Iniziare la filtrazione delle sfere TCPP diluendo 0,8 millilitri della sospensione del tallone TCPP con 3,20 millilitri di soluzione salina bilanciata di Hanks ghiacciata, o HBSS. Vortex la sospensione del tallone diluito alla massima velocità per 15 secondi. Quindi, rimuovere lo stantuffo da una siringa monouso da cinque millilitri e montare la siringa con un filtro a punta in fibra di vetro da cinque micrometri con un diametro di 13 millimetri.
Quindi, aggiungere quattro millilitri di HBSS alla siringa prima di aggiungere 0,5 millilitri della sospensione a sfere diluite a vortice. Utilizzando lo stantuffo, filtrare la sospensione del tallone attraverso il filtro della siringa a circa due gocce al secondo. Quindi, lavare le perle aspirando cinque millilitri di HBSS fresco nella siringa attraverso il filtro e spingendo l'HBSS fuori nel contenitore dei rifiuti a circa due gocce al secondo.
Per rimuovere le perle dal filtro, aspirare altri cinque millilitri di HBSS fresco nella siringa attraverso il filtro. Quindi, rimuovere con cautela il filtro dalla siringa. Dopo aver espulso la sospensione del tallone dalla siringa in un tubo da centrifuga conica da 50 millilitri, riposizionare il filtro fresco sulla siringa e ripetere il lavaggio HBSS da cinque millilitri quattro volte.
Una volta fatto, gettare il filtro e la siringa. Centrifugare le sospensioni di sfere filtrate a temperatura ambiente per 10 minuti a 1.000 g. Aspirare il surnatante da ogni tubo da 50 millilitri.
Risospendere delicatamente le perline e 0,5 millilitri di HBSS fresco. Trasferire le perle combinate con una micropipetta P1000 in un nuovo flaconcino di vetro color ambra e conservare a quattro gradi Celsius. L'effetto di filtrazione su una sospensione di talloni che comprende circa il 66% di particolato è visto qui.
Dopo la filtrazione, il contenuto di particolato è diminuito a circa il 25%Gli effetti negativi della filtrazione sono la perdita di perline e una leggera perdita di intensità della fluorescenza.
