Per iniziare, aggiungere 200 microlitri di inoculo batterico a ciascun pozzetto di una piastra sterile in polistirene a 96 pozzetti. Quindi aggiungere 200 microlitri di acqua deionizzata nei pozzi più esterni per evitare che i pozzi interni si secchino. Incubare la piastra a 96 pozzetti a 25 gradi Celsius per 24 ore.
Dopo l'incubazione, scartare il surnatante in ciascun pozzetto utilizzando una pipetta. Aggiungere con cautela 300 microlitri di PBS a ciascun pozzetto e rimuovere nuovamente il PBS utilizzando la pipetta. Aggiungere 200 microlitri di soluzione cristallina all'1% in ciascun pozzetto prima di incubare la piastra a temperatura ambiente per 30 minuti.
Quindi, dopo aver erogato 200 microlitri di etanolo assoluto in ciascun pozzetto, lasciare la piastra per 15 minuti a temperatura ambiente. Garantire una miscelazione accurata pipettando ripetutamente il contenuto in ciascun pozzetto su e giù. Utilizzando un lettore di micropiastre, misurare l'assorbanza dei pozzetti a 595 nanometri per determinare la massa del biofilm.
Il numero di biofilm variava notevolmente a seconda dei ceppi, variando da una densità ottica o valore OD di 0,04 a 1,69 Tutti gli isolati di Acetobacter, ad eccezione di A. bouvetii, formavano biofilm, mentre A. radioresistens formava un biofilm debole. A.junii e A.baumannii hanno formato biofilm moderati, mentre A.pittii e A.ursingii hanno formato biofilm forti.
