Inizia coltivando il ceppo K-10 del micobatterio paratubercolosi in flaconi T25 contenenti terreno arricchito per due settimane a 37 gradi Celsius. Valutare regolarmente la crescita della colonia attraverso l'ispezione visiva. Coltivare 200 millilitri della coltura di arricchimento in un pallone erlenmeyer da 500 millilitri in un'incubatrice vibrante per una settimana.
Posizionare le sospensioni batteriche a 70 gradi Celsius per cinque-10 minuti per inattivarle e centrifugarle a 3000G per 10 minuti. Lavare il pellet in 20 millilitri di PBS due volte e centrifugare la sospensione. Trasferire il pellet in un contenitore sterile e congelarlo con azoto liquido.
Trasferire immediatamente il pellet congelato in una camera di liofilizzatore. Dopo la liofilizzazione trasferirlo su un banco di biopulizia. Utilizzando una spatola in acciaio inossidabile rimuovere i grumi MAP essiccati che aderiscono alle pareti interne del contenitore e polverizzarli in polvere fine.
Pesare le cellule polverizzate e posizionarle manualmente in una fiala asettica da 10 millilitri.
