Per iniziare, aggiungere 4,5 millilitri di soluzione di lavoro EDC appena preparata a un tubo di polipropilene da 15 millilitri contenente le perle di polistirene funzionalizzate con ammine e TCPP nel tampone MES. Posizionare il tubo in un rotatore invertente a 35 RPM per 16 ore a temperatura ambiente al riparo dalla luce. Quindi, centrifugare per 10 minuti.
Aspirare il surnatante e risospendere le perle in 0,8 millilitri di soluzione salina bilanciata di Hank. Quindi, utilizzando una pipetta da un millilitro, trasferire la soluzione di perline in una fiala di polipropilene ambrato e conservarla a quattro gradi Celsius. La relazione tra la formazione di particolato, la mediana, l'intensità di fluorescenza o MFI e il rapporto tcp/EDC del tallone ha mostrato che con l'aumentare dei rapporti, l'IFM è aumentato fino a formare un plateau.
Il particolato è apparso solo quando l'EDC è stato utilizzato come reagente di accoppiamento durante la procedura di etichettatura. L'etichettatura delle perle con TCPP da sola ha portato a un'intensità di fluorescenza molto più bassa. Quando le sfere marcate con TCPP sono state testate dopo 300 giorni, non è stato osservato alcun cambiamento significativo nell'MFI o nel contenuto di particolato.
L'accoppiamento di TCPP alle perle ha avuto un effetto minimo sul suo spettro di emissione di fluorescenza. Tuttavia, il suo spettro differiva maggiormente dalle cellule tumorali polmonari A549 marcate con TCPP. In un campione di espettorato multi-flora a quattro marcature, le perle marcate con TCPP hanno funzionato altrettanto bene delle celle A549 colorate con TCPP.
