Flow Cytometric Detection of Adipose-Derived Stem Cell Expression Markers

Inizia regolando la concentrazione di sospensione di cellule staminali derivate da cellule staminali adipose murine scongelate usando PBS con siero bovino fetale al 5%. Aliquot 100 microlitri della sospensione contenente 100.000 cellule in un tubo da centrifuga da 1,5 millilitri. Aggiungere le quantità appropriate di anti-CD105 AF594 e anti-CD31 AF680 secondo le istruzioni del produttore.

Incubare per 20 minuti al buio a quattro gradi Celsius. Rimuovere le macchie in eccesso lavando con PBS/FBS e centrifugare a 250 x g per cinque minuti. Risospendere le cellule in 300 microlitri di formalina all'1%.

Crea un grafico a punti facendo clic sul simbolo del poligono per selezionare la sottopopolazione di interesse ed escludere le aree di detriti utilizzando FSC-A rispetto al gating SSC-A. Quindi, fare clic sul simbolo del poligono per generare un nuovo dot plot ed escludere le celle duplex e multiple utilizzando SSC-H rispetto a SSC-A seguito da FSC-H e FSC-A. Utilizzare Y610-mCHERRY rispettivamente per i rivelatori AF594 e R660 APC-A per i fluorofori AF680.

Fare clic sul simbolo del quadrante e impostare la soglia di ciascun rivelatore per le celle di autofluorescenza. Selezionare campioni etichettati con CD105 e popolazione positiva da mostrare su Q1LR. Quindi, scegli campioni etichettati con CD31 e popolazione positiva da mostrare su Q1LR.

L'immunofenotipizzazione ha mostrato che il 98,7% della popolazione cellulare era positivo per CD105, mentre solo il 5,88% esprimeva il marcatore CD31.