le applicazioni della bioingegneria, DEP è un'opzione auspicabile per la raccolta delle cellule, il posizionamento e l'ordinamento. La fabbricazione PCB elettrodi è economico e conveniente, gli elettrodi sono facili da usare, ei tempi di realizzazione rapidi sono ideali per l'attuazione del DEP.

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sylgard 184 kit (PDMS)	Ellsworth Adhesives	184 SIL ELAST KIT 0.5KG	Dow Corning Sylgard
16 awg hook-up wire	Belden	8521	(Type MW) Mil-W-76C-PVC
Gold seal Cover Glass	Ted Pella, Inc.	260320	No. 0 thick, 24 x 60 mm
Miltex Biopsy Punch	VWR international	95039-104	Miltex, assorted sizes
Custom PCB electrodes	Bay Area Circuits	Custom parts
Mineral oil	Fisher Scientific	O121-1
Deionized water	House DI water supply	None	Use filtered DI water
D-Glucose Anhydrous Granular AR	Mallinckrodt Baker Inc.	4912-06
Sucrose, Crystal	Mallinckrodt Baker Inc.	8360-06
Fluorescent polymer microspheres	Bangs Laboratories	FS07F/9277	15μm Dragon green microspheres
HT-29 cell line	ATCC	HTB-38D	Human colon adenocarcinoma
Typsin 0.05% EDTA	Invitrogen	25300054
Eclipse E600FN upright microscope	Nikon Instruments	Eclipse E600FN
Phantom V310 High-speed imaging camera	Phantom	V310
BX51 upright research microscope	Olympus Corporation	BX51
SpotFlex high resolution color camera	Diagnostic Instruments	FX1520
Function generator	Agilent Technologies	3325A
RF Power amplifier	EIN	2100L