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In questo articolo

  • Riepilogo
  • Abstract
  • Introduzione
  • Protocollo
  • Risultati
  • Discussione
  • Divulgazioni
  • Riconoscimenti
  • Materiali
  • Riferimenti
  • Ristampe e Autorizzazioni

Riepilogo

Il presente protocollo descrive un metodo efficiente per l'ottimizzazione della tecnologia di lavorazione di Tiebangchui lavorato con vino d'orzo delle Highlands basato su una superficie di risposta del design Box-Behnken combinata con il metodo dell'entropia.

Abstract

La lavorazione di etnofarmaci tossici è di grande importanza per la loro applicazione clinica sicura. Pertanto, i limiti dell'elaborazione tradizionale dovrebbero essere affrontati e il metodo di lavorazione delle etnomedicine dovrebbe essere standardizzato utilizzando moderni metodi di ricerca. In questo studio, è stata ottimizzata la tecnologia di lavorazione di una medicina tibetana comunemente usata Tiebangchui (TBC), la radice essiccata del pendolo di Aconito Busch, lavorata con vino d'orzo delle Highlands. Il contenuto di alcaloide diestere-diterpenoide (DDA) (aconitina, 3-deossiaconitina, 3-acetilaconitina) e alcaloide monoestere-diterpenoide (MDA) (benzoiliconina) sono stati utilizzati come indicatori di valutazione e il coefficiente di peso di ciascun indice di valutazione è stato determinato con il metodo dell'entropia.

Il test a fattore singolo e il design Box-Behnken sono stati utilizzati per studiare l'influenza del rapporto tra vino d'orzo delle Highlands e TBC, lo spessore della fetta di TBC e il tempo di lavorazione. Il punteggio completo è stato eseguito in base al peso oggettivo di ciascun indice determinato dal metodo dell'entropia. Le condizioni ottimali di lavorazione del TBC con vino d'orzo delle Highlands erano le seguenti: la quantità di vino d'orzo delle Highlands è cinque volte quella di TBC, un tempo di ammollo di 24 ore e uno spessore TBC di 1,5 cm. I risultati hanno mostrato che la deviazione standard relativa tra il test di verifica e il valore previsto era inferiore al 2,55% e la tecnologia di lavorazione ottimizzata del TBC lavorato con vino d'orzo delle Highlands è semplice, fattibile e stabile, e quindi può fornire un riferimento per la produzione industriale.

Introduzione

Tiebangchui (TBC), la radice essiccata del pendolo di Aconito Busch, è una nota medicina tibetana ed è stata inizialmente registrata nel classico libro medico tibetano "Four Medical Tantra"1,2. Secondo gli "Standard sui farmaci del Ministero della Salute della Repubblica Popolare Cinese (Medicina Tibetana)", TBC è efficace nell'espellere il freddo, alleviare il dolore, dissipare il vento e calmare lo shock, ed è comunemente usato per trattare l'artrite reumatoide nelle cliniche 3,4,5.

TBC contiene principalmente alcaloidi, tra cui alcaloidi diestere-diterpenoidi altamente tossici (DDA) e gli alcaloidi monoestere-diterpenoidi moderatamente tossici (MDA)6,7,8. Questi componenti chimici sono principi attivi con effetti medicinali ma sono tossici. Uno dei più famosi principi attivi e tossici, l'aconitina, provoca avvelenamento quando supera 1 mg9. Pertanto, l'uso improprio o eccessivo di TBC potrebbe causare avvelenamento e persino la morte, e l'attenuazione della tossicità e la riserva di efficacia della TBC sono cruciali per la sua applicazione clinica sicura10,11.

L'elaborazione è un metodo efficace per disintossicare TBC. Secondo gli antichi libri di medicina tibetana, la lavorazione con vino d'orzo delle Highlands è un modo efficace per attenuare la tossicità e preservare l'efficacia della TBC. TBC è immerso nel vino d'orzo delle Highlands, conservato per una notte, essiccato e aggiunto ai medicinali12. Tuttavia, la tecnologia di elaborazione specifica e i potenziali fattori di influenza sono raramente riportati e il processo di elaborazione tradizionale spesso si basa sull'esperienza e manca di metodi standardizzati. Pertanto, sono necessari moderni metodi scientifici e tecnologici per ottimizzare e standardizzare il processo di elaborazione.

