Posizionare le piastre di decantazione TSA e SAB etichettate vicino all'area di lavoro, ma in un'area che non interferisca con i test. Documentare l'ora di inizio del campionamento. Asetticamente, aprire entrambe le piastre, posizionando i coperchi su una superficie pulita nell'armadio di sicurezza biologica lontano dall'area di lavoro per un massimo di quattro ore per evitare che l'agar si secchi.
Al termine della lavorazione chiudere i coperchi delle piastre e documentare il tempo di arresto del campionamento. Liberamente, insacca i piatti e incubare le colture. Per il campionamento con la punta delle dita guantate, procurarsi due piastre TSALT etichettate.
Rimuovere asetticamente il coperchio delle piastre e posizionarlo su una superficie di lavoro pulita lontano dall'area di campionamento. Arrotolare delicatamente il pad di ciascun dito e pollice sulla superficie del piatto. Utilizzare una forza sufficiente per creare lievi depressioni sull'agar senza rompere la superficie dell'agar.
Riposizionare asetticamente il coperchio sulla piastra. Dopo aver igienizzato le mani al termine del campionamento, insaccare liberamente le piastre e incubare le colture. Per l'inoculazione diretta, seguendo il metodo della farmacopea degli Stati Uniti, posizionare le piastre di decantazione TSA e SAB nell'armadio di biosicurezza.
Dopo aver preparato il cabinet e messo in scena i materiali, documentare l'ora di inizio del campionamento. Procurarsi l'articolo di prova e le relative bottiglie trittiche di brodo di soia e tioglicollato fluido. Se le bottiglie hanno un setto, rimuovere i cappucci protettivi da ogni bottiglia e pulire il setto con una salvietta sterile al alcool.
Vortice l'articolo di prova per garantire una sospensione omogenea e inoculare i flaconi con un volume convalidato dell'articolo di prova utilizzando una siringa sterile e un ago ipodermico. Pulire il setto con una salvietta sterile al cervello e inserire un'unità di ventilazione sterile per consentire il ricambio d'aria durante l'incubazione. Ripetere i passaggi per ogni articolo di prova della sessione.
Chiudere asetticamente le piastre di decantazione TSA e SAB e documentare l'ora finale del campionamento prima di eseguire il campionamento con la punta delle dita guantate. Pulire i guanti con alcool isopropilico sterile al 70%, sacchetto sciolto le piastre e incubare le colture. Trasferire tutti i materiali di prova fuori dall'armadio di sicurezza biologica.
Allo stesso modo, per l'inoculazione diretta, seguendo il metodo di test di sterilità alternativo NIH, posizionare le piastre di sedimentazione TSA e SAB nell'armadio di biosicurezza e documentare l'ora di inizio del campionamento. Ottenere l'articolo di prova e la relativa etichetta IFA Plus, IFN Plus e piastra SAB. Rimuovere i cappucci protettivi dai flaconi IFA Plus e IFN Plus e pulire il setto con una salvietta sterile al alcool.
Dopo aver fatto vortice l'articolo in esame, inoculare i flaconi con il volume convalidato dell'articolo in esame utilizzando una siringa sterile e un ago ipodermico e pulire nuovamente il setto. Incubare le bottiglie sullo strumento BACT/ALERT Dual T. Utilizzando un pipetter, inoculare la piastra SAB con una quantità convalidata dell'articolo di prova e strisciare per l'isolamento utilizzando un anello sterile.
Lasciare riposare per 10 minuti per assicurarsi che il campione non si riversi sul coperchio della piastra quando viene invertito per l'incubazione Posizionare ogni piastra SAB inoculata con un articolo di prova in un sacchetto di plastica. Legarli liberamente. Chiudere asetticamente le piastre di decantazione TSA e SAB.
Documentare l'ora finale del campionamento sulle piastre ed eseguire il campionamento con la punta delle dita guantate. Dopo il campionamento, pulire i guanti con alcol al 70%. Sacchetto sciolto i piatti dopo aver pulito i guanti con alcool e incubare le colture.
Qui viene mostrata una piastra di sedimentazione dell'aria TSA che illustra una singola colonia di un contaminante coltivato durante il monitoraggio del processo passivo dell'aria nell'armadio di sicurezza biologica. La piastra di campionamento superficiale TSALT con tre unità formanti colonie di due distinte morfologie di colonie è mostrata in questa figura. La coltura superficiale TSALT con una singola colonia sul bordo della piastra indica una scarsa manipolazione asettica durante il processo di campionamento.
Il metodo corretto per ottenere campioni di punta delle dita guantate utilizzando la superficie più ampia di ciascun dito o pollice è mostrato in questa immagine. Il processo errato in cui viene campionata solo la punta del dito è mostrato qui. Un esempio di sfere di stampo visibili ad occhio nudo che non sono state rilevate automaticamente dal sistema BACT/ALERT è mostrato qui.
Sulla base di questi risultati, si raccomanda l'ispezione visiva terminale di tutte le bottiglie BACT/ALERT e l'aggiunta della piastra SAB per la coltura fungina utilizzando il metodo alternativo di test di sterilità NIH.
