Inizia macinando 10 milligrammi di Mycobacterium paratuberculosis liofilizzato in una polvere fine usando un mortaio e un pestello. Aggiungere cinque millilitri di adiuvante Incomplete Freund per ottenere una soluzione madre da 10 milligrammi per millilitro. Conservare il brodo a meno quattro gradi Celsius.
Prima dell'immunizzazione, diluire la soluzione madre. Quindi, diluire il peptide MOG 35-55 a due milligrammi per millilitro e conservarlo a meno 20 gradi Celsius. Mescolare volumi uguali del MOG 35-55 con l'adiuvante in un tubo da cinque millilitri con un omogeneizzatore fino a formare un'emulsione densa.
Dopo ogni 10 secondi di miscelazione, posizionare la soluzione sul ghiaccio per 20 secondi e ruotare il tubo per recuperare tutta la soluzione. Trasferire l'emulsione in una siringa da un millilitro, assicurandosi che sia priva di bolle d'aria. Quindi, montarlo con un ago calibro 27.
Per via sottocutanea, iniettare 200 microlitri di emulsione nella parte bassa della schiena di un topo anestetizzato. Quindi, iniettare per via intraperitoneale una dose di tossina della pertosse il giorno zero e due dopo l'immunizzazione. Tutti i topi hanno manifestato una malattia monofasica acuta, caratterizzata da un singolo picco di disabilità osservato a 14-17 giorni, seguito da un parziale recupero dei sintomi nei successivi 10 giorni.
I topi immunizzati con M.paratuberculosis hanno mostrato un esordio precoce dopo l'immunizzazione e una maggiore gravità nella fase acuta. Entrambi i gruppi hanno dimostrato pesi corporei simili. Il test di proliferazione con incorporazione timidina titolato eseguito sulle cellule della milza dei topi EAE ha mostrato una forte risposta proliferativa al peptide MOG 35-55, ma non all'ovoalbumina.
L'analisi citofluorometrica ha mostrato un aumento dei linfociti T, delle cellule dendritiche e dei monociti nella milza dei topi EAE immunizzati con M.paratubercolosi rispetto ai topi immunizzati CFA. L'analisi dell'ematossilina e del tessuto di eosina ha rivelato la tipica infiltrazione infiammatoria mononucleare paravascolare e meningea nel cervello e nel midollo spinale.