Il metodo di progettazione Box-Behnken viene utilizzato per studiare le interazioni tra diversi fattori e la loro influenza sul punteggio completo attraverso il fitting polinomiale quadratico. Questo design consente l'osservazione intuitiva delle condizioni ottimali ed è stato ampiamente utilizzato nel campo della farmacia13. Ad esempio, il metodo di progettazione Box-Behnken, basato sul metodo dell'entropia, ha ottimizzato con successo la tecnologia di lavorazione della frittura con aceto di Curcuma Longa Radix14. In questo studio, il disegno sperimentale della superficie di risposta Box-Behnken combinato con il metodo dell'entropia è stato utilizzato per ottimizzare la tecnologia di lavorazione del TBC lavorato con vino d'orzo delle Highlands. La tecnologia di elaborazione ottimizzata dovrebbe garantire il controllo di qualità e l'uso clinico sicuro.

Protocollo

In questo studio, la tecnologia di lavorazione del TBC lavorato con vino d'orzo delle Highlands è stata ottimizzata con un design Box-Behnken combinato con il metodo dell'entropia. Il contenuto di DDA e MDA è stato utilizzato come indicatore di valutazione e il coefficiente di peso di ciascun indice di valutazione è stato determinato con il metodo dell'entropia.

1. Preparazione sperimentale

  1. Preparare il vino d'orzo delle Highlands15.
    1. Prendi 500,00 g di riso nero d'orzo delle Highlands e aggiungi cinque volte la quantità di acqua. Cuocere il riso fino a quando l'acqua rimanente viene assorbita (~2 h). Versare, attendere che la temperatura scenda a 37 °C, aggiungere 4 g di Jiuqu (vedi Tabella dei materiali), mescolare bene, sigillare la lattina, avvolgere il contenitore con cotone idrofilo e lasciarlo stufare per 7 giorni.
    2. Aggiungere 300 ml di acqua il 7 ° giorno e sigillare nuovamente. L'8 ° giorno, iniziare a rimuovere il vino e sostituire con 300 ml di acqua in seguito. Sigillare e fermentare per 1 giorno, prendere il vino e aggiungere nuovamente 300 ml di acqua. Ripetere questa procedura tre volte e unire i liquori.
    3. Portare a ebollizione, quindi ridurre la fiamma a fuoco lento e continuare la cottura fino a quando l'acqua rimanente non viene assorbita.
  2. Per preparare i prodotti trasformati, pesare accuratamente il TBC in un contenitore, aggiungere vino d'orzo delle Highlands e immergere per 1 giorno. Quindi, asciugare in un forno elettrico di essiccazione a temperatura costante.
    NOTA: La temperatura di essiccazione deve essere inferiore a 40 °C per evitare cambiamenti nella composizione dell'alcaloide.
  3. Preparare la soluzione del campione di prova.
    1. Pesare accuratamente la polvere di prodotto trasformato TBC (2 g) in un matraccio conico, aggiungere una soluzione di ammoniaca al 40% ed eseguire l'estrazione assistita da ultrasuoni con solventi misti isopropanolo-etilacetato (1:1) (50 ml) (potenza: 200 W; frequenza: 40 kHz; temperatura: 40 °C) per 30 minuti.
      NOTA: Per preparare una soluzione di ammoniaca al 40%, trasferire 40 mL di ammoniaca in un matraccio tarato da 100 mL e quindi diluire con acqua pura.
    2. Regolare la soluzione estratta al peso originale aggiungendo una miscela di isopropanolo-acetato di etile (1:1 v/v).
    3. Trasferire accuratamente la soluzione estratta (25 ml) in un matraccio a fondo tondo per il recupero del solvente a pressione ridotta fino a quando non è asciutto.
    4. Infine, trasferire una soluzione di acido cloridrico-metanolo allo 0,05% per sciogliere il residuo della fase 1.3.3 in un matraccio tarato da 5 mL e diluire con una soluzione di cloridrato di metanolo allo 0,05%. Filtrare la soluzione attraverso un filtro a membrana microporosa da 0,22 μm prima dell'iniezione nei sistemi di cromatografia liquida (HPLC) ad alte prestazioni.
      NOTA: Preparare acido cloridrato di metanolo allo 0,05% aggiungendo 0,05 mL di acido cloridrico in un matraccio tarato da 100 ml, quindi diluire con metanolo.
  4. Preparare una soluzione standard pesando accuratamente 5,18 mg di benzoiliconina, 13,13 mg di aconitina, 10,05 mg di 3-deossiaconitina e 10,09 mg di 3-acetilaconitina, quindi porre i solidi in un matraccio tarato da 5 ml singolarmente. Diluire con una soluzione di cloridrato di metanolo allo 0,05%.

