Iniziare aggiungendo 500 microlitri di tampone di lisi al pellet di cella A2780 precedentemente ottenuto e mescolare delicatamente utilizzando una punta tagliata con un diametro minimo di apertura di due millimetri. Aggiungere 20 microgrammi per millilitro di RNasi appena preparata e mescolare per inversione delicata. Incubarlo a 37 gradi Celsius per 30 minuti.
Alla fine dell'incubazione, aggiungere la proteinasi K a una concentrazione finale di 100 microgrammi per millilitro e invertire delicatamente 10 volte. Incubare nuovamente a 55 gradi Celsius per un'ora invertendo il tubo ogni 10 minuti. Pipettare 500 microlitri di reagente fenolo:cloroformio:alcool isoamilico nel tubo e capovolgere delicatamente il tubo circa 20 volte.
Centrifugare a 9, 391 G per 15 minuti a temperatura ambiente. Pipettare lo strato viscoso acquoso superiore in un nuovo tubo. Aggiungere un volume uguale di cloroformio e mescolare per inversione delicata.
Dopo aver centrifugato il tubo una volta, raccogliere lo strato acquoso. Aggiungere una quantità appropriata di cloruro di sodio cinque molari nel tubo per aumentare la concentrazione di 0,2 moli. Aggiungere due volumi di etanolo al 100% nel tubo e capovolgerlo delicatamente 20 volte.
Centrifugare a 15, 871 G per cinque minuti a temperatura ambiente. Dopo aver scartato il surnatante, aggiungere 500 microlitri di etanolo al 70%. Centrifugare di nuovo nelle stesse condizioni e quindi eliminare il surnatante.
Una volta asciugato il pellet all'aria, aggiungere 50 microlitri di acqua sterile priva di nucleasi e lasciarlo reidratare. Quindi mescolare il DNA mediante pipettaggio usando la punta tagliata. Utilizzare la spettrofotometria UV per misurare la concentrazione di DNA.
Dopo aver digerito il DNA, separarlo usando lo 0,8% di agarosio. Immergere il gel di agarosio in una soluzione di acido cloridrico da 0,25 molari per 10 minuti a temperatura ambiente con delicata agitazione. Quindi sciacquare il gel due volte con acqua distillata.
Per denaturare il DNA, immergere il gel in una soluzione di idrossido di sodio e cloruro di sodio. Quindi sciacquare il gel due volte con acqua distillata. Per neutralizzare il DNA come dimostrato, immergere il gel in una soluzione di acido cloridrico 0,5 molare e cloruro di sodio tre molari a pH sette.
Il DNA genomico dell'estrattore ha mostrato una buona integrità indicando il suo uso per l'ulteriore elaborazione a valle dei frammenti di restrizione dei telomeri.
