Per iniziare, centrifugare le cellule CD34-positive isolate e risospendere il pellet cellulare in 300 microlitri di terreno SFM-34 preriscaldato che viene integrato con 4 citochine miste e contare le cellule utilizzando 10 microlitri di sospensione cellulare. Dopo aver contato e risospeso le cellule in un volume finale di 150 microlitri di SFM-34 integrato con citochine, aggiungere 0,5 microlitri di inibitore ROCK. Aspirare lentamente la laminina dai trucioli fluidici posizionando la punta di una pipetta P200 all'interno del serbatoio sul bordo del canale.
Quindi aggiungere la sospensione cellulare nel canale in modo coerente, assicurandosi che non si formino bolle. Incubare il chip per una notte a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica per attaccare completamente le cellule al canale. Quando le cellule endoteliali sono completamente attaccate, aspirare il terreno come descritto in precedenza.
Aggiungere 200 microlitri di SFM-34 integrato con citochine nel chip. Sostituire il terreno ogni giorno fino a quando le cellule raggiungono il 90-100% di confluenza.