2. Stato cromatografico

  1. Impostare le condizioni cromatografiche come mostrato nella Tabella 1 per HPLC. I dettagli degli strumenti utilizzati sono forniti nella Tabella dei Materiali.

3. Test di adattabilità del sistema

  1. Gamma di linearità
    NOTA: In primo luogo, abbiamo usato HPLC per determinare le aree di picco di benzoilaconitina, aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina nel campione, quindi determinato in modo casuale l'area di picco di una concentrazione nota di soluzione standard. Successivamente, abbiamo confrontato la differenza tra due aree di picco (soluzione campione e soluzione standard) per stimare la concentrazione di benzoilaconitina, aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina in campioni diversi, quindi abbiamo regolato la soluzione standard in un intervallo lineare per includere la concentrazione del campione nella curva. Le concentrazioni della curva standard sono mostrate nella tabella 2.
    1. Preparare soluzioni di riferimento di benzoiletinaconitina contenenti 1,036 mg/ml, 0,518 mg/ml, 0,2072 mg/ml, 0,1036 mg/ml e 0,0518 mg/ml.
    2. Preparare soluzioni di riferimento di aconitina contenenti 1,313 mg/ml, 0,5252 mg/ml, 0,2626 mg/ml, 0,1313 mg/ml e 0,05252 mg/ml.
    3. Preparare soluzioni di riferimento di 3-deossiaconitina contenenti 1,005 mg/ml, 0,5025 mg/ml, 0,201 mg/ml, 0,1005 mg/ml e 0,402 mg/ml.
    4. Preparare soluzioni di riferimento di 3-acetilaconitina contenenti 0,2018 mg/ml, 0,1009 mg/ml, 0,04036 mg/ml, 0,02018 mg/ml e 0,01009 mg/ml.
    5. Studiare la linearità di ciascun composto tracciando l'area di picco rispetto alla concentrazione di iniezione.
  2. Per eseguire il test di precisione, iniettare 10 μL di ciascuna soluzione di riferimento nel sistema HPLC sei volte al giorno e utilizzare le stesse condizioni HPLC descritte al punto 2.1 per eseguire i campioni Registrare l'area di picco di ciascun componente.
  3. Eseguire test di stabilità infragiornalieri iniettando 10 μL della soluzione campione preparata tramite il punto 1.3 e determinare le aree di picco dopo 0 h, 2 h, 4 h, 8 h, 14 h, 12 h e 24 h16.
  4. Eseguire un test di riproducibilità prelevando sei campioni dello stesso lotto di TBC per preparare la soluzione campione di prova, secondo il passaggio 1.3. Iniettare 10 μL di ciascun campione nel sistema HPLC ed eseguire i campioni come descritto al punto 2.1.
  5. Eseguire il test di recupero per valutare l'accuratezza del metodo. Aggiungere il 100% della soluzione standard di ciascun componente indice (benzoiliconina, aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina) nella soluzione di prova per calcolare il tasso di recupero, rispettivamente. Ad esempio, poiché il contenuto di benzoilacestinina è di 0,1524 mg/ml nel campione TBC, pesare accuratamente 0,1524 mg di standard di benzoilacestinina e aggiungerli al campione TBC, quindi preparare la soluzione del campione di prova secondo il punto 1.3. Eseguire questi esempi con le stesse condizioni HPLC descritte nel passaggio 2.1. Calcola il tasso di recupero usando l'equazione (1):
    figure-protocol-6830(1)
    Qui, A è la quantità di componente (benzoilaconitina, aconitina, 3-deossiaconitina o 3-acetilaconitina) da misurare nella soluzione del campione, B è la quantità di standard aggiunto (benzoiletitina, aconitina, 3-deossiaconitina o 3-acetilaconitina) e C è il valore misurato della soluzione contenente la soluzione standard e la soluzione campione (vedere Tabella 3).). Fare riferimento al passaggio 2.1 per le condizioni cromatografiche per eseguire i passaggi precedenti. Il tasso di recupero riflette il grado di perdita del componente target (benzoilaconitina, aconitina, 3-deossiaconitina o 3-acetilaconitina) durante l'analisi del campione; Maggiore è il tasso di recupero, minore è la perdita del componente di destinazione.

