Per iniziare, trasferire 70 millilitri di Dulbecco's Modified Eagle Medium preriscaldato in una capsula di Petri in una cabina di biosicurezza sterile e aggiungere desametasone a una concentrazione di 100 nano molari. Assemblare gli strumenti chirurgici necessari per la dissezione, che include pinze lisce, diritte e a punta fine. Pinze diritte a punta fine con denti seghettati e forbici dritte e affilate.
Per sezionare gli espianti degli arti posteriori. Individua l'articolazione dell'anca di un topo sottoposto a eutanasia posizionato supino sul piano del banco rivestito con assorbenti sotto. Usa delle forbici sottili per creare una piccola incisione sulla pelle che copra gli aspetti prossimale e anteriore della parte superiore della gamba.
Quindi usa le dita per separare l'incisione per espandere e pizzicare la parte superiore della gamba esposta. Tirare con cautela la pelle distalmente per togliere il guanto all'arto posteriore all'altezza della caviglia. Inserire delicatamente una lama a forbice sotto la pelle lungo la parte dorsale del piede.
Quindi praticare un'incisione che si estende verso le dita dei piedi e continuare a tirare la pelle distalmente fino a quando non viene completamente rimossa. Posizionare il mouse in modo da avere una visione chiara dell'inserzione del tendine d'Achille sulla faccia posteriore del calcagno vicino alla caviglia. Per rimuovere il tendine del terrazzo della pianta, inserire una punta della pinza liscia a punta fine tra i due tendini.
Passare la punta medialmente sotto il tendine plantare. Quindi tiralo prossimalmente per strappare il muscolo plantare. Quindi, utilizzando una pinza seghettata a punta fine, afferrare l'estremità prossimale staccata del tendine plantare e tirarla distalmente per rimuoverla completamente.
All'articolazione dell'anca, utilizzare forbici sottili per tagliare con precisione il bacino, isolando l'arto posteriore. Usa le forbici per rimuovere delicatamente il bacino rimanente, rivelando la testa del femore. Nella cabina di biosicurezza, trasferire l'espianto dell'arto posteriore nella capsula contenente terreno di coltura cellulare e desametasone.
Riposizionare la capsula nell'incubatrice e sottoporla a pretrattamento per 48 ore.
