Per iniziare la stampa 3D dei costrutti di idrogel fototable, posizionare la siringa di vetro con il bio-inchiostro idrogel contenente fibroblasti all'interno della testina di stampa e collegare i componenti della testina di stampa garantendo un assemblaggio solido per la stampa. Quindi, utilizzando le frecce direzionali nel software Pronterface, regolare manualmente e con attenzione la posizione dell'ago di estrusione all'interno del liquame del bagno di supporto al centro del pozzetto della piastra del pozzetto. Lasciare almeno un millimetro di impasto liquido sotto la punta dell'ago.
Una volta posizionata correttamente la punta dell'ago, premere il pulsante di stampa nel software Pronterface e attendere il completamento della stampa. Ripetere i passaggi illustrati in precedenza fino a ottenere il numero desiderato di costrutti biostampati. Dopo la stampa, lasciare la piastra del pozzetto con i costrutti coperti a temperatura ambiente nella cabina di biosicurezza per un'ora.
Ciò consente la polimerizzazione catalizzata dalla base con il bio-inchiostro idrogel fototabile. Quindi posizionare la piastra del pozzetto con i costrutti biostampati in 3D in un incubatore sterile a 37 gradi Celsius per 12-18 ore per sciogliere il liquame del bagno di supporto. Successivamente, all'interno di un armadio di biosicurezza, cambia il supporto che circonda i costrutti biostampati.
A tale scopo, rimuovere manualmente il terreno e il bagno di supporto di gelatina fusa dai pozzetti senza disturbare i costrutti. Quindi aggiungere un volume appropriato di terreno a basso contenuto di siero a ciascun pozzetto. Anche in questo caso, 24 ore prima del momento di irrigidimento desiderato, sostituire i terreni nei pozzetti con terreni a basso contenuto di siero integrati con 2,2 millimolari sterili LAP.
Al momento dell'irrigidimento desiderato, rimuovere metà del materiale dai pozzetti da irrigidire e posizionare la piastra senza coperchio sotto la luce ultravioletta o UV di un OmniCure. Accendi la luce UV con un filtro passa-banda a 365 nanometri per irrigidire i costrutti per cinque minuti. Una volta irrigidito, rimuovere il terreno rimanente da questi pozzetti prima di aggiungere terreno fresco a basso contenuto di siero a ciascun pozzetto.
Riportare la piastra nell'incubatrice fino a quando non si esegue lo studio di attivazione dei fibroblasti nel punto temporale desiderato, La combinazione di un bio-inchiostro acido e di un impasto di base del bagno di supporto ha facilitato la polimerizzazione dei costrutti biostampati in 3D e ha mantenuto le strutture cilindriche. La microscopia dell'idrogel marcato con fluorescenza ha mostrato pori all'interno dell'idrogel indotti da microparticelle di gelatina nel bagno di supporto. La microscopia confocale ha mostrato un eccessivo irrigidimento del controllo spaziale in 3D.
I saggi di vitalità dei fibroblasti hanno rivelato che i costrutti con uno spessore della parete di 300 micron e con 4 milioni di cellule per millilitro hanno superato tutte le altre condizioni in ogni momento. La vitalità ha raggiunto il picco il settimo giorno, con circa il 91% delle cellule colorate vive, e al giorno 14, l'85% era ancora vitale.