4. Test a fattore singolo di TBC lavorato con vino d'orzo delle Highlands

NOTA: Il rapporto tra vino d'orzo delle Highlands e TBC, lo spessore della fetta di TBC e il tempo di ammollo influenzeranno la dissoluzione di componenti più tossici (aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina) in TBC durante il TBC trattato con vino d'orzo delle Highlands17. Il test a fattore singolo e il design Box-Behnken sono stati utilizzati per studiare l'influenza del rapporto tra vino d'orzo delle Highlands e TBC, lo spessore della fetta di TBC e il tempo di ammollo.

  1. Eseguire il test di aggiunta del vino d'orzo delle Highlands (A) impostando cinque gruppi di test, ciascuno con 30 g di TBC, in cui la quantità di vino d'orzo delle Highlands è due, tre, quattro, cinque e sei volte la quantità di TBC nella ricetta. Il tempo di ammollo è di 12 ore e le fette hanno uno spessore di 1,0 cm18.
    NOTA: ogni gruppo dello stesso test di condizione deve essere elaborato in tre gruppi paralleli.
  2. Eseguire il test del tempo di ammollo (B) impostando cinque gruppi di test, ciascuno con 30 g di TBC. I tempi di ammollo sono 12 h, 24 h, 36 h e 48 h. La quantità di vino d'orzo delle Highlands è cinque volte quella di TBC e le fette hanno uno spessore di1,0 cm 19.
    NOTA: ogni gruppo dello stesso esperimento di condizione deve essere elaborato in tre gruppi paralleli.
  3. Eseguire il test dello spessore di affettatura (C) impostando cinque gruppi di test, ciascuno con 30 g di TBC. Le fette hanno uno spessore di 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 e 2,5 cm, il tempo di ammollo è di 24 ore e la quantità di vino d'orzo delle Highlands è cinque volte quella di TBC20.
    NOTA: ogni gruppo dello stesso esperimento di condizione deve essere elaborato in tre gruppi paralleli.
  4. Pesare accuratamente i prodotti trasformati per ciascun gruppo di test per preparare la soluzione del campione di prova secondo il punto 1.3. Determinare l'area di picco di ciascun campione mediante HPLC e utilizzare la curva standard per stimare le quantità di MDA e DDA. Nella curva standard, y è l'area del picco e x è il contenuto. Il contenuto di MDA è benzoilaconitina e il contenuto di DDA è la somma di aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina.
  5. Utilizzare il contenuto totale delle DDA e il contenuto degli MDA come indicatori di valutazione e determinare il coefficiente di peso di ciascun indice di valutazione e il punteggio completo tramite il metodo dell'entropia (sezione 5).
    ATTENZIONE: TBC è tossico e quindi devono essere prese misure protettive durante la lavorazione.

5. Metodo di entropia per calcolare il punteggio completo

NOTA: Utilizziamo i dati sperimentali del test dello spessore di tranciatura nel test a fattore singolo come esempio per illustrare in dettaglio il processo di calcolo. Utilizziamo l'area di picco dei componenti in ciascun campione nella tabella supplementare S1 e la curva standard nella tabella 2 per calcolare il contenuto di MDA e DDA (vedere la tabella supplementare S2). Nell'equazione lineare, y è l'area del picco e x è il contenuto. In questo studio, l'MDA moderatamente tossico (benzoilaconitina) è stato utilizzato come indicatore positivo e il contenuto totale di DDA (aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina) con elevata tossicità è stato utilizzato come indicatore negativo. Il contenuto di MDA è benzoilaconitina e il contenuto di DDA è la somma di aconitina, 3-deossiaconitina e 3-acetilaconitina. Ogni campione ha due indicatori di valutazione: i = 1,2,...,n e j = 1,2,... m21.

