Per iniziare l'aggiunta dell'anticorpo primario, aspirare l'albumina sierica bovina o BSA dalle cellule HeLa trasfettate fisse e bloccate lasciando 10 microlitri di soluzione di BSA nel pozzetto. Quindi aggiungere 10 microlitri della soluzione anticorpale primaria preparata al 3% BSA in PBS e incubare la piastra al buio a quattro gradi Celsius durante la notte. Dopo l'incubazione, sciacquare ogni pozzetto quattro volte con 100 microlitri di PBS, lasciando 10 microlitri dopo l'ultimo lavaggio.
Quindi, aggiungere 10 microlitri di soluzione anticorpale secondaria alla piastra del pozzetto 384. Utilizzare anticorpi isotipo specifici coniugati a fluorocromi, come Alexa Fluor 488 e Alexa Fluor 555. Dopo aver incubato la piastra al buio per un'ora, sciacquare ogni pozzetto quattro volte con 100 microlitri di PBS e lasciare 50 microlitri di PBS nel pozzetto dopo l'ultimo lavaggio.
L'uso di anticorpi anti-DNA ha permesso il monitoraggio della distribuzione del DNA mitocondriale nella cellula nelle condizioni sperimentali date. La downregulation del TFAM del fattore di trascrizione mitocondriale A ha portato a drastici cambiamenti nella distribuzione del DNA mitocondriale con meno macchie di DNA mitocondriale rispetto alle cellule di controllo. La quantificazione del segnale fluorescente medio dall'anticorpo anti-DNA ha mostrato un aumento di diverse volte dopo il silenziamento TFAM rispetto alle altre condizioni testate.
