Rimuovere il PBST e immergere le carcasse larvali di drosofila fissate con paraformaldeide in un agente bloccante per 40 minuti a temperatura ambiente. Sostituire l'agente bloccante con 200 microlitri dell'anticorpo primario diluito con PBST allo 0,2%. Lasciare incubare le larve a quattro gradi Celsius per una notte.
Il giorno successivo, lavare le larve con PBST allo 0,2% per 10 minuti. Quindi, rimuovere il PBST dalla provetta e aggiungere 200 microlitri di anticorpo secondario diluito. Incubare a temperatura ambiente per 1,5 ore al buio.
Introdurre un colorante nucleare come lo ioduro TO-PRO R 3 nella provetta di incubazione per 30 minuti mentre si colorano i microtubuli al buio. Infine, risciacquare l'anticorpo secondario e il colorante nucleare con PBST allo 0,2% per 10 minuti.
