Test di tolleranza nicotina in Afidi Utilizzando un esperimento artificiale dieta

Riepilogo

In questo video e saggio è dimostrato che il test di tolleranza di nicotina a due tipi di afidi uno che infesta le piante di tabacco in campo e uno che non lo fa.

Abstract

Le piante possono potenziamento della produzione di molti metaboliti seconday differenti in risposta alla alimentazione degli insetti. Uno di questi metaboliti, la nicotina, è ben noto per avere proprietà insetticida. Una risposta di piante di tabacco per erbivori, o di essere rosicchiato su da insetti, è quello di aumentare la produzione di questo alcaloide neurotossici. Qui, dimostreremo come impostare un esperimento per rispondere a questa domanda se un tabacco adattato ceppo del afide verde del pesco, Myzus persicae, in grado di tollerare livelli più elevati di nicotina rispetto al un ceppo di questo insetto che non infestano il tabacco in il campo.

Protocollo

In questo esperimento, 4 afidi adulti sono racchiusi in un bicchiere di plastica di piccole dimensioni. Si nutrono di dieta liquida pipettati tra 2 strati di parafilm estendeva sopra la parte superiore della coppa. Dopo 3 giorni di alimentazione, la tossicità di diete contenenti diverse concentrazioni di nicotina sia rispetto al controllo diete contando adulti e larve di afidi in ogni tazza.

1. Fai soluzioni contenenti saccarosio e 20 aminoacidi. Afidi possono sussistere in questa dieta, che riproducono a livelli normali, per almeno 1 settimana. Vedere file allegato per l'alimentazione artificiale.
2. Aliquota 1 mL di questa dieta in 6 differenti tubi eppendorf contenente nicotina. Etichetta con rispetto a diverse concentrazioni di nicotina utilizzati, che vanno da 0-500μM.
3. Selezionare 4 afidi, rosso o verde, e messo in queste tazze sperimentale.
4. Quando si seleziona afidi, è importante che siano di età coerente. Tipicamente, cercare afidi di analoghe dimensioni e colore (gli afidi rossi diventano più scuri quando sono più grandi).
5. Coprite la coppa con un pezzo di parafilm. Racchiudere la dieta tra i 2 pezzi di parafilm. Parzialmente tratto il secondo livello parafilm intorno ai bordi della tazza. Aliquota della dieta liquida tra gli strati, e sigillare lo strato superiore verso il basso.
6. Conservare queste coppe nella stanza degli insetti sotto le luci in una lunga giornata fotoperiodo per 3 giorni, dopo di che i dati per l'esperimento può essere raccolto.

Si prega di visitare Annual Reviews di Biologia Vegetale per ulteriori informazioni su questo protocollo e immunità pianta insetti erbivori.