Per iniziare, mescola acqua, 10 volte PBS concentrato e un idrossido di sodio molare in un tubo. Quindi, pipettare 500 microlitri di soluzioni di cellule dermiche adeguatamente dense in una provetta da due millilitri. Centrifugare la soluzione a 300 g per tre minuti a temperatura ambiente.
Una volta completata la centrifugazione, pipettare il surnatante e risospendere delicatamente le cellule in una miscela di acqua, PBS e idrossido di sodio. Ora, aggiungi 200 microlitri di soluzione di collagene alla miscela. Pipettare la sospensione per mescolarla bene.
Quindi, pipettare 500 microlitri della miscela preparata in un inserto in una piastra a 24 pozzetti. Per un modello senza strato corneo, pipettare 500 microlitri della miscela in un pozzetto senza inserto. Dopo aver incubato la piastra per 10 minuti a temperatura ambiente, trasferirla in un'incubatrice per 30 minuti.
Pipettare 500 microlitri di PBS tamponati in ogni pozzetto per risciacquare la superficie dell'idrogel. Successivamente, mescolare 200 microlitri di sospensione di cheratinociti con un volume uguale di sospensione di melanociti nel terreno DMEM integrato. Pipettare delicatamente 500 microlitri della sospensione cellulare totale in ciascun pozzetto.
Incubare le piastre a 37 gradi Celsius per due-cinque giorni. Sostituire il terreno ogni 48 ore e utilizzare un microscopio ottico per monitorare la crescita cellulare. È stato creato un modello 3D equivalente con derma ed epidermide distinguibili, che poteva essere monitorato in tempo reale.
Sono stati osservati cheratinociti in diversi stadi di crescita cellulare, che sono indicatori di un equivalente vivente. Sono stati osservati anche mastociti con granuli riconoscibili.
