Elettroforesi capillare

Fonte: Laboratorio del Dr.B. Jill Venton - Università della Virginia

L'elettroforesi capillare (CE) è una tecnica di separazione che separa le molecole in un campo elettrico in base alle dimensioni e alla carica. La CE viene eseguita in un piccolo tubo di vetro chiamato capillare che viene riempito con una soluzione elettrolitica. Gli analiti sono separati a causa delle differenze nella mobilità elettroforetica, che varia con la carica, la viscosità del solvente e le dimensioni. L'elettroforesi tradizionale nei gel è limitata nella quantità di tensione che può essere applicata perché gli effetti di riscaldamento di Joule rovineranno il gel e la separazione. I capillari hanno un ampio rapporto superficie-volume e quindi dissipano meglio il calore. Pertanto, le tensioni applicate per un esperimento di elettroforesi capillare sono piuttosto grandi, spesso 10.000-20.000 V.

L'elettroforesi capillare è utile per separazioni ad alte prestazioni. Rispetto alla cromatografia liquida, le separazioni CE sono spesso più veloci ed efficienti. Tuttavia, l'elettroforesi capillare funziona meglio per separare le molecole cariche, che non è una limitazione della cromatografia liquida. CE ha una maggiore capacità di picco rispetto alla cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC), il che significa che le separazioni sono più efficienti e possono essere rilevati più picchi. La strumentazione può essere molto semplice. Tuttavia, l'HPLC è più versatile e molte fasi fisse e mobili sono state sviluppate per diversi tipi di molecole.

1. Configurazione della strumentazione CE

1. Accendere lo strumento CE e il computer. Utilizzando il software del computer, accendere la sorgente luminosa per l'analisi UV per consentirne il riscaldamento. Alcuni software hanno un indicatore quando la lampada è pronta per l'uso (l'icona della lampada diventa colorata).
2. Creare un file di metodi. Impostare i parametri importanti per l'esecuzione del CE. In questa analisi le temperature della cartuccia e della conservazione del campione sono di 35 °C. La l

Gli elettroferogrammi raccolti per i campioni di Pepsi e Pepsi dietetici sono mostrati rispettivamente nelle figure 1 e 2. I tre picchi per caffeina, aspartame e acido benzoico sono osservati nella dieta Pepsi e hanno tempi di migrazione simili a quelli standard. Per la Pepsi normale, è presente il picco di caffeina ma non i picchi di aspartame e acido benzoico. L'analisi CE è veloce in quanto i tempi di migrazione sono di soli 3-4 min.

La curva di calibrazi..

L'elettroforesi capillare viene utilizzata per molte separazioni speciali. Ad esempio, viene utilizzato nell'industria farmaceutica per i test di qualità, per assicurarsi che non ci siano prodotti collaterali o interferenti. CE è particolarmente utile per separare i farmaci con un gruppo amminico di base, poiché le pareti del capillare possono essere rese neutre con un pH acido e quindi il farmaco non si attaccherà al capillare.

Una modalità di CE è stata anche utilizzata per sequenziare...