Iniziare preparando una diluizione da 1 a 20 di inchiostro di china nero e tampone del sistema di glicerolo, quindi centrifugare per 10 minuti a 15.000 g a temperatura ambiente. Aggiungere 40 microlitri di soluzione di inchiostro e tampone del sistema di glicerolo alla prima sezione della piastra a 384 pozzetti. Ora aggiungere 25 microlitri di tampone del sistema glicerolo a tutti i pozzetti di diluizione uno e 40 microlitri a tutti i pozzetti di diluizione due, tre e quattro.
Aggiungere 25 microlitri di campione di glicani estratto ai pozzetti di diluizione per diluire i campioni in un rapporto uno a uno. Diluire in serie ogni campione quattro volte trasferendo 10 microlitri da quello di diluizione a quello di diluizione a due pozzetti, quindi mescolare delicatamente utilizzando una pipetta. Ripetere il processo trasferendo 10 microlitri del campione dalla diluizione due alla diluizione tre pozzetti.
Dopo aver ripetuto il processo per i quattro pozzetti di diluizione, scartare 10 microlitri da esso in modo che tutti i pozzetti abbiano un volume finale di 40 microlitri. Aggiungere 40 microlitri di soluzione di inchiostro e tampone del sistema di glicerolo alla lastra finale. Quindi coprire la piastra con un coperchio adesivo prima di centrifugarla per 10 minuti a 3000 g a temperatura ambiente.
Per stampare i campioni sulla membrana in nitrocellulosa, iniziare spurgando più volte la testina di stampa e i capillari con il tampone del sistema glicerolo. Avviare una tiratura di stampa di prova caricando una lastra con il solo buffer. Per configurare lo strumento in modo che stampi direttamente dal serbatoio del buffer pulito, fare clic su File, seguito da Nuovo, quindi scegliere Ciclo di stampa.
Scegliere il tipo di micropiastra e modificare le impostazioni del vetrino di conseguenza. Successivamente, modificare le impostazioni del mini array prima di modificare le impostazioni delle proprietà spot. Fare clic sulla scheda Panoramica per visualizzare la piastra.
Infine, nella scheda Opzioni, selezionare Utilizzo buffer e calcolare il tempo di stampa prima di allocare le posizioni dei file per salvare il file. Dopo aver salvato la posizione, premere su Avvia tiratura di stampa per procedere con la tiratura. Durante la stampa dei campioni di glicani estratti, programmare il sistema come prima.
Nella scheda Opzioni, fare clic su Utilizzo delle micropiastre di origine. Infine, salvare il file griglia univoco generato per il microarray stampato per l'analisi a valle. Gli standard di glicani definiti sono stati inclusi anche nei microarray stampati come controlli positivi.
Il profilo di legame della mappa ottenuto per gli standard di glicani selezionati corrisponde alle specificità dell'epitopo precedentemente riportate.
