Preparazione di una sospensione cellulare dalle colture cellulari cutanee aderenti

Per iniziare, rimuovere il rispettivo terreno dalle fiasche di coltura contenenti i cheratinociti, i fibroblasti e i melanociti. Lavare delicatamente le cellule con 5-10 millilitri di PBS. Ora aggiungi da 0,5 a due millilitri di soluzione di tripsina-EDTA al pallone, a seconda delle sue dimensioni.

Incubare il pallone a 37 gradi Celsius. Utilizzare un microscopio per controllare il distacco delle cellule dalla superficie. Sospendi le cellule staccate al doppio del volume del neutralizzatore di tripsina per disattivare la tripsina.

Quindi trasferire la sospensione in un tubo da 15 millilitri. Ora pipettare circa 20 microlitri di sospensione di cellule della pelle in una provetta da 1,5 millilitri. Con l'aiuto di un emocitometro, contare le cellule Quindi, centrifugare la provetta a 300 g per cinque minuti a temperatura ambiente.

Quindi pipettare la maggior parte del surnatante e risospendere il pellet cellulare nella piccola quantità di liquido rimanente. Aggiungere un volume uguale di terreno fresco alle cellule risospese. In una provetta separata da 15 millilitri, preparare la sospensione cellulare.

Le cellule primarie di cheratinociti, melanociti, fibroblasti e mastociti presentavano la loro morfologia tipica quando venivano coltivate nei rispettivi mezzi.