  1. Utilizzare l'equazione (2) per standardizzare il contenuto degli MDA22.
    figure-protocol-11762(2)
    Così figure-protocol-11879
    NOTA: Xij è il valore dell'indicatore j-esimo del campione i-esimo. Xij* è il valore standardizzato di Xij. Ad esempio, i = 3 e j = 1, X31 rappresenta il valore del primo indicatore del terzo campione ed figure-protocol-12222 è il valore standardizzato del primo indicatore nel terzo campione. figure-protocol-12379 sono mostrati nella tabella supplementare S3.
  2. Utilizzare l'equazione (3) per standardizzare il contenuto totale delle DDA23.
    figure-protocol-12664(3)
    figure-protocol-12776
    NOTA: Qui, i = 3, j = 2, rappresenta il secondo indicatore del terzo campione. figure-protocol-12947 è il valore standardizzato del secondo indicatore nel terzo campione. figure-protocol-13106 sono riportati nella tabella supplementare S3.
  3. Utilizzare le equazioni (4) e (5) per definire il valore di entropia (Hj) di ciascun indicatore23.
    1. Calcolare la probabilità della j-esima prova sotto l'i-esimo indicatore di valutazione Pij usando l'equazione (4).
      figure-protocol-13588(4)
      Per il numero 3,
      figure-protocol-13721
      figure-protocol-13814
      NOTA: i valori di probabilità per il primo indicatore e il secondo indicatore del terzo campione sono rispettivamente 0,2374 e 0,2812. figure-protocol-14042 sono riportati nella tabella supplementare S3.
    2. Calcola l'entropia dell'informazione Hj.
      figure-protocol-14271(5)
      figure-protocol-14384
      figure-protocol-14477
      NOTA: H 1 è l'entropia del primo indicatore (MDA) e H2 è l'entropia del secondo indicatore (DDA) nel test dello spessore di taglio.
  4. Utilizzare l'equazione (6) per calcolare i pesi dell'indicatore (Wj)23.
    figure-protocol-14880 (6)
    figure-protocol-14994= 33,3%
    figure-protocol-15094= 66,7%
    NOTA: Wjè il coefficiente di peso di ciascun indicatore. Nel test di spessore di taglio, il coefficiente di peso dell'indicatore positivo (MDA) e dell'indicatore negativo (DDA) è rispettivamente del 33,3% e del 66,7%.
  5. Utilizzare l'equazione (7) per calcolare il punteggio complessivo degli indicatori23.
    figure-protocol-15572 (7)
    Per il numero 3, figure-protocol-15705
    figure-protocol-15798
    NOTA: Si è il punteggio completo di ciascun campione. Dobbiamo ottenere il punteggio più alto come punto centrale nel design Box-Behnken. S 1, S 2, S 3, S 4 e S5 sono mostrati nella tabella supplementare S3.

6. Design Box-Behnken

  1. Attraverso il test a fattore singolo, utilizzare la condizione con il punteggio completo più alto (vedere Tabella 4, Tabella 5, Tabella 6 e Figura 2) come punto centrale della superficie di risposta. Utilizzare la quantità di vino d'orzo delle Highlands (A), il tempo di ammollo (B) e lo spessore della fetta di TBC (C) come fattori di influenza e il punteggio completo come valore di risposta24.
    NOTA: in base ai dati a fattore singolo nella Tabella 4, Tabella 5 e Tabella 6, il punteggio complessivo più alto viene calcolato dalle equazioni (2), (3), (4), (5), (6) e (7) nella sezione 5 e si ottiene il punteggio migliore. La quantità di vino d'orzo delle Highlands era cinque volte quella del TBC, il tempo di ammollo era di 36 ore e lo spessore dell'affettatura era di 1,0 cm.

