Una descrizione visiva della dissezione del sistema vascolare di superficie cerebrale e Meningi associate, e del plesso coroide da cervello di ratto

Riepilogo

Questa presentazione video mostra un metodo di raccolta delle due più importanti strutture altamente vascolari che supportano la funzione proencefalo. Essi sono la superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e la coroide plesso che sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e nel liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi.

Abstract

La presentazione video è stato creato per mostrare un metodo di raccolta delle due più importanti strutture altamente vascolari, non risiede nel cervello proprio, tale funzione di supporto proencefalo. Essi sono la superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e la coroide plesso che sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e nel liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi. Il tessuto raccolto è adatto per l'analisi biochimiche e fisiologiche, e il MAV ha dimostrato di essere sensibile al danno prodotto da amfetamina e ^1,2 ipertermia. Inoltre, i maggiori e minori vasculatures cerebrali raccolte in MAV sono di interesse potenzialmente elevato nell'ambito delle indagini concussive tipi di trauma cranico. Il MAV sezionato in questa presentazione consiste nella piale e alcuni della membrana aracnoide (meno dura) delle meningi e il sistema vascolare maggiore e minore superficie cerebrale. Il plesso coroideo sezionato è la struttura che si trova in lateral ventricoli come descritto da Oldfield e McKinley ^3,4,5,6. I metodi utilizzati per la raccolta di questi due tessuti anche facilitare la raccolta di tessuto corticale regionale privo di meningi e di superficie più grande vascolarizzazione cerebrale, ed è compatibile con la raccolta tessuti cerebrali come striato, ipotalamo, ippocampo, ecc La dissezione dei due tessuti prende 5-10 totale min. I livelli di espressione genica per la MAV sezionato e della coroide plesso, come illustrato e descritto in questa presentazione sono disponibili all'indirizzo GSE23093 (MAV) e GSE29733 (plesso coroide) al repository NCBI GEO. Questi dati sono stati, e viene, utilizzato per aiutare ulteriormente comprendere il funzionamento del MAV e della coroide plesso e come neurotossici eventi come l'ipertermia grave e AMPH influenzare negativamente la loro funzione.

Protocollo

Sebbene non mostrato nel video, i ratti sono stati dato un sovradosaggio di 300 mg / Kg di pentobarbital, con conseguente anestesia in meno di 3 min, e poi sacrificati per decapitazione. I loro cervelli sono stati poi rapidamente, ma accuratamente rimosso dal cranio e refrigerate gelida soluzione salina normale per 5 min. È importante lasciare raffreddare il cervello per tale intervallo di tempo prima di sezionare il MAV modo che il MAV può essere separata dalla superficie della corteccia (superiore dello strato I). Il cervello è stato quindi posto in fondo di un piatto di vetro Petri riposo su ghiaccio che era completa (1 cm di profondità) del freddo salina normale o di sodio 0,1 M tampone fosfato salino pH = 7,4. Tutta la dissezione è fatto con il cervello per la maggior parte immersa in soluzione salina.

1. Rimozione della ghiandola pineale

1. Posizionare il lato dorsale fino al cervello (corrispondente alla parte inferiore della piastra Petri). La ghiandola pineale si trova in corrispondenza della zona più caudale ventrale tra i due emisferi appena rostrale tegli cervelletto (incavo pineale), ed è appena sotto o sulla superficie delle meningi sul collicolo. Rimuovere la ghiandola pineale prima con due piccole pinze estremità ricurva. E 'di colore rosa come la corteccia, ma è spesso circondata nei resti di sangue e vasi residua dalla rimozione del cervello.

