Per iniziare, scongelare lo stock di retrovirus RCAS(A)sul ghiaccio. Per evitare di intasare la micropipetta, centrifugare la soluzione a 10.000 g per 10 secondi a quattro gradi Celsius e trasferire il surnatante in una nuova provetta mantenendo le soluzioni in ghiaccio. Posizionare un parafilm da laboratorio allungato su un piatto di coltura cellulare di 35 x 10 millimetri e aggiungere un microlitro di PBS sterile al parafilm.
Collegare una micropipetta di vetro preparata a un iniettore Pico automatico. Premere la modalità di riempimento per riempire il PBS in una micropipetta, quindi premere la modalità di iniezione per testare il microlitro di liquido assegnato. Posizionare un secondo pezzo di parafilm da laboratorio allungato su un nuovo piatto di coltura cellulare e aggiungere un microlitro di materiale virale colorato in verde rapido alla pellicola.
Abbassare la punta della micropipetta nel brodo virale e premere la modalità di riempimento per riempire la micropipetta con un microlitro di brodo virale. Sotto un microscopio da dissezione, abbassare la micropipetta riempita collegata a un iniettore automatico nella regione bersaglio della lente dell'embrione di pollo. Quindi regolare la sorgente luminosa per fornire una visione chiara della vescicola dell'obiettivo.
Dopo essersi assicurati che la micropipetta si trovi nella posizione corretta all'interno del lume del cristallino, iniettare da cinque a 40 nanolitri dello stock virale. Dopo l'iniezione, attendere 45 secondi prima di rimuovere delicatamente la micropipetta. Successivamente, controlla il successo della microiniezione esaminando il colorante verde veloce nel lume vuoto della lente senza perdite.
Dopo l'esame, sigillare l'apertura del guscio d'uovo con dello scotch e mettere le uova in un'incubatrice statica umidificata a 37 gradi Celsius. Questo studio dimostra la valutazione istologica dei loop chimerici 50 e 43 dei connnessi attraverso l'immunofluorescenza. Utilizzando l'etichettatura Anti-Flag, le connessioni esogene sono state distinte da quelle endogene.
Lo studio valuta anche l'interazione tra il dominio dell'ansa intracellulare del connone 50 e l'acquaporina zero.
