Per preparare la soluzione di inchiostro biologico, mescolare una quantità appropriata di sospensione cellulare C3A con la soluzione gelMA sterilizzata. Colorare gli sferoidi cellulari C3A con una soluzione di inseguimento di cellule micromolari a 37 gradi per 20 minuti. Per lavare le cellule, rimuovere prima la supernatina mediante centrifugazione e quindi aggiungere terreno di coltura cellulare fresco.
Aggiungere almeno due millilitri di inchiostro biologico nella camera del dispositivo acustico sterilizzato. Accendere il generatore di funzioni e l'amplificatore di potenza per avviare l'azionamento di ciascun trasduttore PZT per generare un array 3D di aggregati di celle. Reticolare il bioinchiostro utilizzando la luce blu per 30 secondi per creare scaffold in idrogel 3D, incapsulando acusticamente gli aggregati cellulari assemblati.
Successivamente, trasferire con cautela l'impalcatura di idrogel 3D dalla camera in una capsula di Petri. Taglialo a pezzetti usando un rasoio pulito, quindi aggiungi il terreno di coltura cellulare nella capsula di Petri. Incubare gli sferoidi delle cellule C3A in diversi momenti di coltura in un millilitro di PBS contenente un microlitro di calcio am e due microlitri di ioduro di propidio per 15 minuti a 37 gradi Celsius.
Sciacquare due volte il campione incorporato negli scaffold in idrogel con PBS. Per gli sferoidi recuperati, eseguire la centrifugazione a 200 G per cinque minuti e lavare due volte con PBS. Utilizzando un microscopio a fluorescenza, osservare gli sferoidi e catturare le immagini.
Gli aggregati cellulari sono stati disposti secondo il normale schema di array di punti 3D con un segnale fluorescente verde. Gli aggregati di gelMA C3A assemblati si sono gradualmente integrati e hanno formato sferoidi stretti entro il terzo giorno, accompagnati da un aumento del diametro dello sferoide. La vitalità degli sferoidi cellulari è rimasta buona prima del terzo giorno, ma è leggermente diminuita dopo una settimana di coltura.
Gli sferoidi rilasciati hanno mantenuto una buona morfologia sferica con una distribuzione dimensionale ristretta insieme a una vitalità e un'espressione desiderabili di albumina.