2. La rimozione del MAV

1. Capovolgere il cervello su "testa in giù" e separare l'arteria vertebrale, più piccole arterie e le meningi che coprono il ponte dalle meningi e vascolarizzazione del proencefalo. La rimozione del MAV proencefalo viene avviato.
   È importante iniziare ventralmente nel processo di dissezione. Grandi arterie principali del circolo di Willis, arterie cerebrale media (MCA) e arterie anteriori sono più forti e servono come "impalcatura" con cui le piccole arterie ed arteriole superficiali del piale membrana può quindi essere rimosso dalla corteccia con il resto delle meningi. Vedi recensione di Scremin ⁷ per mminerale di rappresentazioni visive e dettagli della superficie vascolare cerebrale.
2. A partire da entrambi gli emisferi, utilizzare le piccole pinze punta piegata a recidere l'arteria comunicante posteriore appena posteriormente alla congiuntura carotide interna. Così, separando gli alberi più anteriore e posteriore arteriosi del proencefalo. Ripetere la stessa procedura per l'emisfero controlaterale.
3. Afferrando la MCA e l'arteria anteriore con le pinze, tirare delicatamente in una direzione antero-dorsale in modo che il MAV copre la corteccia ventrale anteriore (piriforme, tubercolo olfattivo) viene sollevato sopra e intorno il tratto olfattivo. Questo elimina la maggior parte del MAV che copre la parte anteriore della corteccia (cingolata e orbitale).
4. Girare il cervello a 45 a 90 ° al piatto Petri. Le regioni più laterali, anteriori del MAV che circonda le zone laterali corticali (granulare insulare, secondaria somatosensoriale e corteccia uditiva) può essere liberato dalla corteccia afferrando la MCA e associati arterIES e tirando delicatamente dorsalmente lungo la corteccia. Se necessario, le estremità della pinza può essere utilizzato per sollevare e liberare le arterie dalla corteccia durante la dissezione.
5. Ora rimuovere le regioni più posteriori laterali del MAV. (Nota, è meglio passare da un emisfero all'altro durante questo processo di raccolta per garantire che il MAV rimane freddo e idratata. Inoltre, se la resistenza a liberare il MAV dalla corteccia viene rilevato da un interruttore emisfero emisfero controlaterale temporaneamente e poi tornare per l'emisfero originale in seguito.)
6. Per rimuovere le regioni più dorsali del MAV circostanti somatosensoriale primaria e corteccia motoria girare il lato dorsale fino al cervello (corrispondente alla parte inferiore della piastra Petri). Per liberare finalmente la MAV dal cervello, utilizzare le estremità della pinza lungo il seno sagittale.
   Questa porzione del MAV raccolto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino test e analisi o congelati per la successiva elaborazione. Spessoil MAV che copre le regioni più posteriori / caudale della corteccia (corteccia entorinale uditivo, visivo e più caudale) rimane attaccata alla corteccia. La sua rimozione è illustrato più avanti nel video quando il MAV tra la corteccia retrosplenial e sovrastante le collicolo sono sezionati.

3. La rimozione del plesso coroide

1. Posizionare il lato dorsale del cervello verso l'alto e in posizione con le pinze più grandi Spingere la pinza più piccoli verso il basso attraverso la linea mediana tra gli emisferi e quindi utilizzare le estremità per forare attraverso il corpo calloso corteccia e corpo (≈ -3,3 mm dal bregma) nella parte superiore del la linea mediana dell'ippocampo.
2. Utilizzare le pinze per tirare la corteccia con calloso dal dell'ippocampo dorsale e setto, esponendo la maggior parte del ventricolo laterale. Il plesso coroide può essere localizzato e identificato con la linea ondulata rossa che delimita l'arteria principale che corre la sua lunghezza. Utilizzare le due estremità delle pinze per staccare le pareti laterali del terzo ventricle e ingrandirla nella parte più caudale (≈ -4,3 mm dal bregma ^8).
3. Utilizzando le pinze piccole, tirare la fine della coroide libero plesso. Poi vai alla regione molto anteriore tra il setto e caudato / putamen (misura più rostrale, ≈ 1,6 millimetri dal bregma) e con le pinze ingrandire questa sezione del ventricolo e tirare il plesso coroide libero. Eseguire la stessa procedura nell'emisfero controlaterale per ottenere il secondo rimanente plesso coroide.
   Anche in questo tessuto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino al test e analisi o congelati per la successiva elaborazione.

