Per iniziare, preriscaldare una quantità adeguata di terreni di coltura sterili mentre il pretrattamento di 48 ore con desametasone dell'espianto murino degli arti posteriori sta per essere completato. Una volta terminato il pretrattamento, spostare gli espianti pretrattati nella cabina di biosicurezza. Per il gruppo scarico, aspirare i terreni di pretrattamento e trasferire gli espianti in piastre di Petri fresche.
Aggiungere 70 millilitri di terreno di coltura a ciascuna piastra prima di rimetterla nell'incubatrice. Per preparare le piattaforme di espianto per il gruppo di tensione di base e impatto statico, tagliare pezzi di carta vetrata in modo che corrispondano alle dimensioni delle piastre di presa. Per il gruppo di impingement statico, tagliare pezzi di filo intrecciato e fare un nodo a rovescio sciolto a metà della lunghezza del filo.
Strappare pezzi di foglio di alluminio per coprire ogni bagno acrilico e spruzzarli con etanolo al 70%. Trasferire i componenti preparati nella cabina di biosicurezza. Disporre i componenti come il bagno acrilico, la base, gli inserti di riduzione del volume, la clip e le impugnature per il montaggio della piattaforma.
Collocare i componenti della piattaforma all'interno di contenitori secondari di volume sufficiente a contenere eventuali perdite di terreno di coltura. Immergere i contenitori in una soluzione di almeno il 10% di candeggina per almeno un'ora. Sciacquare le soluzioni di candeggina con acqua di rubinetto.
Dopo aver trasferito i componenti risciacquati nella cabina di biosicurezza, utilizzare viti M3 e molle di compressione per fissare le piastre alle impugnature. Fissare saldamente le impugnature alla base utilizzando una vite M5 e inserire le viti M6 fino a quando non entrano in contatto con le piastre. Migliora la funzionalità dei piani applicando carta vetrata con nastro biadesivo.
Chiudere le impugnature per facilitare l'adesione della carta vetrata alle piastre. Per caricare una piattaforma, aprire completamente le impugnature e utilizzare le pinze per posizionare con cura la parte superiore della gamba e il ginocchio tra le piastre. Chiudere delicatamente le impugnature per tenere l'arto in posizione.
Utilizzare una pinza per afferrare la testa o il piede del femore esposto e regolare l'angolo di flessione del ginocchio, chiudendo gradualmente la pinza per fissarla in posizione. Per il gruppo di tensione di base, estendere l'articolazione del ginocchio mentre si chiudono le impugnature. Nel caso del gruppo di impingement statico, flettere l'articolazione del ginocchio mentre si chiudono le impugnature.
Per il gruppo di impingement statico, posizionare il nodo a rovescio della corda attorno alla zampa distale e stringerlo saldamente. Instradare lo spago attraverso una fessura nella base sotto l'espianto e attraverso il foro della clip. Posizionare la base nel bagno acrilico e fissare la clip al bordo superiore del bagno.
Per flettere dorsalmente il piede, tirare la corda fino a raggiungere almeno 110 gradi rispetto alla tibia. Usa un pennarello indelebile per contrassegnare la corda mentre esce dalla clip. Scatta una fotografia dell'espianto in questa posizione dorsale per una futura quantificazione dell'angolo di flessione dorsale.
Rimuovere la base dalla configurazione e fissare l'inserto di riduzione del volume facendolo scorrere lungo un binario sulla base. Riposizionare la base nel bagno acrilico e riposizionare la clip sul bordo superiore. Usa la stringa contrassegnata come guida.
Tirarlo per riportare il piede al suo angolo di flessione dorsale originale e fissare la corda all'esterno della vasca utilizzando del nastro adesivo per mantenere una posizione dorsale statica. Per il gruppo di tensione della linea di base, una volta posizionato l'espianto tra le impugnature, scattare una fotografia per quantificare l'angolo di flessione dorsale. Quindi far scorrere l'inserto di riduzione del volume sulla base e posizionarlo nel bagno acrilico.
Aggiungere 125 millilitri di terreno di coltura preriscaldato a ciascuna piattaforma per immergere gli espianti. Dopo aver coperto la parte superiore del bagno con un foglio di alluminio, posizionare l'intera configurazione in un contenitore secondario. Riposizionare il contenitore secondario nell'incubatrice e nella coltura per sette giorni.
