Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

Iniziare il protocollo preparando il saggio di taglio mezzi di flusso viscoso. Per fare ciò, preriscaldare il terreno di coltura di base per circa 10-20 minuti a 60-70 gradi Celsius usando un mescolatore magnetico o una piastra calda. Mentre si mescola continuamente il mezzo, aggiungere delicatamente metilcellulosa in esso per aiutare le particelle di metilcellulosa a disperdersi rapidamente senza coagulare.

Lasciare che questo processo continui per circa 15-24 ore per garantire una chiara miscela omogenea di terreni e cellulosa. Per impostare l'apparato di taglio, collegare una guarnizione di gomma al percorso del flusso per fissare il collegamento tra la camera di flusso e la capsula di Petri e garantire un flusso uniforme controllato di singole celle. La guarnizione in gomma è disponibile in diverse dimensioni a seconda del profilo di flusso desiderato e dell'area di osservazione.

Quindi, impostare il sistema di dosaggio a taglio composto da siringhe doppie da 60 o 100 millilitri collegate a una pompa a siringa programmabile per l'infusione e il prelievo del terreno di coltura viscoso. Riempire una siringa con il fluido di flusso viscoso preparato e collegare la siringa riempita alla rispettiva posizione sulla pompa della siringa. Quindi, collegare una siringa vuota all'altra posizione della siringa sulla pompa della siringa.

Utilizzando tubi da 1/16 di pollice e connettori per tubi, collegare entrambe le siringhe alla camera di flusso. Programmare la pompa per infondere e prelevare un certo volume di fluido ad una velocità designata e selezionare le siringhe corrispondenti. Un programma di esempio viene mostrato sullo schermo.

Aspirare il terreno di coltura cellulare dalla capsula di Petri per preparare la cesoia. Quindi, inserire e fissare la camera di flusso con la guarnizione di gomma sulla piastra di Petri contenente le celle collegate. Posizionare la camera di flusso microfluidica dotata con le cellule nel piatto su un microscopio invertito collegato a un monitor del display.

La configurazione è ora pronta per applicare lo stress di taglio del fluido su una singola cella e monitorare otticamente la deformazione cellulare risultante.