4. La rimozione del MAV che rimane nel ventricolo 3 ^° sovrastante il talamo e il collicolo così come quello sulle Regioni più caudale della corteccia tra cui retrosplenial, corteccia auditiva e visiva

1. Rimuovere l'ippocampo intero entrambi gli emisferi che espongono il MAV sul talamo e collicolo. La rimozione diquesta porzione del MAV è molto meno difficile la rimozione del MAV sulla corteccia.
2. Tirare questa porzione di libera MAV afferrando la vascolarizzazione maggiore sovrastante la porzione anteriore del talamo e tirando delicatamente caudalmente. Questo sistema vascolare è collegato alla rete collicular supra e fornisce il sangue al ippocampo dorsale e rete talamo dorsale. Tirare via caudalmente e gradualmente libera la rete supracollicular fino a raggiungere le ultime porzioni del sistema vascolare caudale circolo arterioso.
   A questo punto, più cura deve essere presa per rimuovere qualsiasi residuo MAV posteriore sulla superficie ventrale del retrosplenial granulare, uditiva primaria e cortecce visive. Come con l'altra sezione MAV coprire le porzioni più anteriori della corteccia, questo tessuto può essere sia temporaneamente conservato in soluzione salina ghiacciata fino test e analisi o congelati per la successiva elaborazione. Qualsiasi residuo MAV posteriore ventrale raccolti con questa seconda sezione MAV deve essere rimosso und aggiunto alla prima sezione MAV sezionato copre la corteccia se devono essere analizzate separatamente.

5. Risultati rappresentativi

Quando la dissezione è eseguita correttamente, i tessuti risultano MAV deve essere in due entità intatti del peso di circa 35-45 mg in totale. Il inizialmente sezionato MAV che circonda la maggior parte della corteccia dovrebbe pesare circa 25 mg e il MAV che copre il talamo, collicolo e corteccia occipitale dovrebbe pesare circa 15 mg. Dovrebbe essere leggermente rosato dal sangue residuo nel sistema vascolare. Il bilaterale plesso coroide raccolta devono essere in due campioni di tessuto intatto con ciascuna del peso di 1 a 2 mg. Anche se l'acqua in eccesso può essere rimosso dal MAV prima della conservazione o trasformazione utilizzando carta velina come quello usato per la pulizia della lente, per evitare la perdita di tessuto non è una buona idea per rimuovere l'acqua in eccesso dal plesso coroide sezionato. Figura 1 è stato generato per confronto profil espressione es in tre regioni (striato, corteccia parietale e MAV) in condizioni di controllo che utilizzano Agilent-014879 Whole Genome Ratto 4x44K 60mer array di oligonucleotidi (G4131F, Agilent Technologies, Palo Alto, CA, NCBI GEO adesione # GPL7294; GSE23093 GSE29733 e che sono presenti in il repository NCBI GEO). I due grafici in figura pittoricamente mostrano l'espressione in 1) striato rispetto alla corteccia parietale e 2) il MAV rispetto alla corteccia parietale. È evidente che il corpo striato e corteccia parietale sono molto più strettamente correlati tra loro rispetto al MAV. I dati di confronto del plesso coroide con il MAV sarà presentato in una futura pubblicazione. Tuttavia, è probabile che i profili di espressione del MAV e plesso coroide sono più strettamente correlati tra loro che sono al corpo striato e corteccia parietale. Figura 2 mostra la risposta differenziale espressione genica di ipertermia (EIH) rispetto AMPH in MAV rispetto per il controllo e l'altro.

