Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

Prima di posizionare il topo anestetizzato sull'inserto per imaging dal vivo installato sul tavolino del microscopio invertito, infilare il tubo dell'isoflurano con l'ogiva attaccata attraverso la staffa angolare del tubo sull'inserto. Dopo aver collegato la piastra riscaldante al controller contenente una sonda termometro anale collegata e averla accesa, trasferire il mouse anestetizzato dalla camera di induzione alla piastra riscaldante. Quindi fissare l'ogiva del naso sul mouse.

Inserire la sonda anale nell'animale e regolare il controller per mantenere una temperatura corporea stabile di circa 36 gradi Celsius. Copri il topo posizionato correttamente con una pellicola trasparente di plastica per intrappolare il calore corporeo ed elevare la temperatura corporea. Posizionare il mouse in modo che la testa sia allineata con il disco coprioggetto e immobilizzare l'orecchio al centro del vetrino utilizzando una clip auricolare metallica o un nastro adesivo.

Dopo aver completato l'imaging, selezionare l'opzione Low Flow sul vaporizzatore elettronico per interrompere l'erogazione di isoflurano. Trasferisci il mouse su un termoforo finché non diventa deambulante. Dopo aver rimosso il disco antiscivolo, pulirlo con carta per lenti e soluzione per lenti.

Conservarlo correttamente per evitare graffi per il riutilizzo. Quindi, staccare il tubo anestetico dalla staffa dell'inserto e svitare l'inserto dal tavolino del microscopio. Le pile Z acquisite di tessuto dell'orecchio di topo vivo etichettato in modo fluorescente hanno mostrato una deriva minima negli assi x, y e z nel tempo, convalidando gli inserti di imaging live stampati in 3D personalizzati.

I punti temporali di un filmato time lapse di tre ore delle cellule epidermiche dell'orecchio di topo mCherry positive di un topo maschio adulto hanno rivelato un singolo piano z che rimane a fuoco per il tempo prolungato. Osservazioni simili sono state fatte da un altro filmato time-lapse di tre ore di fibroblasti dermici dell'orecchio positivi alla GFP di un topo femmina adulta.