Per iniziare il metodo della goccia sospesa, pipettare 20 microlitri di una sospensione di cellule cutanee pre-preparata sul coperchio di una capsula di Petri. Ora, copri il coperchio con la metà inferiore della capsula di Petri e girala delicatamente per creare le gocce pendenti. Aggiungere acqua sterile alla capsula di Petri per evitare l'evaporazione del terreno adulto dalle goccioline.
Incubare le goccioline per 48-72 ore a 37 gradi Celsius. Quindi, riempi i pozzetti di una nuova piastra con il terreno di coltura completo. Utilizzando i puntali delle pipette tagliati sterili, trasferire le sfere cellulari nei pozzetti della piastra a più pozzetti.
Incubare le sfere trasferite per un giorno nella piastra multipozzetto a 37 gradi Celsius prima dell'esperimento. Per il metodo di adesione cellulare limitante, aggiungere prima 100 microlitri di soluzione di tensioattivo all'1% in PBS in ciascun pozzetto di una piastra con fondo a U. Quindi, incubare la piastra con la soluzione a 37 gradi Celsius per 24 ore.
Ora, preparare la sospensione cellulare nella densità cellulare desiderata. Pipettare la soluzione di tensioattivo dai pozzetti, quindi seminare 50 microlitri di sospensione cellulare in ciascun pozzetto. Infine, incubare la piastra a 37 gradi Celsius per 24 ore per raggiungere gli aggregati cellulari.
Le sfere composte da 10.000 cellule erano più facili da manipolare, poiché erano visibili nei pozzetti. Le sfere più grandi hanno mostrato una minore stabilità. Diversi tipi di cellule formavano sfere di colori diversi.
Le sfere perfettamente arrotondate tendevano a perdere la loro forma durante il trasferimento con il metodo della goccia sospesa. Era necessaria una manipolazione accurata per ridurre la deformazione con conseguente integrità degli aggregati cellulari. L'imprecisione e l'inesperienza provocarono danni alla sfera.