contenuto "> L'espressione genica di oltre 11.000 geni con simboli ufficiali gene NCBI in MAV di animali di controllo è stato confrontato a quelli registrati nello striato e corteccia parietale. Oltre 2000 di questi geni avevano un'espressione di 2,5 volte o più differenti nel MAV rispetto ai due neuronale tessuti ricchi, e 550 geni hanno una differenza di 10 volte maggiore espressione. poco più del 40% (253) di questi erano geni con espressione diminuita di 10 volte o più in MAV e riguardavano funzione neuronale. C'erano 343 geni con più di una espressione di 10 volte o maggiore rispetto a MAV corteccia parietale e striato. Questa lista di geni è stato utilizzato come punto di partenza con cui determinare i geni con un arricchimento molto elevata nel MAV. Tabella 1 elenca i geni con più espressione di 15 volte nei MAV rispetto corteccia parietale e striato e categorizza con rispetto alla funzione. Molti di questi geni sono stati correlati al sistema vascolare e / o il sistema immunitario. Queste tIPI di geni dovrebbe essere arricchito di circa 5 - 10 - volte a causa del sistema vascolare maggiore stesso e sangue presente al suo interno. Tuttavia, anche per geni con funzioni generali vascolari conosciute, con un incremento superiore a 15 volte indica arricchimento in MAV. C'erano anche numero di geni con variazioni di piegatura molto grandi che erano: 1) proteine ​​della matrice extracellulare (non specificamente correlati ai vasi), 2) trasportatori soluti e 3) metabolismo lipidico e acido retinoico. Inoltre, la crescita pochi e differenziazione genetica o fattori di trascrizione sono stati trovati.

Figura 1. Confronto tra l'espressione genica in MAV con la corteccia parietale e nello striato. Trama Vulcano confrontando i livelli di espressione genica della corteccia parietale e nello striato (grafico in alto) e la corteccia parietale e MAV (grafico in basso). I simboli rossi indicano i geni che sono significativamente diversi betweregioni en con p <0.05 e hanno una espressione differenziale di 1,5 volte o superiore tra le regioni. I simboli neri rappresentano i geni che non differiscono in modo significativo tra le regioni (p> 0,05) e sono meno di 1,5 volte diversi per espressione. I simboli rosa indicano geni con meno di 1,5 volte differenza di espressione, ma statisticamente significativa con p <0.05. I simboli gialli identificare i geni che hanno un espressione di 1,5 volte o superiore, ma questo cambiamento non è statisticamente significativa a p <0,05.

Abbreviazioni

AMPH anfetamine
EIH eco-ipertermia indotta
Meningi MAV e vascolarizzazione cerebrale associata
Norm normotermica controlla

Figura 2. Effetti di ipertermia e anfetamine sull'espressione genica in MAV. Trame Volcano confrontolivelli di espressione genica nel MAV dopo salina, EIH o AMPH al punto 3 ore di tempo. I simboli rossi indicano i geni che si ritiene essere molto diversa, mentre i punti neri / cerchi rappresentano i geni che non differiscono in modo significativo tra le regioni. Un'ulteriore analisi statistica è stato utilizzato per verificare che un'espressione differenze tra il controllo e trattamenti erano infatti statisticamente significativa.

