Per iniziare, posizionare i topi anestetizzati sulla piattaforma chirurgica. Dopo aver tagliato i capelli, applicare un unguento per gli occhi su entrambi gli occhi per evitare che si secchino. Quindi fissare i topi su un apparato stereotassico per l'immobilizzazione.
Fai una piccola incisione al microscopio per esporre completamente il cranio. Preparare due siringhe da 10 microlitri, una contenente shRNA del recettore AAV2/5-adenosina 2A e l'altra contenente scramble AAV2/5. Quindi utilizzare il microscopio per individuare il bregma e il lambda e impostare il punto di coordinate sulla siringa da 10 microlitri in base all'atlante stereotassico del cervello del topo.
Praticare un piccolo foro nel cranio nel punto di coordinate stabilito. Iniettare due microlitri di virus shRNA del recettore AAV2/5-adenosina 2A nel ventricolo cerebrale tramite iniezione laterale a una velocità costante di 100 nanolitri al minuto. Tenere l'ago in posizione per 10 minuti prima di estrarlo.
Sigillare prontamente la pelle lesa utilizzando colla medica di biofibrina per prevenire la perdita di virus. Posiziona il mouse su un termoforo, mantenendo la temperatura corporea a circa 37 gradi Celsius per facilitare il recupero. Iniettare due microlitri di CRE-TAT Ricombinasi in ciascun ventricolo laterale del topo pomodoro Arosa L-D-L-T-D per il gruppo sperimentale e due microlitri di PBS sterile per il gruppo di controllo.
Due settimane dopo l'iniezione di CRE-TAT Ricombinasi, preparare sezioni di tessuto congelate, eseguire la colorazione nucleare e preparare il vetrino per l'imaging L'abbattimento del recettore dell'adenosina 2A nel plesso coroideo nel topo omozigote flussata del recettore dell'adenosina 2A, utilizzando CRE-TAT, ha portato a una diminuzione dei punteggi clinici EAE. Allo stesso modo, l'abbattimento del plesso coroideo nei topi wild-type del recettore dell'adenosina 2A, utilizzando l'shRNA AAV2/5 ha ridotto i punteggi clinici EAE. L'analisi QPCR ha mostrato che i livelli di mRNA del recettore dell'adenosina 2A sono diminuiti nei gruppi shRNA AAV2/5 e CRE-TAT, rispetto a ciascun controllo.
Silenziando il recettore dell'adenosina 2A, in particolare nel plesso coroideo, si riduce l'infiltrazione delle cellule immunitarie nel midollo spinale.
