Dopo aver fabbricato le nanoparticelle composite di punti di carbonio d'oro, posizionare un chip di zaffiro sterile nelle piastre a 24 pozzetti e nelle cellule di seme con un millilitro di mezzo in un singolo pozzetto. Incubare le piastre in un ambiente umido per raggiungere il 70-80% di confluenza. Aggiungere le nanoparticelle composite dei punti di carbonio d'oro al singolo pozzetto e incubare per quattro-sei ore.
Alla fine dell'incubazione, rimuovere il mezzo dai trucioli di zaffiro. Risciacquare delicatamente i chip con PBS e immergere i chip di zaffiro in PBS per il rilevamento SERS. Per eseguire l'esperimento SERS, accendere il computer, lo spettrometro Raman e il laser a 785 nanometri.
Quindi, avviare il software di accompagnamento ed eseguire la calibrazione utilizzando wafer di silicio. Fare clic su Nuova misurazione seguita da acquisizione spettrale e regolare la gamma dello spettro. Quindi vai alla scheda di acquisizione, regola il tempo di esposizione e la potenza del laser e fai clic su OK per avviare una nuova acquisizione spettrale.
Utilizzare un obiettivo 20X per un'immagine cellulare chiara. Quindi passare a un obiettivo 50X. Dopo aver selezionato un punto sulle celle per la misurazione, fare clic su Esegui per avviare il processo e quindi salvare gli spettri.
Per ottenere l'imaging SERS delle celle A549, fare clic su Nuova acquisizione immagini semplificata, selezionare l'intervallo da fotografare e fare clic su OK. Impostare la linea di scorrimento del bordo su 785 nanometri centro su 1, 200 centimetri inverso, durata dell'esposizione a cinque secondi e potenza laser al 50%Il parametro può essere modificato come richiesto. Fare clic su nuovo di imaging dal vivo, scegliere il segnale alla linea di base e impostare il primo limite su 725 e il secondo limite su 1.700. Quindi vai all'area impostata, imposta i passaggi corretti e fai clic su OK. Infine, fare clic su Esegui per avviare l'esecuzione dell'imaging SERS.
SERS Spectra ha rivelato che anche quando la concentrazione di blu di metilene è bassa da 10 a meno nove molari, le nanoparticelle composite di punti di carbonio d'oro mostrano eccellenti prestazioni SERS rispetto alle nanoparticelle d'oro. Gli spettri SERS acquisiti su 20 punti hanno mostrato un'elevata somiglianza. Un mese dopo il posizionamento delle nanoparticelle composite di punti di carbonio d'oro a quattro gradi Celsius, l'attività media SERS a 950, 1, 185 e 1.620 centimetri inversi ha mostrato un grado di decadimento di circa il 5,43%, 11,44% e 13,94% rispettivamente.
Le nanoparticelle composite di punti di carbonio oro hanno mostrato a malapena citotossicità per le cellule A549. Viene presentato lo spettro medio delle celle A549. Gli aggregati di nanoparticelle composite di punti di carbonio oro mostrano evidenti segnali SERS senza rumore di fondo nella mappatura SERS delle celle A549.
Gli spettri di diversi punti cellulari hanno dimostrato l'eterogeneità dei componenti in varie regioni citoplasmatiche.