MAV Expression Expression Cervello	NCBI Gene Simboli	Specificità tissutale o funzione riportato (s)
> 50-fold	Anxa2 una, Col8a1, Des, Esm1, Glycam1, un Kl, Lect1, LEPR, Lum, MYH11, OGN, Tagln, Thbs2, TNNT2	Vascolarizzazione & Cuore
> 50-fold	CCL19, un CD74, DEFB1, Lrrc21, Mgl1, MRC1, Msln, Pla2g5, Prg4, RT1-Bb, RT1-Da	Sistema immunitario
> 50-fold	ADH1, Aebp1, Aldh1a2, GSTM2	Acido retinoico e trasformazione dei lipidi
> 50-fold	CDH1, COL3A1, COL1A2, Colec12, Cpxm2, CPZ, DCN, Emp3, GPC3, Nupr1, OMD, Pcolce Slamf9, Tmem27, Tspan8	Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula
> 50-fold	AQP1, Asgr1, Kcnj13, Slc5a5, Slc6a13, Slc6a20, Slc22a6, Sned1, Ttr	Ion & Omeostasi Solute
> 50-fold	Alx3, CDKN1C, FOXC2, Igfbp2, Ifitm1, Ifitm2, Nkx6-1, OSR1, Prrx2, SFRP1, Tbx15. Upk1b, Wisp2, Wnt6	Sviluppo e regolazione della trascrizione
> 50-fold	Gpha2, Mfap5, Mpzl2 Plac8, Scgb1c1, Sostdc1, Steap1	Sconosciuto e Varie
30-50-fold	ANXA1 una, Angpt2, un C6, GJB2, Ptgis, Thbd, TIMP1	Vascolarizzazione & Cuore
30-50-fold	Casp12, CCL2, CCR1, Cd14, CXCL10, Ifitm3, Klra5, Lgals1, Lgals3, Ms4a4a, Ms4a7, Plscr1, SPP1, Xcl1	Sistema immunitario
30-50-fold	COL6A3, Cpxm1, Efemp1, Fmod, MGP, Nid2	Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula
30-50-fold	Cp, Cubn, GCGR, S100a6, Scn7a, Sct, Slc4a5, Slc16a11, Slco1a5	Ion & omeostasi Solute
30-50-fold	CFD, Ch25h, Crabp2, Rarres2	Acido retinoico e trasformazione dei lipidi
30-50-fold	BMP6, Casp12, Dab2, Folr1, Igf2, Msx1, Tbx18, Twist1, Wnt5b	Sviluppo e regolazione della trascrizione
30-50-fold	Cela3b, Cln6, C1qtnf7, Copz2, Dhrs7c, Gng11, Prss23, Srpx, Vim	Sconosciuto e Varie
15-30-fold	Adm, Angpt1, Angptl2, BGN, un Cklf, Cnn1, Cox8h, Ctsk, F13A1, GJA5, Klf4, Lox, Lyz, Myl9, procr, PROS1, RT1-Ba, Serpinb10, Serping1, Serpinf1, TGM2, Tnmd, Trim63, Txnip una, Vamp5, Vtn	Vascolarizzazione & Cuore
15-30-fold	Ada a, Bst2, Ccl6, CD40, CD68, Ctsc, Dap, Faim3, Fkbp9, Fxyd5, Fmo1, Glipr1, Ier3, Ifi47, Igsf6, Msc, Nfatc4, RT1-Db1, Serpinb1a, TiR4, Tubb6	Sistema immunitario
15-30-fold	Adamtsl4, COL1A1, CRB3, Dpt, Egfl3, FBN1, Fbln1, Fbln5, Fn1, Itgb4, LAMA2, Lgals3bp, Loxl1, Mfap4, MMP14, Mmp23, Ppic, Serpinh1, TIMP3	Matrice extracellulare e giunzioni cellula-cellula
15-30-fold	Cybrd1, Selenbp1, SLC2A4, Slc9a2, Slc13a3, Slc16a4, Slc22a8, Slc22a18	Ion & omeostasi Solute
15-30-fold	AGPAT2, Bdh2, Cyp26b1, Lpar3, Ltb4dh, Olr1, PON3, Rbp1, RBP4	Acido retinoico e trasformazione dei lipidi
15-30-fold	Atf3, Dkk4, Eya2, Ifitm7, Ltbp1, Mustn1, Nr2f2, Ptrf, Sphk1, TGFBI, Tcea3 Tcfap2b, Wnt2b, Wnt5a, Zic1	Sviluppo e regolazione della trascrizione
15-30-fold	Adamts12, Adamtsl3, C1r, Crispld2, Crygn, CYP1B1, Dse, Enpep, Enpp2, Epn3, FLNA, FMO3, Gnmt, Gprc5c, HSPB1, Klc3, Krt18, Krt19, Mdk, Mesp1, Ms4a6a, Ms4a6b, Ms4a11, Net1, Pdlim2, Phactr2, PLP2, Ppp1r3b, Pqlc3, Rin3, Spag11, Sult1a1, Tmem106a, Wfikkn2	Sconosciuto e Varie