7. Fasi operative del software di progettazione Box-Behnken

  1. Aprire il software (vedere Tabella dei materiali) e selezionare Nuovo design | Progettazione box-Behnken (vedere punto 5.1; Scheda supplementare 1).
    1. Immettere il numero di fattori di influenza e immettere le informazioni sul livello (tre fattori di livello; vedere Tabella 7). Il progetto Box-Behnken è composto da 17 esperimenti in questo studio. Infine, fare clic su Continua (vedere il passaggio 5.2; Scheda supplementare 1).
    2. Impostare il punteggio completo (Y) mediante equazioni (2), (3), (4), (5), (6) e (7) nella sezione 5 come risposta. Immettere il numero di valori di risposta (l'immagine mostra un solo valore di risposta) e fare clic su Fine (vedere il passaggio 5.3; Scheda supplementare 1).
    3. Elaborare il TBC con vino d'orzo delle Highlands in base ai risultati del progetto e completare l'esperimento in base ai 17 scenari progettati per la superficie di risposta.
    4. Preparare le soluzioni di esempio seguendo il passaggio 1.3 e calcolare il contenuto totale degli MDA e DDA dal sistema HPLC.
    5. Calcolare il punteggio completo per ciascun gruppo in base alle equazioni (2), (3), (4), (5), (6) e (7) nel passaggio 5 e inserire i risultati del punteggio (vedere il passaggio 5.4; Scheda supplementare 1).
  2. Fare clic su Analizza per analizzare le informazioni sulla data e sul modello (vedere il passaggio 5.4.1; Scheda supplementare 1).
    1. Eseguire la validazione statistica delle equazioni polinomiali e l'analisi della superficie di risposta tracciata nei grafici del modello 3D ottenuti dal software.
    2. Clicca su ANOVA nel menu in alto e osserva la tabella dei risultati.
  3. Fare clic su Ottimizzazione per visualizzare le condizioni di processo ottimali previste (vedere il passaggio 5.4.2; Scheda supplementare 1).

8. Test di convalida

  1. In base ai risultati previsti dal design della superficie di risposta Box-Behnken, nel passaggio 7.3, identificare la condizione di lavorazione ottimale di TBC. Qui, è il seguente: TBC è immerso per 24 ore in cinque volte la quantità di vino d'orzo delle Highlands e lo spessore del TBC è di 1,5 cm. Prendi il livello ottimale di fattori di influenza come condizioni di elaborazione e imposta tre serie parallele di esperimenti per verificare la stabilità della tecnologia di elaborazione.

Risultati

In questo studio, la precisione, la stabilità, la ripetibilità e il recupero del campione di TBC hanno indicato che il metodo è fattibile. Le quattro componenti dell'indice in TBC avevano una buona relazione lineare all'interno di uno specifico intervallo di concentrazione. I cromatogrammi tipici sono mostrati nella Figura 1. I risultati dei test di precisione (Tabella 8) hanno mostrato che la deviazione standard relativa (RSD) delle aree di picco era 2,56%, 1,49% e 2,03%...

Discussione

Come medicina tibetana comunemente usata con effetti tossici, l'effetto di attenuazione della tossicità del trattamento è estremamente importante per l'applicazione clinica della TBC25. In questo studio, la tecnologia di lavorazione del TBC lavorato con vino d'orzo delle Highlands è stata ottimizzata. Esaminando i principali principi attivi e mettendo in relazione gli effetti farmacologici della TBC, abbiamo scoperto che gli alcaloidi della TBC hanno effetti antinfiammatori e analgesici e posso...

Divulgazioni

Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.

Riconoscimenti

Questo lavoro è stato sostenuto finanziariamente dalla National Natural Science Foundation of China (n. 82130113), dalla China Postdoctoral Science Foundation (n. 2021MD703800), dalla Science Foundation for Youths of Science & Technology Department della provincia del Sichuan (n. 2022NSFSC1449) e dal programma di promozione della ricerca "Xinglin Scholars" dell'Università di Chengdu di medicina tradizionale cinese (No. BSH2021009).

Materiali

NameCompanyCatalog NumberComments
AconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS000905
3-AcetylaconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS010552
3-DeoxyaconitineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS011258
BenzoylaconineChengdu Push Biotechnology Co.,LtdPS010300
Circulating water vacuum pumpGongyi City Yuhua Instrument Co., LtdSHZ-DIII
Design-Expert State-East Corporation8.0.6
Electric constant temperature drying ovenShanghai Yuejin Medical Equipment Co., Ltd101-3-BS
Electronic analytical balanceShanghai Liangping Instruments Co., Ltd.FA1004
High performance liquid chromatographyShimadzu Enterprise Management (China) Co., Ltdshimadzu 2030
Highland barley riceKangding City, Ganzi Tibetan Autonomous Prefecture, Sichuan Province20221015
Millipore filterTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltdφ13 0.22 Nylon66
Rotary evaporatorShanghai Yarong Biochemical Instrument FactoryRE-2000A
Starter of liquor-makingAngel Yeast CO., LtdBJ22-104
Ultra pure water systemicMerck Millipore Ltd.Milli-Q
Ultrasonic cleansing machineNingbo Xinyi Ultrasonic Equipment Co., LtdSB-8200 DTS

Riferimenti

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