Per iniziare il processo di preparazione dell'inoculo batterico, raccogliere da 2 a 10 microlitri del ceppo batterico dal flaconcino, utilizzando un puntale sterile per pipette, e inoculare una piastra di agar di sangue disponibile in commercio. Usando un anello sterile, striare la superficie dell'agar, assottigliandola con fiammeggiatura intermittente. Incubare la piastra di agar preparata in posizione capovolta a 30 gradi Celsius per circa 20-24 ore.
Successivamente, selezionare una singola colonia della coltura batterica con un ago sterile e inoculare cinque millilitri di brodo sterile BHI con questa coltura. Incubare il brodo inoculato in un'incubatrice agitata a 30 gradi Celsius a una velocità di 150 rotazioni al minuto per circa 20-24 ore. Quindi trasferire un millilitro di coltura in una provetta sterile per microcentrifuga e centrifugare a 6.000 g e a temperatura ambiente per 10 minuti.
Dopo la centrifugazione, scartare il surnatante. Aggiungere un millilitro di soluzione salina sterile tamponata con fosfato, o PBS, al pellet e risospenderlo utilizzando un vortice. Centrifugare il pellet risospeso a 6.000 g per 10 minuti a temperatura ambiente ed eliminare il surnatante.
Questa volta risospendere il pellet risultante in brodo BHI sterile e diluito dieci volte utilizzando il vortice. Assicurarsi di ottenere una densità ottica di circa 0,1 a 600 nanometri.