^* I geni inclusi nella tabella deve essere al tempo stesso più di 15 volte l'espressione di sopra nello striato e Parietal corteccia e 5 volte al di sopra dei livelli di fondo. Il più basso dei due rapporti (MAV / striato o MAV / corteccia parietale) per ogni gene è stato utilizzato per il raggruppamento.

^un geni si trovano in cellule endoteliali, ma anche probabilmente un ruolo importante nel mediare risposte immunitarie.

Tabella 1. Geni con un 15-fold ^* o espressione aumentata in più rispetto al MAV striato e corteccia parietale.

Discussione

Aspetti tecnici del MAV e dissezione del plesso coroide

È critico durante la dissezione del MAV avere il cervello "sommersa" la maggior parte del tempo in soluzione salina normale o sodio PBS. Permettendo al MAV e la corteccia a disidratarsi durante la dissezione comporterà la MAV aderendo strettamente al I. strato corticale Ciò consentirà di aumentare la quantità di tessuto corticale raccolto con il MAV e / o provocare l'impossibilità di rimuovere queste sezioni MAV aderenti dalla corteccia. Inoltre, la pazienza è necessaria durante la dissezione. Ancora una volta, se si incontra una certa resistenza nella rimozione del MAV dalla corteccia di un emisfero durante la dissezione, passare alla emisfero e tornare poi verso il lato dove è stato incontrato resistenza. Questo metodo ci vuole un pò di pratica per perfezionare e richiede circa 5 a 15 "pratica" dissezioni prima di un raccolto costantemente uniforme di tessuto MAV è raggiunto. Il metodo di avviamento della dissezione e removal del MAV al circolo arterioso alla base del cervello facilita la rimozione delle meningi utilizzando il sistema vascolare più grande come supporto "ponteggi".

Molto del sangue originariamente nella vascolatura MAV dopo sacrificio deve essere espulso durante la dissezione, e meno del 5% del RNA raccolto da MAV dovrebbe essere di origine sangue. È possibile rimuovere quasi tutto il sangue dell'animale mediante perfusione con 50 a 70 ml di soluzione salina, utilizzando tecniche istologiche, prima della decapitazione e la rimozione del cervello. Tuttavia, è quindi molto più difficile visualizzare i tessuti MAV durante la dissezione. Le tre fonti più probabili di "contaminazione" dei tessuti MAV sono la ghiandola pineale, strato corticale ho tessuto e tessuto residuo bulbo olfattivo, ma è anche possibile ottenere tessuto ghiandola pituitaria nella preparazione. Contaminazione pineale nel MAV viene rilevato dal MAV contenente un round 1-2 sfera mm di diametro che è di colore rosso scuro. La funzione primariadella ghiandola pineale è normalmente considerata completamente diverso dal MAV. La sua funzione primaria è di produrre melatonina, che regola gli aspetti del ritmo circadiano ^9, e in lipoxygenation ¹⁰ di precursori lipidici. Sebbene la Lox gene che regola l'attività della lipossigenasi, è stato pensato per essere presente negli adulti principalmente nella ghiandola pineale ^10, i nostri risultati indicano che è anche costantemente presente a livelli significativi MAV. Residui corticali o olfattiva contaminazione risultati bulbo nella rosa web-come il tessuto MAV avendo alcuni 1-2 tessuti più densi mm che sono più pallido molto nel colore racchiuso in esso. Questo può essere notato da "galleggiare" il MAV sulla superficie del tampone, e quindi rimuovendo i tessuti più pesanti corticali o bulbo utilizzando le due dissettore.

