Per iniziare, rivestire un ago a farfalla e il suo tubo con una soluzione di EDTA all'1% di potassio. Tagliare il tubo appena dietro l'ago per raccogliere il sangue goccia a goccia. Posizionare un ratto anestetizzato sul telaio stereotassico mantenendo l'anestesia attraverso una maschera facciale.
Metti un termoforo sotto l'animale, mantenendo una parte della sua coda a diretto contatto con il tappetino. Sposta gli animali indietro in modo che siano rivolti lateralmente e la vena caudale laterale sia visibile in alto. Immergere la coda in acqua tiepida per dilatare la vena laterale.
Quindi pulire la coda con etanolo al 70%. Metti una luce calda sulla coda usando una normale lampadina a incandescenza. Inserire l'ago a farfalla 21G nella vena caudale laterale con un angolo di 20 gradi a una profondità di cinque millimetri.
Successivamente, raccogliere il sangue in una provetta di raccolta sottovuoto da 500 microlitri contenente cinque milligrammi di EDTA di potassio come anticoagulante. Rimuovere l'ago e interrompere il flusso sanguigno esercitando pressione sul sito della puntura. Riporta il ratto nella sua gabbia di casa.
Quindi, capovolgere delicatamente la provetta 10 volte per mescolare l'anticoagulante nel sangue. Fai dei buchi profondi 1,5 centimetri nel ghiaccio e posiziona i tubi verticalmente. Entro un'ora dalla raccolta, centrifugare il campione di sangue in una centrifuga refrigerata per separare il plasma.
Quindi aspirare circa 200 microlitri di plasma, evitando lo strato di globuli rossi e bianchi. Mettere il plasma prelevato in una microprovetta sterile da 0,2 millilitri. Mettere da parte cinque microlitri del campione per il controllo di qualità e conservare il campione rimanente a meno 80 gradi Celsius fino all'analisi.
Il sangue è stato prelevato dai ratti in cinque momenti utilizzando metodi diversi, come la tecnica del vuoto il giorno 52, la mungitura della coda il giorno 55 e le tecniche di goccia nei giorni da 58 a 64. La qualità dei campioni di plasma valutati utilizzando la spettrofotometria UV ha mostrato che il plasma era di colore rosa con un valore medio di assorbanza di 0,647 quando si utilizzava la tecnica del vuoto. Allo stesso modo, la tecnica di mungitura della coda ha prodotto plasma di colore rosa con un'assorbanza media di 0,620.
Al contrario, con il sistema di prelievo a goccia abilitato dalla gravità, sono stati ottenuti campioni di plasma trasparenti con valori medi di assorbanza plasmatica significativamente ridotti, suggerendo che questa procedura è ottimale per ottenere campioni di alta qualità per le analisi.