Se la contaminazione del MAV da strato corticale I tessuti, tessuti ipotalamica o la ghiandola pineale è presente, diversi geni avrà un significativoespressione cativamente maggiore di quello che è normalmente presente in una dissezione "pulita". La contaminazione del MAV con ghiandola pineale si tradurrà in maggiore espressione di arylalkylamine N-acetiltransferasi (Aanat), che è necessario per la sintesi di melatonina. Purtroppo, se la contaminazione pineale si verifica durante la dissezione MAV, i livelli di Lox in MAV non potrà essere determinato con precisione. Contaminazione del MAV con tessuto corticale potrebbe causare una maggiore espressione di neurone-specifici geni come hippocalcin (HPCA), parvalbumin (Pvalb) e / o recettore neuronale pentraxina (Nptxr). Contaminazione di MAV con il tessuto ipotalamico comporterà la più alta espressione di ormone della crescita 1 (GH1), proopiomelanocortin (POMC). Nel caso in cui qualche contaminazione esiste nei tessuti raccolti, la maggior parte di tali geni possono essere identificati ed impiegati in analisi di espressione genica. Ciò è particolarmente importante per i geni presenti nel blo circolanteod ancora che possono essere presenti in MAV o plesso coroide.

Interpretting dati di espressione genica da raccolte MAV e della coroide plesso

La superficie cerebrale (superficiale) vascolare con meningi associati (MAV) e del plesso coroide sono necessari per il flusso sanguigno cerebrale e liquido cerebrospinale (CSF) omeostasi ^{4,11, 12, 13, 14, 15, 16, 17.} Il raccolto tessuto è adatto per l'analisi biochimiche e fisiologiche, e il MAV ha dimostrato di essere sensibili a danneggiare prodotta da anfetamina e ^1,2 ipertermia attraverso analisi di espressione genica. Questi risultati sono commisurati con ciò che è anche conosciuto circa l'ipertermia grave e l'esposizione alle anfetamine per la vascolarizzazione del cervello in generale ^18-19-20. Dati clinici umani sostiene la convinzione che il sistema vascolare subdurale è sensibile ai danni da anfetamine e metanfetamine ^21,22. Inoltre, i maggiori e minori vasculatures cerebrali comzione quelle nello strato piale delle meningi che sono raccolti nel MAV sono di interesse potenzialmente elevato nell'ambito delle indagini concussive tipi di trauma cranico ^{23,24 25.} L'attuale profilo di espressione genica ha prodotto dal MAV indica che il piale e, eventualmente, le membrane meningee aracnoide può giocare un ruolo più importante di quanto previsto nella regolazione della composizione CSF. In futuro, attraverso l'uso di tecniche di dissezione microscopio, può essere possibile separare ulteriormente i tessuti comprendenti il ​​MAV modo che le membrane piali e aracnoide può essere separato dalla presente maggiore vascolarizzazione arteriosa ed eventualmente uno dall'altro. Ciò consentirà una migliore interpretazione della funzione di ciascuno di questi tre componenti del MAV raccolto.

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nome del reagente / attrezzature	Azienda	Numero di catalogo	Commenti (opzionale)
Soluzione fisiologica (9 grammi salini / 1 litro H 2 O)	Interno		Dissezione del buffer
0,1 M fosfato di sodio pH 7,4	Interno		Dissezione del buffer
Bone Rongeurs	Roboz	RS-8300	Skull osso rimozione
Pinze-piegato punta (4 "di lunghezza e 0,8 mm di larghezza punta)	Roboz	RS-5135 o RS-5137	Dissettore
Pinza-dritto punta (5.5 "di lunghezza)	Roboz	RS-8124 o RS-8104	Thumb Dressing pinze